| 传染性造血器官坏死病灭活疫苗的制备及免疫保护效果 |
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| 引用本文： | 陈桂花,徐黎明,赵景壮,任广明,邵轶智,卢彤岩.传染性造血器官坏死病灭活疫苗的制备及免疫保护效果[J].水产学报,2021,45(11):1909-1920. |
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| 作者姓名： | 陈桂花 徐黎明 赵景壮 任广明 邵轶智 卢彤岩 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江省水产动物疾病与免疫技术重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150070;上海海洋大学，水产科学国家级实验教学示范中心，上海 201306 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31802345)；国家重点研发计划(2019YFE0115500)；中央公益性事业单位基本科研业务费专项(HSY2019M，2020GH05)；中国博士后科学基金(2018M630893，2019T12027) |
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| 摘 要： | 为了研发用于预防传染性造血器官坏死病(infectious hematopoietic necrosis,IHN)灭活疫苗,实验以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)在胖头鱥上皮细胞(Epithelioma papulosum cyprinid,EPC)上对传染性造血器官坏死病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)进行连续传代培养,通过测定各代病毒滴度,结合病毒收获时间确定最佳增殖方案;采用不同浓度的β-丙内酯(β-propanolactone,BPL)在24℃下灭活,经安全性实验验证后确定最佳灭活条件。以不同剂量腹腔注射免疫虹鳟,以磷酸盐缓冲溶液(PBS)为阴性对照组,通过检测攻毒后相对免疫保护率(relative percent survival,RPS)、免疫相关因子表达量及血清中和抗体效价来分析该疫苗的保护效果。结果显示,最佳增殖方案为以MOI为0.000 1接种,15℃培养3 d;最佳灭活条件为以终浓度3.0 mmol/L的BPL将IHNV在24℃下灭活24 h;以最佳免疫剂量10μL/尾腹腔注射免疫虹鳟,免疫后7、21、45和60 d的相对免疫保护率分别为91.37%、84.28%、84.15%和47.5%,免疫后60 d时RPS显著低于其他时间点免疫组;免疫相关基因的实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR,RT-qPCR)结果显示,与阴性对照组相比,Mx-1和IFN-γ表达量在免疫后7、15和30 d脾脏和头肾中均显著上调,在第7天时达到最大值(5倍);CD4和IgM表达量在免疫后15 d脾脏和头肾中均显著上调;在免疫后第30、45和60天虹鳟血清IHNV中和抗体效价依次为67.25、43.40和29.78,呈下降趋势且各组间差异显著。研究表明,该灭活疫苗可诱导虹鳟产生特异性免疫和非特异性免疫反应,对虹鳟具有显著的免疫保护作用。本研究为IHNV灭活疫苗研发提供参考。
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| 关 键 词： | 虹鳟 传染性造血器官坏死病 胖头鱥 上皮细胞 灭活疫苗 β-丙内酯 (BPL) |
| 收稿时间： | 2021/5/11 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2021/8/23 0:00:00 |
Preparation and immune protective efficacy analysis of an inactivated vaccine against infectious hematopoietic necrosis (IHN) |
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| CHEN Guihu,XU Liming,ZHAO Jingzhuang,REN Guangming,SHAO Yizhi,LU Tongyan.Preparation and immune protective efficacy analysis of an inactivated vaccine against infectious hematopoietic necrosis (IHN)[J].Journal of Fisheries of China,2021,45(11):1909-1920. |
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| Authors: | CHEN Guihu XU Liming ZHAO Jingzhuang REN Guangming SHAO Yizhi LU Tongyan |
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| Institution: | Key Laboratory of Aquatic Animal Diseases and Immune Technology of Heilongjiang Province, Heilongjiang River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Harbin 150070, China;National Demonstration Centre for Experimental Fisheries Science Education, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China |
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