鸡新城疫病毒Ⅰ系在不同细胞上增殖特性的研究

为了在疫苗生产过程中实现应用传代细胞系大规模增殖培养鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),试验将NDVⅠ系分别接种至BHK-21、Vero与DF-1细胞系中,并对F1～F3代不同细胞培养物的凝集价、细胞半数感染量(TCID_(50))与鸡胚半数感染量(EID_(50))进行测定,研究NDVⅠ系在BHK-21、Vero与DF-1细胞上的增殖特性,并确定培养NDVⅠ系的最佳细胞系。结果表明:NDVⅠ系在BHK-21、Vero与DF-1细胞中均可增殖,并产生明显的细胞病变;F1～F3代细胞培养物随着传代次数的增加,凝集价(DF-1细胞除外)、TCID_(50)与ELD_(50)下降;用BHK-21细胞培养的病毒毒力显著高于另两种细胞培养物。说明在三种传代细胞系中,BHK-21细胞较DF-1与Vero细胞更适合于NDVⅠ系的生长。     

重组腐败梭菌α毒素替代羊三联四防苗中腐败梭菌组分的免疫效果评价

为了评价重组腐败梭菌α毒素在联苗中的免疫效果,试验用不同含量的重组腐败梭菌α毒素替代羊三联四防苗中腐败梭菌组分制备联苗,分别免疫兔和绵羊,在免疫后的第10,14,21天分别测定血清中和效价,免疫后第25天用1个最小致死量(MLD)的腐败梭菌毒素对免疫兔和绵羊分别进行攻毒,以期得到能使动物获得足够保护的抗原含量。结果表明:对于兔和绵羊联苗中重组腐败梭菌α毒素蛋白最小免疫剂量分别为0. 3 mg、0. 25 mg时,在免疫后第14天腐败梭菌毒素血清中和效价均能达到1;免疫后第25天进行攻毒保护试验,免疫兔和绵羊攻毒保护率分别为100%、75%。说明重组腐败梭菌α毒素可以替代羊三联四防苗中腐败梭菌组分用来进行免疫。     

鸡痘病毒TCID50和EID50值相关性分析

鸡痘是鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)引起的一种急性接触性传染病,各年龄和品种的鸡都易感染,但雏鸡的敏感性最高.鸡痘可使病禽生长迟缓,产蛋下降,种禽发病时孵化率降低,若并发其他传染病、寄生虫病和卫生条件、营养状况不良时也可以引起大批死亡,特别是雏鸡损失更为严重,死亡率高达50％[1].在我国普遍采用疫苗接种措施,鸡痘的发生率已明显下降.目前,我国使用的国产鸡痘疫苗有两种,一种为细胞苗,另一种为组织苗.     

猪细小病毒(PPV)SD1株NS1基因的克隆与原核表达

为研究猪细小病毒（Porcine Parvovirus，PPV）NS1基因，建立快速、准确诊断猪细小病毒的方法，减少猪细小病毒造成的损失，笔者克隆了含有NS1基因的片段，并且与已登录猪细小病毒的相应序列进行比较，成功构建了原核表达重组质粒PET 30a／NS1，并在E.coli中进行了诱导表达。     

猪胸膜肺炎放线杆菌液体发酵培养生长观察

对三种血清型猪传染性胸膜肺炎的液体培养进行观察,发现摇瓶菌种最佳培养时间为6~7 h,发酵罐培养的最高活菌数为47亿/ml,培养最适时间为9~10 h,为进一步规模化生产奠定了基础.     

副鸡禽杆菌SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的副鸡禽杆菌hagA基因序列设计特异性引物,经PCR扩增出了123bp的片段。产物经回收与pMD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性试验、特异性试验、重复性试验和临床检测应用。结果显示,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数R2=0.999 8;溶解曲线特异,产物Tm在81.3~81.5℃之间;最低检测限为0.18拷贝/μL,其敏感性比常规PCR至少高100倍;该方法不与其细菌发生交叉反应,呈现很好的特异性;重复性试验中,批内和批间变异系数均小于1%,说明该方法重复性很好;临床副鸡禽杆菌样本的检测结果表明所建立的荧光定量PCR方法的检测率明显高于常规PCR方法,为该病的早期快速诊断,并定量分析副鸡禽杆菌感染程度奠定了基础。     

猪大肠杆菌病的诊断及防治

仔猪黄痢是出生后几小时到1周龄仔猪的一种急性高度致死性肠道传染病，以剧烈腹泻、排出黄色或黄白色水样粪便以及迅速脱水死亡为特征。仔猪白痢主要发生于10～30日龄的仔猪，临床上以排乳白色或灰白色带腥味的浆液性稀便为特征，发病率高而致死率低。     

禽流感疫苗的研究进展与展望(上)

禽流感病毒(Avian innuenza virus,AIV)属于正粘病毒科、流感病毒属、A型流感病毒.AIV感染禽类后可引起一种以呼吸系统乃至全身性败血症为特征的传染性疾病,即禽流感(Avian influenza,AI).AI不仅可以在家禽中传播,严重影响畜牧养殖业的生存和发展;而且还可以由家禽传给人类,直接威胁人类的健康,对人类造成极大危害.     

禽霍乱与大肠杆菌病多价蜂胶二联灭活疫苗的研究

为研制绿色环保型的禽霍乱与大肠杆菌病多价二联灭活疫苗,本研究以禽多杀性巴氏杆菌强毒株G48-1、G48-2和禽致病性大肠杆菌常见血清型01/0154、02/086、078、018、08/093等为制苗菌株,分别以改良马丁琼脂和马丁肉汤进行固体表面培养和高密度发酵培养制备抗原,将灭活的抗原铺以具有广谱生物学活性的天然物质-蜂胶为免疫增强剂,已拥有完全自主知识产权的纳米蜂胶疫苗制造工艺技术平台制备禽霍乱与大肠杆菌病多价蜂胶二联灭活疫苗.试验结果表明,疫苗安全可靠,无明显的干扰现象,免疫后5～7 d产生坚强保护力,对禽霍乱和鸡大肠杆菌病的近期保护率均为100%.以实验动物小鼠代替本动物进行二联疫苗效检取得成功,本效检方法可缩短检验期限7 d,降低检验成本,具有更敏感、更特异、更客观、更简便等特点.禽霍乱采用攻毒法,大肠杆菌采用改良微量凝集试验测定抗体效价法测定禽-大二联疫苗的免疫期与保存期.结果表明,该疫苗的免疫期为6个月以上,-10℃保存期为18个月;4℃～8℃为12个月;15℃～30℃为6个月.田间免疫试验表明,疫苗安全可靠,现场应用已逾2亿羽份,效果良好.     

猪繁殖与呼吸综合征继发副猪嗜血杆菌、大肠杆菌病的诊治

<正>2010年2月,某猪场送检3头病仔猪,据该厂负责人介绍,该猪场为集体企业,被他承包。猪场从2009年10月份发病至今,主要表现为不论品种、年龄、大小均发病,一般是断奶猪先病,架子猪、怀孕后期母猪、肥猪随后发生。仔猪发病率可达100%、死亡率可达50%以上,母猪流产率可达30%以上,育肥猪、母猪也有发病死亡。现在所产仔猪所剩无几,保育舍基本已成空舍,损失惨重。