猪霍乱沙门菌C500运载CSFV新型基因疫苗的稳定性及免疫安全性

为研究猪霍乱沙门菌C500(S.C500)运载猪瘟病毒(CSFV)新型基因疫苗的稳定性与免疫安全性,将表达载体pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15、pCI-ME2-IL-15及pCI-neo转入S.C500,采用体外增殖试验考察不同表达载体在S.C500中的稳定性;采用携质粒S.C500对ST细胞的粘附、侵袭力和增殖试验研究不同表达载体对运载体生物学特性的影响;采用BALB/c小鼠口服免疫试验研究表达质粒在体内的稳定性和运载体对小鼠的安全性。结果显示:体外增殖中pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15和pCI-ME2-IL-15稳定性好于pCI-neo,说明外源目的基因正调表达质粒在运载体内的稳定性;空运载体S.C500对ST细胞的粘附率和侵袭率均高于4组含不同质粒的菌株,而4组含不同质粒的菌株之间亦有差异;空运载菌在ST细胞内的增殖能力与4组含不同质粒的菌株之间亦有显著性差异;分别对携带表达载体pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15和pCI-ME2-IL-15菌株以每只2×108CFU/0.2 mL的剂量进行小鼠口服免疫,腹泻率依次为0%、8.33%和25%。在第7和14天,使用DHL/Amp琼脂培养平板,均可从肝脏、脾脏、十二指肠和新鲜粪便样品中分离到重组菌。试验提示采用猪霍乱沙门菌C500运载CSFV新型基因疫苗免疫BALB/c小鼠具有相对稳定性和免疫安全性。     

猪呼肠孤病毒SC-A株的分离鉴定及σ2基因的克隆与序列分析

通过在病毒培养液中添加胰酶的方法,从仔猪腹泻粪样中分离并鉴定了1株能在Vero细胞上稳定产生CPE,并以细胞颗粒增多、肿胀、漂落为特征的猪呼肠孤病毒SC-A株。在感染细胞中,病毒胞浆包涵体及特征性微管样结构明显,病毒粒子多呈典型的晶格状排列,大小约70 nm。S2基因的克隆测序结果表明,SC-A S2全基因(DQ396805)大小为1 331 bp,其开放阅读框编码一个由418个氨基酸组成,相对分子量约为47 140的σ2蛋白;与标准株T1L、T2J、T3D的核苷酸序列和推导氨基酸序列的同源性分别为86.9%、76.7%、85.4%及94.6%、93.3%、98.3%。以σ2氨基酸序列构建的进化树分析显示,标准株及野外分离株可被划分为A(T3)、B(T2)、C(T1)3个群;除T3C31外,其余3型野外分离株及SC-A株和所有血清1型均位于C群中。     

控释肥对夏玉米产量及土壤性状的影响

本研究在大田条件下研究普通掺混肥(CK)、等养分含量玉米专用控释肥(CRF)和减量20%玉米专用控释肥(CRF80%)对夏玉米农艺性状、产量、经济效益及土壤性状的影响,以期为控释肥在玉米上大面积推广提供参考依据。结果表明,等养分含量施用控释肥(CRF)能显著提高玉米的株高、穗长、穗粗、穗行数、行粒数和百粒重等农艺性状指标,显著提高玉米产量,增产15.53%,且产量与穗行数、行粒数、百粒重呈显著正相关,与秃尖长呈显著负相关,农民收益增加2 371.43元/hm2,显著提高氮肥偏生产力及土壤速效氮、速效钾含量。控释肥在玉米上应用效果显著,值得在玉米生产中大力推广应用。     

“5+5”工作法助力星级供电所建设

正为进一步加强乡镇供电所"基层、基础、基本功"工作,不断提高供电服务质量和管理水平,青阳县供电公司按照深化专业延伸、加强综合管理、促进业务融合的工作思路,立足自身工作特色,结合供电所发展实际,通过"5+5"工作法增压力、强动力、激活力、聚合力,促进星级乡镇供电所建设,2016年度公司丁桥供电所被国家电网公司命名为首批百家五星级乡镇供电所,陵阳供电所被国网安徽省电力有限公司命名为四星级乡镇供电所。     

以企业为主体的农业技术标准推广模式的探讨——记陕西杨凌“秦丰农业”良种繁育技术标准推广实践

农业标准化是现代农业的重要基石,是增强农产品市场竞争力的重要保证。作为标准化战略重要一环的技术标准的推广,更是能有效地推动企业科技创新,提升企业的核心竞争力。企业积极参与技术标准的推广工作意义深远。笔者以秦丰农业新品种试验示范中心为例,具体地分析了企业在技术标准推广中应关注的几个环节。     

猪伪狂犬病病毒gD基因的克隆与分析

克隆测定12条PRV不同毒株的gD全序列连同Genebank中登录的9条gD基因全序列共21条基因序列,使用生物软件对它们的基因序列的同源性、突变区域的定位、遗传进化关系、氨基酸序列的同源性、蛋白质亲水性、抗原表位分析、三级结构预测等生物信息学的内容进行预测和分析。结果表明:PRV-gD基因的开放阅读框的核苷酸长度在1197~1215nt之间,氨基酸长度在399~405个之间,核酸同源性在97.3%~100%之间,氨基酸的同源性在89.8%~98.8%之间,在核酸820~837位有个高变重复区。在遗传进化关系上将我国PRV流行分为四川、华北、东南三个区域。该结果说明PRV-gD基因具有很高的保守性。     

一株高效慢生型花生根瘤菌的筛选

[目的]为筛选出一株更加高效促生的花生根瘤菌。[方法]从山东、河北、河南、辽宁4个花生种植地区的20个土样中分离出20株野生型花生根瘤菌。[结果]与现有生产使用的花生根瘤菌144相比,高效固氮的慢生型花生根瘤菌单株结瘤数提高27.4%,单株干重提高8.7%,单株全氮含量提高6.5%,单株产量提高30.45%。[结论]经过16s鉴定及盆栽试验比较,最终筛选出一株高效固氮的慢生型花生根瘤菌。     

共表达猪IFN-γ基因对PPV VP 2-PCV ORF2真核质粒的分子免疫佐剂效应研究

将干扰素-γ、猪圆环病毒Ⅱ型ORF2主要抗原表位(47-85位AA)和猪细小病毒VP2基因克隆至pCI-neo真核载体中,构建重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2.用脂质体介导法将其转染到MDBK细胞中,利用RT-PCR和间接免疫荧光法检测产物的表达情况.将重组质粒pCI-IFN-γ.ORF2.VP2、pCI-ORF2.VP2、对照质粒pCI-neo、PBS、猪细小病毒火活苗和猪圆环病毒亚单位疫苗通过肌肉注射免疫小鼠,检测小鼠不同时期的淋巴细胞转化功能、T淋巴细胞亚群动态变化情况以及PPV、PCV2抗体水平.试验结果显示,在转染重组质粒的MDBK细胞中能扩增到ORF2-VP2和IFN-γ基因;转染后48 h用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达.pCI-IFN-γ.ORF2.VP2免疫组从第7天开始脾淋巴细胞对ConA有明显反应,显著高于对照组和PCI-ORF2.VP2免疫组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组和pCI-ORF2.VP2免疫组;在免疫后第14天检测到PPV PCV抗体.结果表明,pCI-IFN-γ.ORF2.VP2能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫.     

复方中制剂"肤螨灭"对牛毛虱的体外杀灭作用及其疗效研究

为了探索复方中药制剂"肤螨灭"对牛毛虱的杀灭作用及临床疗效,试验采用平皿药膜法,测定含原药27.16,13.58,6.79,3.40,1.70,0.85 mg/mL6个浓度梯度的"肤螨灭"对牛毛虱的离体毒性,并以敌百虫、伊维菌素、氯氟氰菊酯作为阳性对照,观察、记录不同时间段毛虱的死亡数(存活数)及对患毛虱病黄牛的疗效....     

猪轮状病毒四川株的分离鉴定及增殖规律

为了解猪轮状病毒(PoRV)在MARC-145细胞系上的培养特性及增殖规律,本试验利用MARC-145细胞,从四川仔猪腹泻样品中分离到1株PoRV,并通过PCR检测、病毒理化实验与微量中和实验证实,命名为SC-R株。用含不同浓度胰酶营养液培养SC-R株48h后,分别收集病毒液进行定量分析;同时,以SC-R分离株感染MARC-145细胞,在感染后不同时间分别收集感染病毒液,利用PoRV荧光定量检测方法对不同样品中病毒RNA进行定量分析,绘制PoRV生长曲线。结果表明,用含3%胰酶营养液培养的细胞液中PoRV的RNA含量明显高于其他组;一步生长曲线显示细胞外病毒RNA含量呈"S型"曲线增长,感染后0⁸h为潜伏期,病毒RNA含量维持在较低水平;88h为潜伏期,病毒RNA含量维持在较低水平;8³6h为突破期,病毒RNA含量呈对数增长;感染48h增长速度减缓,维持在较高水平,逐步进入稳定期。胰酶可增加PoRV对细胞的感染性,3%是本试验最为适用的胰酶浓度;PoRV感染MARC-145后在细胞内增殖并逐步释到细胞外。