实时荧光定量PCR法检测抗虫棉历基因拷贝数方法的建立

[目的]建立并完善Taqman实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法.[方法]通过Bt基因序列,利用软件Primer5.0设计引物和探针.然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒pG4AB,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线.[结果j抗虫基因拷贝数与Ct值的关系为Ct=-3.549 632X 43.783 512,相关系数R2为0.997 867.[结论]实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法具有特异性好、灵敏度高的特点.     

早熟、高产陆地棉新品种新垦棉1号的选育及栽培技术

新垦棉1号是由新疆农垦科学院生物技术研究所和甘肃省农业科学院黄羊试验场联合选育的早熟、高产、优质陆地棉常规种,2018年1月通过甘肃省农作物品种审定委员会审定。简要介绍了其选育过程、特征特性和栽培要点。     

一种室内鉴定棉花耐盐性方法的建立及其应用

[目的]探讨棉花幼苗对盐胁迫的生理响应,建立快速鉴定棉花耐盐性的方法.[方法]以苏棉12号为材料,采用在培养基中加入不同浓度NaCl溶液,研究不同浓度盐胁迫对苏棉12号的发芽率、植株鲜重、株高、叶绿素含量、总根数、总根长度、总根面积和总根体积等生理指标的影响.[结果]在盐浓度小于0.8;时,随着盐浓度的升高,棉花的各项生理指标逐渐升高;当盐浓度大于0.8;时,棉花的各项生理指标逐渐降低.[结论]1.0;的盐浓度是对棉花生长由促进到抑制的一个转折,可以作为抗虫棉棉花苗期耐盐性快速鉴定的参考浓度.建立了一种室内快速鉴定棉花耐盐性的方法.通过该方法对20份品种进行室内鉴定,鉴定结果与盐池鉴定结果相一致,该方法能够真实反映材料的耐盐性.     

异源表达irrE转基因烟草的耐盐耐旱性

【目的】IrrE是从耐辐射异常球菌中发现的全局调控蛋白,主要通过修复强辐射等逆境条件下DNA损伤,提高耐辐射异常球菌对极端逆境环境的抗性。研究按植物密码子优化的irrE后导入烟草对转基因烟草耐逆能力的提高,为棉花等作物耐逆育种研究打下基础。【方法】按照植物密码子优化细菌irrE并合成基因;通过酶切连接法构建irrE植物表达载体;通过叶盘法转化烟草并PCR验证获得阳性转基因再生苗;通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析转基因株系中irrE的表达量;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IrrE编码蛋白;通过NaCl和甘露醇模拟盐处理和干旱处理分析纯和转基因株系的耐盐耐旱性,通过测定抗逆相关生理指标鉴定其对植物耐逆的贡献。【结果】按照植物密码子对irrE进行改造,共优化了241个密码子;构建了高效植物表达载体GBI-IE;利用除草剂草甘膦作为筛选剂获得转基因再生幼苗,并通过PCR验证共获得15个独立的转基因株系;通过q RT-PCR分析从中选取两个表达量最高的株系GO1和GO2进行后续的抗逆性分析;Western blot验证IrrE编码蛋白在GO1和GO2中能正确翻译。转基因烟草耐盐耐旱性分析:种子萌发试验表明,正常1/2 MS培养基上,转基因株系GO1和GO2发芽率和非转基因野生型对照之间没有明显的差异。然而250 mmol·L~(-1)NaCl培养基上GO1和GO2萌发率分别为78.8%和90.0%,野生型仅为10.3%,分别提高了68.5%和79.7%。类似地,300 mmol·L~(-1)甘露醇条件下,野生型的萌发率为39.7%,转基因株系GO1和GO2分别提高了42.9%和50.8%;正常萌发的种子移栽到250 mmol·L~(-1) NaCl和300 mmol·L~(-1)甘露醇条件12 d后,转基因株系根长、侧根数以及鲜重等生理指标显著高于野生型对照;温室中正常生长30 d的苗期烟草在250 mmol·L~(-1) NaCl处理下,转基因烟草SOD、CAT活性比野生型对照分别提高了48.80%和88.55%,而MDA含量比野生型对照降低了61.61%,胁迫响应基因Nt ABF2、Nt LEA5、Ntzfp、Nt CDPK2在GO1和GO2转基因株系中表达量均显著高于非转基因野生型。和盐处理结果类似,300 mmol·L~(-1)甘露醇的处理下,转基因烟草的耐旱生理生化指标均优于非转基因对照。【结论】烟草中异源表达耐辐射异常球菌irrE可以显著提高耐盐耐旱性;其多效性耐非生物胁迫能力的提高表明其可作为植物耐逆基因工程的优良基因源。     

实时荧光定量PCR法检测抗虫棉Bt基因拷贝数方法的建立

[目的]建立并完善Taqman实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法。[方法]通过Bt基因序列,利用软件Primer5.0设计引物和探针,然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒pG4AB,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线。[结果]抗虫基因拷贝数与Ct值的关系为Ct=-3.549 632X+43.783 512,相关系数R2为0.997 867。[结论]实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法具有特异性好、灵敏度高的特点。     

转基因抗虫棉Bt基因与npt II基因的遗传与表达

采用花粉管通道法将含有Bt杀虫基因的pG4AB质粒导入受体棉花中23中,通过卡那霉素筛选,Bt免疫检测条检测,PCR扩增对转基因抗虫棉的各个自交世代进行跟踪研究.结果表明,具有卡那霉素抗性的单株能扩增出Bt基因,而且均有Bt杀虫蛋白表达.Bt基因与npt II基因均整合进了棉花基因组中,相互之间紧密连锁遗传,均稳定表达,因此报告基因npt II可用于研究Bt基因的遗传情况.     

海岛棉类受体胞质激酶基因GbRLCK10在抗病中的作用

GbRLCK10为海岛棉响应黄萎病菌和激素胁迫基因。为研究该基因在烟草中的功能，利用农杆菌介导法将其导入烟草。对获得的阳性植株通过室内接种法进行抗病性鉴定，并利用qRT-PCR技术分析水杨酸途径关键基因NtPR1、NtNPR1和乙烯途径关键基因NtEIN4、NtNTHK2及茉莉酸途径关键基因NtJAZ1、NtAOS的表达特征。结果表明，接种前，转基因植株中NtPR1、NtNPR1、NtJAZ1基因的表达量显著高于野生型植株；而野生型植株中NtEIN4、NtNTHK2、NtAOS基因表达量显著高于转基因植株。接种黄萎病菌后，转基因植株的病情指数显著高于野生型；野生型植株感病后，NtPR1、NtNPR1、NtAOS基因的表达量显著高于发病前，而NtJAZ1、NtEIN4、NtNTHK2基因的表达量显著低于发病前；转基因植株感病后，NtPR1、NtNPR1、NtEIN4、NtAOS基因的表达量均显著高于发病前，而NtJAZ1、NtNTHK2基因的表达量均显著低于发病前；与野生型相比，转基因植株NtPR1、NtAOS基因的表达量显著降低，而NtNPR1、NtEIN4、NtJAZ1、NtNTHK...     

中生棉4号的选育及栽培技术

中生棉4号在河南省植棉区春播生育期109 d，株高111.2 cm，株型松散，茎秆粗壮，长势强，Ⅱ式果枝，高抗枯萎病，耐黄萎病，抗棉铃虫。2年区域试验平均结果显示，中生棉4号666.7 m²籽棉、皮棉和霜前皮棉产量分别为272.7 kg、113.3 kg和106.8 kg。介绍了中生棉4号的选育过程、特征特性及田间栽培技术要点。