猪流感病毒H3N2亚型的分离鉴定与全基因组序列测定

通过鸡胚接种、MDCK细胞培养、血凝及血凝抑制试验、RT-PCR等方法,笔者在四川首次分离并鉴定了1株既能在鸡胚上稳定传代又能在MDCK细胞上稳定产生CPE的H3N2亚型猪流感病毒,命名为A／swine／Sichuan／01／2006（H3N2）;NS基因的测序结果表明：该病毒分离株与A／swine／HongKong／4361／99（H3N2）、A／NewYork／429／2003（H3N2）、A／Queensland／6／2000（H3N2）、A／New South Wales／4／1999（H3N2）等具有代表性的标准毒株的同源性都达到99％;从MDCK细胞中抽提流感病毒基因组进行全基因克隆,构建了11个包含全基因8个基因片段的文库。全基因测序结果表明,A／swine／Siehuan／01／2006（H3N2）共8个节段,全基因序列共计13577bp;基于HA、NA推导蛋白的无根进化树结果显示,四川分离株与人流感标准株A／Queensland／6／2000（H3N2）、A／South Australia／81／2000（H3N2）有较近的亲缘关系,而与猪流感标准株A／swine／Spain／42386／2002（H3N2）的亲缘关系较远。     

猪圆环病毒Ⅱ型ORF3基因缺失突变毒株对仔猪的致病性及免疫原性研究

15头28～30日龄健康仔猪分成A、B、C3组（5头／组）,分别肌注接种PCV2ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C、亲本毒株PCV2-CD以及生理盐水。用PCR-RFLP和PCR方法,分别从A组和B组屠宰仔猪的腹股沟淋巴结中特异性检测到mPCV2-C和PCV2-CDDNA,发现mPCV2-C能够在仔猪体内复制增殖。组织病理学结果表明;A组和B组腹股沟淋巴结、肝细胞及肺泡壁上皮细胞呈现病变,其中B组病变较严重,证实ORF3基因缺失未改变PCV2的组织嗜性。外周血T淋巴细胞亚群含量动态检测结果表明：与C组相比,A组、B组外周血CD3^＋、CD4^＋细胞百分含量降低,而A组CD8^＋细胞于免疫后第14天回升,高于B组和C组,表明ORF3基因缺失使病毒对T淋巴细胞亚群的影响有所减弱,并有诱导仔猪细胞免疫应答的趋势。上述结果提示ORF3缺失致使病毒的致病力有降低的趋势。PCV2抗体动态检测发现：mPCV2-C明显诱导了仔猪的体液免疫,具有良好的免疫原性。mPCV2-C可作为PCV2基因缺失疫苗候选毒株。     

ORF3基因缺失对猪圆环病毒Ⅱ型感染复制能力的影响

设计1对特异性引物AF-P1/AF-P2,从疑似PCV2感染的病料中扩增获得1 767 bp的PCV2全基因组(命名为PCV2-CD),克隆至pMD18-T Simple载体构建重组质粒pTS-PCV2-CD.序列分析表明:PCV2-CD与GenBank中公布的12个PCV2毒株间的同源性高达95.0%～100%.用Nco Ⅰ酶切pTS-PCV2-CD获得4 459 bp线性目的DNA片段,补平CATG 4个碱基、连接环化构建ORF3基因插入缺失重组质粒pTS-PCV2-CD-C并测序.用Sac Ⅱ酶切pTS-PCV2-CD-C.回收1 771 bp线性目的片段,体外连接环化构建了ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C.PCR-RFLP检测表明,在脂质体转染法转染mPCV2-C、培养并盲传4代的IBRS-2细胞中(PCVl阴性),特异性检测到mPCV2-C的DNA;电镜观察发现,在盲传6代的IBRS-2细胞胞核内观察到突变毒株的病毒颗粒.试验结果表明:ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C具有感染性,能够在IBRS-2细胞中复制增殖,证实ORF3基因不是PCV2复制的必需基因.     

胸腺肽的免疫调节活性及其在病毒性疾病中的应用

胸腺肽是一类胸腺分泌的天然活性多肽,具有广泛的免疫调节活性,其中Tα1、ProTα和Tβ是胸腺肽中的主要成分。目前主要通过化学合成法制取胸腺肽,基于基因工程技术的原核表达法有望解决现有方法总收率低、成本高的缺点。大量研究表明,胸腺肽的主要成分能够有效增强机体免疫细胞的数量与活性,促进抗原呈递,诱导抗病毒因子分泌,调节机体免疫平衡等,还具有疫苗佐剂的潜力。近年来,胸腺肽类药物已用于新冠感染、获得性免疫缺陷综合征等免疫抑制性疾病的治疗,并开始推广至兽医领域的猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等常见动物疾病的预防和治疗。本文对胸腺肽的免疫调节活性、抗病毒的作用机制进行综述,并进一步总结了胸腺肽在病毒性疾病中的应用现状和发展前景,以期为后续研究和应用提供参考。     

水稻生育期内硝酸还原酶活性的变化趋势研究

[目的]研究不同氮素浓度条件下诱导的硝酸还原酶活性,为水稻控释氮肥提供理论依据。[方法]对6个基因型的水稻样本(广恢128、长伦占、矮秀占、BG367、6827、七桂早)在不同生育期内用不同浓度的(0、20%、40%、60%)氮素条件诱导,检测硝酸还原酶活性,得出其变化趋势。[结果]结果表明:在4个不同浓度的(0%、20%、40%、60%)氮素条件诱导下,硝酸还原酶活性表现出一定的相似的规律性。在4种氮素条件诱导下,硝酸还原酶活性在分蘖期都表现为最强,随着生育期向后发展,硝酸还原酶活性逐渐降低,成熟期最弱。[结论]水稻对氮素的吸收与利用主要在生长发育的早期,因此对水稻施加有限的氮肥而要获得高产的最佳时期是在生长发育的早期。     

猪高致病性蓝耳病毒与猪圆环病毒混合感染的诊治

2016年6月四川九寨沟某藏香猪养殖基地母猪出现体温升高到41℃、食欲不振、泌乳量降低、返情率升高、个别食欲废绝,仔猪出现高稽留热、精神萎靡、消瘦、眼睑水肿、呼吸困难(呈腹式呼吸)、腹泻等临床症状。剖解发现全身淋巴结肿大,肺呈弥漫性间质性肺炎,表面凹凸不平,部分坏死。遂采集患病猪病料,以四川农业大学动物生物技术中心建立的病原RT-PCR和PCR方法进行检测,初步诊断为猪高致病性蓝耳病毒和猪圆环病毒混合感染。结合临床实际采取一定措施治疗后,病情得到有效控制。     

猪伪狂犬病基因缺失活疫苗(SA215)免疫母猪后仔猪母源抗体消长规律及首免日龄

在研究猪伪狂犬病基因缺失活疫苗 (SA 2 15 )免疫接种母猪所产仔猪母源抗体消长规律 ,并绘制其消长曲线的基础上 ,确定了仔猪首免日龄。对免疫母猪所产仔猪于不同日龄进行抗体检测结果表明 ,全部仔猪均获得了高水平母源抗体 ,7日龄高达 2 8.56 ,6 0日龄降至 2 2 .56 ;随着日龄增长 ,抗体水平呈逐渐降低趋势 ,2次大幅下降出现在 14～ 2 1日龄、30～ 6 0日龄。对免疫母猪所产仔猪分别于不同日龄免疫接种 1头份剂量疫苗 (SA2 15 ) ,7d后采血进行抗体检测 ,结果表明 ,7日龄、14日龄、2 1日龄免疫接种仔猪均未引起明显抗体水平升高 ,反而较同期仔猪略有降低 ,30日龄和 6 0日龄免疫接种仔猪则出现了抗体水平的升高 ,其中以 6 0日龄仔猪升高幅度为大。结合母源抗体消长规律 ,确定猪伪狂犬病基因缺失活疫苗 (SA2 15 )免疫母猪所产仔猪的首免日龄为 30日龄     

猪细小病毒(PPV)SC1株的分离鉴定

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)为引起母猪繁殖障碍的主要病原之一,可引起胚胎或/和胎儿的感染和死亡,导致母猪发生流产、死胎、木乃伊胎及新生仔猪的死亡。该病最早发生于欧洲一些国家,后发展到北美洲、亚洲、南美洲、非洲及大洋洲[1]。现在世界许多国家和地区均有流行。     

中西医结合治疗犬瘟热

本文用对比观察的方法,对三组实验犬分别采用单纯西医、中西医结合和不予治疗(作为对照组)的处理方法来进行犬瘟热治疗效果观察。结果中西医结合组的治愈率最高,较单纯西医治疗治愈率提高20%以上。     

伪狂犬病病毒Fa株gE基因的克隆与序列的比较分析

根据已发表的伪狂犬病病毒（PRV）的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRV Fa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1.7kb的特异片段,经本科切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经Kpn Ⅰ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到了明显大于载体的重组质粒PpgE。重组质粒PpgE经本科切鉴定为含有PRV的gE基因,测序PpgE得到完整的gE基因片段,并与4株不同来源的毒株进行了比较分析。5毒株的gE同源性比较分析发现毒株间同源性最低也高达97%,这体现了gE基因的保守性。分析还表明Fa与TNL同源。同时99%的高同源性也显示Fa、Ea、SH可能是同一毒株。gE序列在1040-1410碱基的高同源性区域作为PRV的PCR检测或作为PRV的PCR检测或作为核酸探针是非常重要的。