传染性造血器官坏死病灭活疫苗的制备及免疫保护效果

为了研发用于预防传染性造血器官坏死病(infectious hematopoietic necrosis,IHN)灭活疫苗,实验以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)在胖头鱥上皮细胞(Epithelioma papulosum cyprinid,EPC)上对传染性造血器官坏死病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)进行连续传代培养,通过测定各代病毒滴度,结合病毒收获时间确定最佳增殖方案;采用不同浓度的β-丙内酯(β-propanolactone,BPL)在24℃下灭活,经安全性实验验证后确定最佳灭活条件。以不同剂量腹腔注射免疫虹鳟,以磷酸盐缓冲溶液(PBS)为阴性对照组,通过检测攻毒后相对免疫保护率(relative percent survival,RPS)、免疫相关因子表达量及血清中和抗体效价来分析该疫苗的保护效果。结果显示,最佳增殖方案为以MOI为0.000 1接种,15℃培养3 d;最佳灭活条件为以终浓度3.0 mmol/L的BPL将IHNV在24℃下灭活24 h;以最佳免疫剂量10μL/尾腹腔注射免疫虹鳟,免疫后7、21、45和60 d的相对免疫保护率分别为91.37%、84.28%、84.15%和47.5%,免疫后60 d时RPS显著低于其他时间点免疫组;免疫相关基因的实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR,RT-qPCR)结果显示,与阴性对照组相比,Mx-1和IFN-γ表达量在免疫后7、15和30 d脾脏和头肾中均显著上调,在第7天时达到最大值(5倍);CD4和IgM表达量在免疫后15 d脾脏和头肾中均显著上调;在免疫后第30、45和60天虹鳟血清IHNV中和抗体效价依次为67.25、43.40和29.78,呈下降趋势且各组间差异显著。研究表明,该灭活疫苗可诱导虹鳟产生特异性免疫和非特异性免疫反应,对虹鳟具有显著的免疫保护作用。本研究为IHNV灭活疫苗研发提供参考。     

硝基苯染毒后鲤鱼Na~+,K~+-ATP、GSH-PX酶活性及MDA含量的恢复

将试验鱼暴露在硝基苯质量浓度为100×0.017,50×0.017,25×0.017,12.5×0.017,6.25×0.017,0 mg/L的水体中,72 h后置于清水中,于1,2,3,4,5,9,14 d分别取样,测定其对硝基苯敏感的生化指标:鳃Na+,K+-ATP酶、肝谷胱甘肽过氧化物酶和血清丙二醛.结果表明:硝基苯质量浓度低于12.5×0.017 mg/L时,鳃Na+、K+-ATP酶的活力基本保持不变,而达到25×0.017 mg/L时,鳃Na+、K+-ATP酶的活力开始较明显地降低;质量浓度超过12.5×0.017 mg/L时,GSH-PX活力一直表现为诱导作用;高浓度组(25×0.017,50×0.017,100×0.017 mg/L)与对照组相比MDA含量显著提高(P<0.05),至第4 d则与对照组没有明显变化.硝基苯染毒浓度越大,对鲤鱼影响越明显,染毒浓度越大,鲤鱼恢复正常所需的时间也就越长.     

甲苯咪唑在鲫体内的药动学及残留消除研究

在水温(20±0.5)℃下,给体质量(50±10)g的鲫Carassius auratus单剂量口灌20mg/kg(体质量)甲苯咪唑后0.25h、0.5h、0.75h、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、12h、24h、36h、48h,及72h,采集鲫血浆,利用高效液相色谱法测定血浆中药物的浓度,药动学DAS3.0软件进行数据分析和处理,研究甲苯咪唑在鱼体内的吸收和消除规律。结果表明:单次口灌给药后,甲苯咪唑在血浆中的药时关系符合一级吸收二室开放模型。每天给药一次,连续3d,氨基甲苯咪唑(MBZ-NH2)于25d后低于检测限(0.0465μg/m L)。在本试验条件下,建议休药期不低于25d。     

三北地区鱼源气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

选取三北地区鲤、鲫、草鱼、大西洋鲑等鱼体内分离到的气单胞菌共16株,结合革兰氏染色、氧化酶反应和分子生物学方法对其进行鉴定后,采用K-B药敏纸片法测定16株菌对10类25种药物的敏感性。结果表明:16株菌均为革兰氏阴性、氧化酶阳性细菌;Blast比对分析发现实验菌株的16S rRNA序列分别与Gen Bank数据库中维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和杀鲑气单胞菌的不同菌株的16S rRNA基因序列同源性较高,相似性达95%以上;系统发育树显示16株菌分别与维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和杀鲑气单胞菌的不同菌株聚为一支,而与肠杆菌、志贺菌和弧菌分支较远,从而判定为维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和杀鲑气单胞菌;16株分离菌中有3株维氏气单胞菌、4株嗜水气单胞菌、3株温和气单胞菌和6株杀鲑气单胞菌;药敏试验中16株气单胞菌对氨苄西林、青霉素G、阿莫西林、三甲氧苄氨啶、复方新诺明、磺胺异噁唑、氯霉素、利福平具有较高的耐药性,耐药率达95%以上,对氟喹诺酮类药物普遍较敏感,不同菌株之间的耐药谱存在很大差异。为气单胞菌的鉴定及三北地区淡水鱼细菌病的药物防治提供科学依据。     

两种给药方式下伊维菌素在虹鳟体内的药物代谢动力学研究

研究旨在通过口灌和腹腔注射两种给药方式,研究伊维菌素在虹鳟体内的药动学特征。采用高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）研究了以0.3 mg/kg剂量分别单次口灌和腹腔注射伊维菌素后,药物在虹鳟体内的药代动力学特征。结果表明：口灌给药方式下,伊维菌素在虹鳟血浆、肌肉中的药物浓度和时间关系符合一级吸收二室开放模型,而在肝脏、肾脏中符合一级吸收一室开放模型;腹腔注射给药方式下,伊维菌素在虹鳟血浆、肌肉、肝脏和肾脏中的药时关系均符合一级吸收一室开放模型。口灌给药后,伊维菌素在血浆中主要的药动学参数：AUC为123.709 mg/(L?h)、Ka为3.749 h^-1、t_1/2ke为 466.569 h、T_max为0.454 h、C_max为0.319 mg/L。腹腔注射给药后,伊维菌素在血浆中主要的药动学参数：AUC为52.560 mg/(L?h)、Ka为5.033 h^-1、t_1/2ke为103.236 h、T_max为1.317 h、C_max为0.350 mg/L。说明在两种给药方式下,伊维菌素在虹鳟体内的药动学特征存在明显的差异,伊维菌素在腹腔注射给药方式下吸收和消除速率均较口灌给要快。     

氟苯尼考在感染鲁氏耶尔森氏菌的西伯利亚鲟体内的药效学

通过构建鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)感染西伯利亚鲟(Acipenser baeri)病理模型,设立阴性对照组(不攻菌不给药)及阳性对照组(攻菌不给药),比较研究了高(50 mg.kg-1)、中(20 mg.kg-1)、低(5 mg.kg-1)氟苯尼考剂量治疗组和氯霉素(10 mg.kg-1)对照组西伯利亚鲟体内的药效学。连续给药3天后,阴性对照组和阳性对照组累计死亡率分别为0%和50%,表明病理模型构建成功;而氟苯尼考低、中、高剂量组和治疗对照组累计死亡率分别为30%、0%、0%、10%。愈后各实验组鱼血液中均无细菌感染;除阴性对照组外,鱼肝、肾组织中均可分离到鲁氏菌,但不致鱼死亡。实验结果表明,氟苯尼考对感染鲁氏耶尔森氏菌的西伯利亚鲟有较好的治疗作用,药效优于氯霉素,可用于治疗鱼类细菌性疾病。     

三种复方中草药对鲫血清、肝胰脏及脾脏中溶菌酶活性的影响

在水温18℃下研究了三种复方中药（AB、CD、AH）作为饲料免疫添加剂对体质量（44.6±0.2）g 1＋龄健康鲫（Carassius auratus）血清、肝胰脏和脾脏中溶菌酶活性的影响。试验鱼分为3组,每天按体质量的2.0%分别投喂添加了3种中药复方的饲料,对照组投喂基础饲料,每组均设相同数量的鱼做平行,连续饲喂28 d,停食1d后采集血液及组织样品,测定溶菌酶活性。结果显示：3种复方中药都能提高鲫体内溶菌酶活性。其中AB组提高血清中溶菌酶活性效果显著,AB、CD组对肝胰脏中溶菌酶活性的提升效果显著,3种复方中药对鲫脾脏中溶菌酶活性的提升均效果显著,说明3种复方中药均可增强鲫免疫力,有进一步研究和应用的价值,但对不同组织溶菌酶活性的影响不同,提示中药作用效果和机理的差异。     

氯霉素类药物的药理学在水产动物中的研究现状

氯霉素类药物因具有吸收良好、价格便宜、抑菌性强和体内分布广泛,广泛应用于水产动物疾病防控。本文主要介绍了氯霉素类药物的研究现状,主要包括氯霉素类药物的特点、作用机理、检测方法研究进展、体内分布、体内代谢研究和体外药代动力学研究,目的为氯霉素类药物的使用提供参考。     

恩诺沙星对2种鲟GST和GSH酶系活性影响的比较

将恩诺沙星(enrofloxacin)按照0、20、40、60、80、100 mg/kg的浓度,对小体鲟及史氏鲟口服给药5d,停药2d后对其血浆及肝脏组织中GST活性及GSH含量进行测定.结果表明:2种鲟血浆和肝脏组织中GST活性和GSH含量均随着给药浓度升高呈现先升高再降低的规律性变化,并在40 mg/kg给药浓度时达到最大值,小体鲟血浆及肝脏中GST活性分别为23.235、68.670 U/mgpro,GSH含量分别为27.616、39.317 mg/g pro;史氏鲟分别为42.835、101.835 U/mg pro,27.852、51.192 mg/g pro.2种鲟肝脏组织中GST和GSH酶系的变化幅度明显大于血浆中,且史氏鲟血浆和肝脏组织在各给药浓度下GST活性和GSH含量均高于小体鲟.     

传染性造血器官坏死病毒-Sn株基质蛋白基因克隆及生物信息学分析

基质蛋白(matrix protein,M)是传染性造血器官坏死病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)主要结构蛋白之一,是病毒感染后造成细胞凋亡的主要作用蛋白。为分析IHNV M蛋白的序列及结构特征,研究利用敏感细胞(EPC)培养传染性造血器官坏死病毒-Sn分离株(IHNV-Sn),根据M蛋白基因开放阅读框(open reading frame,ORF)的序列设计引物,利用RT-PCR的方法克隆得到M蛋白全长ORF,并且构建至表达载体pET27b(+)中,构建出pET27-M重组质粒。生物信息学分析结果显示,M蛋白基因的序列长度为588 bp,编码195个氨基酸残基,推导分子量约为21.88 ku,等电点为9.35;氨基酸序列分析表明,M蛋白富含丝氨酸、苏氨酸以及碱性氨基酸,存在丰富的α-螺旋、β折叠和无规则卷曲;M蛋白不含有信号肽;疏水性大于亲水性;没有跨膜区存在;抗原表位预测显示抗原性良好;结构预测显示,不存在N-糖基化位点,存在7个潜在的O-糖基化位点和15个潜在的磷酸化位点。系统进化树分析显示,IHNV-Sn株与美国分离株同为一簇。