实时荧光定量PCR技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的一种高度接触性传染病,尤其是对母猪,该病毒严重影响其繁殖性能。实时荧光定量PCR以其快速、可靠的诊断技术,为检测和诊断PRRSV开辟了新方法。文内对国内外实时荧光定量PCR技术在PRRSV研究中的应用作了综述。     

浦东白猪Nramp1基因第6内含子独特突变位点分析

Nramp1是学术界近年研究的猪重要抗病基因之一,其第6内含子作为Nramp1的分型重点片段,国内外的诸多猪种均有清晰的测序分析结果。本研究通过提取浦东白猪血液组织DNA,使用PCR技术分离和克隆Nramp1基因的第6内含子基因片段,测序后与以往文献中的其他猪种进行比较。结果发现,浦东白猪在该段基因中有3个特异的突变点普遍存在,分别是259 bp的A→G突变,331 bp的G→A突变和29 bp后1~2个T碱基的插入。这些突变的发现可以为浦东白猪的育种和Nramp1的抗病性研究提供遗传数据。     

关岭牛MyoD Ⅰ基因在不同组织和时期中的表达分析

为研究MyoDⅠ基因在关岭牛不同组织表达量的差异及在肌肉发育过程中的表达情况,试验采用实时荧光定量PCR技术对关岭牛背最长肌、大腿肌、心脏、肝脏、脂肪、小肠6个组织的MyoDⅠ基因相对表达量进行检测。同时分析关岭牛胎儿、18月龄、30月龄时期背最长肌组织中MyoDⅠ基因的表达规律。结果显示,MyoDⅠ基因在背最长肌中表达量最高,在出生后的关岭牛肌肉组织中也具有较高的表达量,且随着出生时间的推移呈上升趋势。推测可能由于背最长肌是肌肉富集地方,因此基因表达量较高,随着年龄增大,肌肉丰满度增加,基因表达量也随着增加。     

未来中国农牧行业之变革

<正>我国农业正经历粮食安全与食品安全双重危机,也同时经历经营主体、经营体制的双重变革。1我国农业之困境和变革目前中国农业面临着两大困局和三个变革:困局一,粮食安全;困局二,食品安全。为了解决这两大问题,我们国家农业也面临着三个变革:第一,农村土地的加速流转,截止至2014年6月份,中国承包土地的流转已达到3.8亿亩,流转率达到28.8%。第二,随着新的土地流转政策的实施,未来农业的经营主体也会改变,而不是当前一些老龄化的农民。第三,商业模式的变革,很多企业在进行互联网     

桤木群体遗传分化研究I.DNA提取和PCR条件的建立

桤木(ＡｌｎｕｓｃｒｅｍａｓｔｏｇｙｎｅＢｕｒｋ)为桦木科(Ｂｅｔｕｌａｃｅａｅ)植物,主要分布于四川盆地及其周边地区。桤木喜光、喜湿,根系发达,对土壤要求不严,适应性强,在长江中下游地区防护林建设中具有重要作用。国外对桤木属(Ａｌｎｕｓ)植物的研究起步较早,主要集中于生理生化方面包括生长、固Ｎ、抗涝性以及种间杂交研究等[1　3]。虽有学者利用ＲＦＬＰ研究其核糖体ＤＮＡ的基因结构、以同工酶技术研究桤木属的群体遗传变异[4　6],但未见应用ＲＡＰＤ技术的研究报道。随着现代生物技术的发展,生物多样性的检测技术日趋成熟和多…     

枫香DNA提取方法与PCR扩增程序的优化

从SDS、CTAB、高盐低pH值3种方法中选择了CTAB法作为枫香适合的DNA提取方法,同时构建了枫香DNA的PCR扩增程序,并从Mg^ 浓度、Taq酶用量、dNTP浓度、引物浓度、DNA模板用量等方面优化了PCR扩增程序。     

松材线虫纤维素酶的免疫学分析

制备松材线虫特定纤维素酶的多克隆抗体(Anti-BXC60),通过SDS-PAGE、纤维索酶酶染分析、免疫印迹以及ELISA方法考察该抗血清的特异性.进一步利用抗松材线虫全蛋白抗体(Anti-BX)和Anti-BXC60抗体,建立线虫分泌性蛋白在PVDF膜上双重染色的方法.双重染色分析的结果表明:松材线虫主要通过分泌孔向体外分泌大量的分泌蛋白,而纤维素酶的分泌方式与其他植物线虫相似,是通过口针向外分泌.     

四种桉树青枯菌DNA提取方法及PCR检测灵敏度比较

以带有青枯菌Ralstonia solanacearum的桉树组织为材料,采用4种不同的提取方法抽提青枯菌DNA,同时利用青枯菌的特异性引物进行PCR扩增,比较了4种DNA的提取方法及PCR检测的灵敏度。结果表明,煮沸法和热裂解法操作相对简单,但检测灵敏度较低,检测限分别为104CFU/mL和103CFU/mL;简化提取法和试剂盒法检测效果较好,均可检测到102CFU/mL的青枯菌;简化提取法比试剂盒法操作更简单,检测成本低,具有更高的应用价值。     

PCR法克隆紫穗槐4-香豆酸:CoA连接酶全长cDNA

4 香豆酸 :CoA连接酶 (4CL)是木质素生物合成过程中重要的酶 .该文利用简并寡核苷酸PCR法结合cDNA末端快速扩增PCR法直接获得了紫穗槐 4CLAcDNA全长序列 ,避免了复杂的构建、筛选cDNA文库的过程 .先用简并PCR得到了 4CLA1片段 ,又据此片段设计反向嵌套引物 ,用RACE方法获得未知的 5′和 3′端序列 .所获得的全长 4CLAcDNA ,编码 5 40个氨基酸 .氨基酸序列同源性分析表明4CLA是典型的 4CL蛋白 ,含有预计的AMP binding位点、催化反应区和保守的Cys .     

SAMDC基因对一串红侧枝发育的影响

以一串红35及35-1为试验材料,采用实时荧光定量PCR技术,研究了S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)基因在35及35-1不同发育时期、不同部位的表达情况。结果表明:幼苗期腋芽未形成和腋芽形成后35中SAMDC基因的相对表达量均低于35-1;营养生长期35的茎节、根尖及侧枝顶芽中SAMDC的表达量均高于35-1,且差异显著。试验表明,SAMDC在一串红幼苗顶芽中相对表达量高,可促进植株细胞分裂分化形成侧芽;营养生长期SAMDC相对表达量低,可促进分支和枝条伸长生长。