猪繁殖与呼吸综合征病毒对Marc145细胞自噬相关基因转录的影响及分析

自噬参与多种疾病过程,且与病毒感染与增殖关系密切。为探究Marc145细胞感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)后自噬相关基因Beclin1、ATG5和ATG12mRNA转录差异及规律、PRRSV增殖与细胞自噬的联系;采用实时荧光定量PCR方法对自噬相关基因Beclin1、ATG5和ATG12 mRNA的转录进行测定,绘制了转录规律曲线图;并经实时荧光定量测定并绘制PRRSV在Marc145细胞中增殖规律图。结果显示,试验组自噬相关基因转录量明显高于对照组,表明PRRSV能诱导Marc145细胞自噬,且使Beclin1、ATG5和ATG12mRNA提前进入高转录状态;其转录规律与细胞病变、PRRSV增殖规律呈正相关。     

黄粉甲储存蛋白hexamerin基因的克隆及表达分析

基于RACE技术从黄粉甲蛹中克隆得到储存蛋白hexamerin基因(TmolHex1和TmolHex2),应用生物信息软件和荧光定量PCR技术分析了基因的序列和表达特征。结果表明:克隆获得的TmolHex1和TmolHex2基因的开放阅读框分别为2 133 bp和2 103 bp,分别编码710和700个氨基酸,其编码蛋白预测理论分子量分别为85.53 kDa和84.35 kDa,等电点分别为6.05和6.72。TmolHex1和TmolHex2氨基酸序列中存在信号肽序列,富含芳香氨基酸,且具有芳香储存蛋白家族特征序列。TmolHex1和TmolHex2基因在黄粉甲的老熟幼虫和蛹脂肪体中表达量最高,表明其可能在生长发育、变态和能量代谢方面发挥重要作用。     

巴布亚新几内亚野生香菇的鉴定及生物学特性

以一株巴布亚新几内亚野生香菇为试材,采用ITS、LSU和SSU序列分析对其进行分子鉴定,并采用单因素试验和正交实验探究其菌丝生物学特性.以期明确其分类学地位以及为砖红小香菇Lentinula lateritia的人工栽培和后续的深入研究提供参考依据.结果 表明:该野生香菇的ITS序列长度为725 bp,LSU序列长度为934 bp,SSU序列长度为1100 bp,均与砖红小香菇相似度最高,鉴定该菌株为砖红小香菇Lentinula lateritia;生物学特性研究结果表明,该野生香菇菌丝生长的最适碳源为果糖,最适氮源为牛肉膏,最适pH为4.0,最适生长温度25℃.     

金黄色葡萄球菌和猪链球菌混合感染引发的脑膜炎

正金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界,同时也存在于人和动物的体表、鼻腔、消化道等部位,是一类条件性致病菌。金黄色葡萄球菌可引起人和动物各种急、慢性感染,包括尿道炎、脊髓炎、心肌炎、肺炎、脑膜炎、肠炎、乳腺炎、败血症等。该菌在侵入机体后分泌多种毒力因子,如溶血素、杀白细胞毒素,前者可破坏红细胞和血小板,造成局部缺血坏死,后者可导致T细胞、嗜中性粒细胞、自然杀伤细胞、单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞受损甚至裂解从而     

猪环曲病毒N基因的克隆及生物信息学分析

为研究猪环曲病毒(PToV)N蛋白的生物信息学特征,运用RT-PCR技术扩增猪环曲病毒N基因,测序并对其进行生物信息学分析。结果成功获得了492bp的PToV N基因(GenBank登录号为KM036209)。经生物信息学分析,此序列编码163个氨基酸,理论等电点(pI)为12.14,理论分子质量为18 695.5u,不稳定系数为77.47;不同密码子对同一氨基酸选择上呈现一定的偏嗜性;最大疏水指数为1.589,最小疏水指数为-3.533;无信号肽和跨膜区;抗原表位主要位于N末端和C末端。预测其可能包含4个N-糖基化作用位点,2个蛋白激酶C磷酸化作用位点、1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点、1个N-豆蔻酰化位点。进化树分析结果显示,KM036209与韩国株和上海株亲缘关系很接近,与荷兰及西班牙株不属于同一分支。     

猪δ冠状病毒重组M蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

本研究旨在建立一种可靠的检测猪δ冠状病毒（porcine deltacoronavirus,PDCoV）IgG抗体的间接ELISA方法,了解四川地区PDCoV的流行情况。采用原核表达系统表达PDCoV膜蛋白（M）作为检测抗原,通过反应条件的优化,建立了基于PDCoV M蛋白的间接ELISA方法,命名为PDCoV-rM-ELISA,并用该方法对430份临床样品进行检测。成功构建了重组表达菌BL21-pET-32a-M,经诱导表达后获得了重组M蛋白,Western bolt检测表明,重组蛋白具有良好的反应原性。以其作为包被抗原建立的PDCoV-rM-ELISA方法仅对PDCoV血清检测为阳性,与猪流行性腹泻病毒等5种猪常见病原阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;该方法灵敏性高、重复性好,批间和批内重复性变异系数均小于10%;与成品化PDCoV抗体检测试剂盒同时检测48份临床血清,两种方法的阳性符合率为88.46%,阴性符合率为90.91%,总符合率为89.58%。临床样品检测结果表明,各地样本PDCoV抗体阳性率平均为11.86%,且统计学分析显示,母猪比仔猪和育肥猪高2.25倍的PDCoV感染概率。笔者成功表达了PDCoV M蛋白,建立了PDCoV-rM-ELISA检测方法,该方法具有较高的敏感性、良好的特异性和重复性,可用于临床猪血清样品种PDCoV IgG抗体的检测。     

农村养老新出路——农村社区养老模式的提出与分析

建立和谐社会执政目标的提出引发了我们对于农村老人安老养老问题的关注。从农村社区养老模式提出的背景出发,具体分析了社区养老这一模式在农村开展的合理性和先进性,进而提出了几点推广、发展农村社区养老的建议。     

大熊猫多器官功能障碍综合征的病理学观察

对一只野生大熊猫因创伤继发细菌感染引起的多器官功能障碍综合征而死亡的病例进行了系统的病理学观察。结果表明大熊猫多器官功能障碍综合征的剖检病变主要表现为腹水,肝、肾肿大,脾脏体积缩小,被膜皱缩;胃及小肠黏膜充血,出血,胰腺水肿,肾上腺肿大,心包积液,心脏扩张;肺充血,出血。病理组织学变化主要表现为全身多器官的水肿,变性,坏死和炎症细胞浸润及心、肺、肾、脑等器官的毛细血管兼或小血管内形成微血栓。     

猪肠道杯状病毒研究进展

猪的腹泻病一直困扰着养猪业.特别是病毒性腹泻危害最为严重,它可以引起仔猪的死亡,成猪的掉膘,降低饲料报酬率等。在我国,对于诺如病毒和札幌病毒研究还处于起步阶段,对该病毒的进一步研究有利于疾病的治疗和疫苗的开发研究。文章旨在简述其对流行病学、致病机理、诊断方法等总结。     

猪环曲病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank中猪环曲病毒N基因设计合成2对特异性扩增引物,成功建立了猪环曲病毒的套式RT-PCR快速检测方法。为验证本方法的特异性,以猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、A群猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪嵴病毒、沙门菌及大肠杆菌作为阴性对照,结果显示只有在猪环曲病毒的核酸作为模板时才能扩增出预期的258bp和198bp 2条片段。敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸含量为1pg。结果表明,建立的RT-PCR方法特异性强、灵敏度高,可用于猪环曲病毒的临床检测和流行病学调查。利用本方法对采集自四川省部分地区的50份临床样品进行检测,猪环曲病毒阳性率为30%。