伪狂犬病病毒gE／gI双基因缺失株的生物学特性

为了解gE和gI双基因缺失株伪狂犬病病毒gE-／gI—PRVSA738和野毒株PRV—SA的生物学特性,对该病毒进行了理化特性和体外增殖曲线的研究。结果显示：该缺失株对氯仿、酸、热及冻融次数敏感,从双基因缺失毒株与野毒株在BHK-21细胞上的增殖曲线来看,在病毒培养50h之前野毒株的毒价均高于缺失株,而在50h以后缺失株的毒价又高于野毒株,并且在36h时2株病毒的毒价均达到最高峰。     

N-糖基化猪瘟病毒E2蛋白不同接种剂量对BALB/c小鼠的免疫效果分析

E2蛋白（E2 protein,E2-Pro）为猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）的主要结构蛋白之一,是CSFV最主要的保护性抗原,因此应用体外糖基化技术获得的N-糖基化E2蛋白（glycosylated E2 protein,Gly-E2-Pro）理论上可进一步增强机体的免疫应答。为了验证这一设想以及获得最佳的免疫效果,本研究分别将Gly-E2-Pro按20,50,100μg/只,接种BALB/c小鼠,同时设E2-Pro与CSFV对照,于不同时间采血制备血清,通过血清中IgG、IL-4及INF-γ水平的测定,评价Gly-E2-Pro的免疫效果及确定最佳免疫剂量。结果显示,免疫Ⅰ组（20μg/只）Gly-E2-Pro虽刺激机体产生了IgG免疫应答,但水平较低,与E2-Pro、CSFV组差异不显著;免疫Ⅲ组（100μg/只）Gly-E2-Pro免疫后,前期出现免疫抑制,至28d抗体水平急剧上升,达到极高值;免疫Ⅱ组（50μg/只）Gly-E2-Pro免疫后,血清IgG水平显著高于E2-Pro与CSFV组,同时显著高于免疫Ⅰ组与Ⅲ组。以上结果说明,Gly-E2-Pro可有效增强机体的体液免疫应答,50μg/只为最佳接种剂量。     

杂交猪IFN-γ和IL-18双基因在Rosetta TM大肠杆菌的表达

依据已测的杂交猪IFN-γ、IL-18基因的核苷酸序列,设计4条引物,通过重叠PCR的方法将2个基因进行连接,并在两个基因连接处引入45 bp的连接肽的核苷酸序列;融合基因通过pEGX-4T-1载体及RosettaTM表达菌实现了原核表达,蛋白可被GST标签多抗识别.本研究的进行,为IFN-γ/IL-18融合蛋白的功能研究奠定了基础.     

鸡新城疫病毒Ⅰ系在不同细胞上增殖特性的研究

为了在疫苗生产过程中实现应用传代细胞系大规模增殖培养鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),试验将NDVⅠ系分别接种至BHK-21、Vero与DF-1细胞系中,并对F1～F3代不同细胞培养物的凝集价、细胞半数感染量(TCID_(50))与鸡胚半数感染量(EID_(50))进行测定,研究NDVⅠ系在BHK-21、Vero与DF-1细胞上的增殖特性,并确定培养NDVⅠ系的最佳细胞系。结果表明:NDVⅠ系在BHK-21、Vero与DF-1细胞中均可增殖,并产生明显的细胞病变;F1～F3代细胞培养物随着传代次数的增加,凝集价(DF-1细胞除外)、TCID_(50)与ELD_(50)下降;用BHK-21细胞培养的病毒毒力显著高于另两种细胞培养物。说明在三种传代细胞系中,BHK-21细胞较DF-1与Vero细胞更适合于NDVⅠ系的生长。     

猪瘟病毒E2蛋白靶向化树突状细胞疫苗的制备及对家兔的免疫效果

猪瘟病毒E2蛋白不但具有很强的保护性,而且与病毒毒力密切相关。本研究旨在利用基因工程技术,原核表达纯化猪瘟病毒E2蛋白并对其进行N-糖基化修饰,以使其靶向树突状细胞,从而增加其免疫效力。结果表明,经间苯二酚硫酸法及质谱分析鉴定,猪瘟病毒E2蛋白质ε-赖氨酸成功进行了体外糖基化修饰。进而将糖基化E2蛋白质免疫家兔,首免后14d进行第二次免疫,分别在不同时间采血制备血清,经ELISA检测,免疫7d,糖基化E2蛋白质组抗体水平显著高于猪瘟病毒组与E2蛋白质组(P<0.01);至14d时,糖基化E2蛋白质组抗体水平开始下降,与疫苗组、E2蛋白质组相比差异不显著(P>0.05);在二免后14d,糖基化E2蛋白质组抗体水平上升至最高水平,显著高于猪瘟疫苗组和E2蛋白质组(P<0.01);至二免后21d,糖基化E2蛋白质组抗体水平略高于猪瘟疫苗组(P>0.05),显著高于E2蛋白质组(P<0.05);至二免后28d,糖基化E2蛋白质组抗体水平达到稳定值,显著高于另2组(P<0.05)。结果说明,糖基化E2蛋白质免疫后有效诱导了机体的抗体反应,抗体产生快而持久,具有良好的免疫记忆,免疫效果显著优于常规疫苗,是新型疫苗开发的优选抗原,具有很深的开发潜力。     

猪流行腹泻病毒N蛋白表达与PPA-ELISA抗体检测方法的建立

为建立一种快速的猪流行性腹泻病毒抗体检测方法,本研究参照已发表的猪流行性腹泻病毒(PEDV)N基因序列,RT-PCR扩增了长约1 300 bp的N基因片段,连接pET30a表达载体后获得了以可溶性形式表达的重组N蛋白.重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性.以该蛋白作为诊断抗原,建立检测PEDV抗体的PPA-ELISA诊断方法.该诊断方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,为PEDV的快速诊断、免疫猪群抗体监测和PEDV流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法.     

早期断奶对仔猪生长性能和血清生化指标的影响

文章旨在研究早期断奶对仔猪生长性能和血清生化指标的影响。试验将75只日龄相近仔猪随机分成3组,每组5个重复。EW-1组于21?d断奶,EW-2组于28?d断奶,EW-3组于35?d断奶,试验为期50?d。结果表明：（1）EW-3组较EW-1组可显著提高仔猪终末体重和平均日增重,降低料肉比和腹泻率（P <0.05）;(2)EW-3组仔猪超氧化物歧化酶活性、总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶活性和过氧化氢酶活性较EW-1组仔猪均显著提高（P <0.05）,但丙二醛含量显著降低（P <0.05）;(3)EW-3组仔猪总蛋白含量、白蛋白含量、谷草转氨酶活性、谷丙转氨酶活性和碱性磷酸酶活性较EW-1组仔猪均显著提高（P <0.05）,各试验组间仔猪总胆固醇、甘油三酯和血清尿素含量均差异不显著（P> 0.05）。综上所述,35?d断奶能提高平均日增重,降低料肉比和腹泻发生率,同时可仔猪改善血清生化指标和抗氧化力。     

布鲁菌外膜蛋白的糖基化及免疫效果检测

为研制安全、有效、新型靶向化布鲁菌外膜蛋白疫苗,采用去污剂连续抽提与电洗脱法分离纯化出布鲁菌外膜蛋白,并进行α-D-甘露吡喃异硫氰酸苯酯糖基修饰、佐剂乳化.依据统计学中完全随机实验设计试验,免疫BALB/c小鼠,收集不同时间点血液样品,ELISA法检测血清中IgG和IFN-γ含量.结果显示分离纯化出37.5 kD与47.2 kD的目的蛋白并成功糖基化修饰;纳米颗粒佐剂乳化后的试验用疫苗免疫小鼠,血清IFN-γ水平呈显著升高趋势(P＜0.05);抗体水平略显优势,但差异不显著(P＞0.05).表明试验用疫苗能激发机体的细胞免疫应答,且产生了免疫记忆.本研究为研制布鲁菌新型靶向化疫苗的研发和推广提供了研究依据.     

鸡新城疫病毒LaSota株在BHK-21细胞上增殖条件的优化

本研究旨在对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株在BHK-21细胞上的增殖条件进行优化,为实现应用细胞系生产NDV提供参考。在确定BHK-21细胞TPCK-胰酶耐受浓度的基础上,在培养基中添加不同浓度的TPCK-胰酶、新生牛血清及调节不同pH,通过对细胞培养液细胞半数感染量(TCID₅₀)的测定,确定最适胰酶浓度、血清浓度及pH;通过固定接毒量而添加不同数量细胞或固定细胞数量而接种不同量的病毒,确定最适细胞量及接毒量;将BHK-21细胞接种NDV LaSota株后,通过测定不同时间细胞上清液TCID₅₀绘制增殖曲线,确定最佳收毒时间;应用转瓶对该病毒进行扩大培养,并进行TCID₅₀、鸡胚半数感染量(EID₅₀)与血清凝集价(HA)的测定。结果显示,NDV LaSota株在BHK-21细胞上增殖的最适TPCK-胰酶浓度为3μg/mL,最适接毒量为10^6.375 EID₅₀,细胞数量为1×10~6个,培养基pH为7.2,且可用无血清培养基进行培养,BHK-21细胞接种NDV LaSota株后最佳收毒时间为34～36 h。应用BHK-21细胞采用转瓶培养的方式对NDV LaSota株进行增殖,结果显示,细胞培养液TCID₅₀值为10^7.0/0.1 mL,EID₅₀为10^7.5/0.1 mL,HA效价为1∶256。因此,应用以上条件增殖培养NDV LaSota株,完全适用于该病毒的规模化生产,且符合现行的兽医生物制品与检验制造规程。