新型CephodexD微载体在猪瘟病毒大规模增殖中的应用研究

旨在应用新型Cephodex D微载体悬浮培养ST细胞增殖猪瘟病毒。通过优化工艺条件初步实现了病毒抗原的大规模高效生产,培养过程采用流加方式保证ST细胞的营养供应。用含6%(v/v)无牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)及其抗体的双阴牛血清MEM生长液培养ST细胞。当达到3.8×109个细胞时,接种入生物反应器中,Cephodex D微载体用量为4 g/L。当反应器内ST细胞生长至48 h,接种猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)液。继续培养4 d后进行首次病毒收获,之后每3 d收获1次,直至第5次收毒结束。整个培养过程持续18d,细胞培养至72 h,密度可达2.8×106cells/m L,生产的CSFV滴度均在100万兔体反应量(RID)/m L以上。较现有的国家标准相比,应用生物反应器和新型Cephodex D微载体悬浮培养技术,不仅病毒滴度提高了1倍,而且整个生产周期缩短了5 d,大大提高了生产效率。因此,本研究采用的新型微载体悬浮培养工艺在CSFV大规模生产中具有重要的应用价值。     

禽致病性大肠杆菌HPI毒力岛irp2蛋白表达、纯化及其间接ELISA方法建立

PCR扩增irp2主要抗原表位区,构建pET-32α-irp2表达载体,转化BL21(DM3)细胞诱导表达。以纯化irp2蛋白为抗原建立ELISA检测方法,确定抗原包被浓度、血清稀释度、封闭液与封闭条件和临界值等参数,进行ELISA性能检测及应用。结果显示,PCR扩增出约519bp特异性irp2主要抗原表位基因,经菌液PCR、双酶切及DNA测序显示成功构建pET-32α-irp2表达载体。irp2目的蛋白获得有效表达,相对分子质量大小约34 500,亲和纯化后纯度达90%以上。Western blot显示目的蛋白irp2与抗血清在约34 500出现特异性显示条带。确定ELISA抗原包被质量浓度3.25mg/L、血清稀释度1∶80,封闭液为5%脱脂奶粉,封闭条件37℃1h+4℃10h,临界值为0.320。性能检测显示,其敏感性可达1∶5 120;与鸡白痢沙门菌、鸡传染性鼻炎、鸡霉形体、鸡巴氏杆菌、HPI-大肠杆菌等血清无交叉反应特异性,批内、批间变异系数分别为3.40%~6.71%和5.20%~8.44%;与PCR方法对124份血清平行试验其符合率93.8%;对1 425份临床血清样品irp2抗体阳性检出率37.4%。结果表明,建立了可检测血清中irp2蛋白抗体的间接ELISA方法,适用于临床血清样品进行快速抗体检测,为HPI大肠杆菌的流行病学调查和致病性大肠杆菌免疫机制研究奠定基础。     

一例猪传染性胸膜肺炎病的诊治

自2006年2月初以来，山东省某养猪基地陆续发生以病猪体温升高、倦怠、厌食、消瘦为主要临床症状的疾病。用青、链霉素及抗病毒多种药物治疗无效，特来我系动物疾病诊断中心求诊。经实验室检验分离到猪胸膜放线杆菌，及时用敏感药物进行治疗，使疫病得到控制。现将流行病学、剖检变化、细菌的分离鉴定及防治措施报告如下。     

蜂胶对鸡副嗜血杆菌的抑菌效果试验

蜂胶是一种具有广谱生物学活性的天然物质,具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、消炎、增强机体免疫功能和促进组织再生等作用,本文就其对鸡副嗜血杆菌的抑菌作用进行了试验.结果表明,终浓度为1mg/ml-5mg/ml的蜂胶乙醇浸出物对试验菌株具有完全抑制作用,终浓度为0.5mg/ml和0.1mg/ml的蜂胶乙醇浸出物对试验菌株具有部分抑制作用,终浓度为0.01mg/ml的蜂胶乙醇浸出物对试验菌株没有抑制作用.     

禽霍乱、大肠杆菌病蜂胶二联灭活疫苗中大肠杆菌凝集抗体消长规律的研究

应用改良大肠杆菌凝集试验对禽霍乱、大肠杆菌病蜂胶二联灭活疫苗中大肠杆菌凝集抗体消长规律的监测表明：3 d的抗体效价为2-3 Log2,5 d达到6 Log2以上,30 d达到高峰8.5-9.5 Log2,6个月仍可达到6 Log2。3批成品监测结果基本一致,表明禽霍乱、大肠杆菌病蜂胶二联灭活疫苗生产工艺已相当成熟,完全适合工厂化大规模生产。     

鸭疫里默氏菌2型分离鉴定及药敏试验

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏菌引起的危害雏鸭的一种急性或慢性败血性传染病。其中以鸭疫里默氏菌2型对我国养鸭场造成的危害最大。本试验通过从山东、广西、四川等地分离的20株2型鸭疫里默氏菌分离株的生理生化、药敏试验发现:这20株2型菌分离株其生理生化特性一致;分离株表现不同程度的耐药性,对头孢噻肟钠、氟苯尼考、绿都肠乐、罗红霉素、阿奇霉素和阿莫西林敏感度较高。将20株分离菌株培养物分别接种15日龄健康雏鸭,每只颈部皮下注射1.0×106CFU/ml,观察10天。结果表明:20株分离株对15日龄雏鸭致病性差异较大,致死率从0到100%不等,其中sd-5株致病性最强,致死率为100%;其次分别为sd-4(致死率80%)和hy-2(致死率70%)。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒诊断方法的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害养猪业的传染病之一,自2006年夏秋季节,中国自南向北相继暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征,采取快速准确的诊断方法与技术确定病原在PRRS的整个防控过程中具有举足轻重的作用。作者详细介绍了PRRSV诊断方法和技术的最新进展,以期为猪繁殖与呼吸综合征的诊断与防控提供技术支持和参考。     

分子生物学技术在猪流感诊断中的应用

猪流感是由正粘病毒科猪流感病毒引起的猪的一种急性、热性和高度接触性、群发性呼吸道疾病,其临床上以发病急促、高热咳嗽、鼻中流出分泌物、呼吸困难、衰竭,怀孕母猪繁殖障碍、流产、死亡等病症为特征。目前,猪流感在我国各地广泛存在和发生,给养猪业带来了巨大的经济损失,并且严重危害人类的健康。文章就猪流感分子生物学诊断技术进行简要概述,以期为猪流感的及时诊断提供参考。     

蛋鸡心包积水综合征病原鉴定及组织灭活疫苗紧急免疫试验

2016年4月,山东蛋鸡养殖规模25 000余只的鸡场发生了一种高致死率传染病,病死率15%以上。通过临床症状观察、病理剖检、血凝试验、动物回归试验、PCR检测及血清型分析,确诊该病为禽腺病毒Ⅰ群4型感染所致。无菌采集该养殖场病死鸡肝脏,制备组织灭活疫苗,对鸡群进行紧急注射免疫,免疫接种后7d,病死鸡数量开始逐渐下降,12d后完全停止发病死亡,最终成功控制了该病。应用制备的同源组织灭活疫苗紧急免疫鸡群有效控制了禽腺病毒Ⅰ群4型的感染,为该病提供了一种可靠的防控措施。     

环介导等温扩增(LAMP)技术及其在鸭病病原检测中的应用研究进展

环介导等温扩增(LAMP)技术是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有特异性强、灵敏度高、快速、准确和操作简便和成本低等特点,越来越受到兽医相关工作者的关注。目前,该方法己被广泛应用各种动物病原的检测。本文综述了LAMP技术在鸭传染病病原检测中的应用研究进展情况,以期为今后鸭病的诊断和防控工作提供参考。