猪流行性腹泻病毒感染Vero-E6细胞诱导凋亡机制的研究

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)诱导体外细胞凋亡的机理,本研究利用荧光定量PCR方法结合流式细胞术检测PEDV感染Vero-E6细胞后凋亡分子的变化情况.荧光定量PCR结果表明,抑制细胞凋亡因子Bcl-2在PEDV感染后基因转录水平迅速升高,在24 h达到峰值后被抑制;而促凋亡因子的蛋白水解酶caspase8和caspase3在PEDV感染后基因转录水平也随之提高,在48 h达到峰值.流式细胞术结果表明PEDV感染细胞48 h后促凋亡分子中的蛋白水解酶Caspases被活化.该研究结果揭示了PEDV感染细胞能够拮抗细胞存活信号通路,引起细胞凋亡,其中凋亡调节因子Bcl-2、caspase3和caspase8在细胞凋亡发生过程中起关键作用.     

玉米耕葵粉蚧的发生特点与综合防治

阐述玉米耕葵粉蚧在茌平县的发生规律与危害特点,并总结出从合理轮作、加强田间管理、化学防治等方面进行综合防治的措施,从而为防治玉米耕葵粉蚧提供参考。     

猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白基因的修饰及原核表达的研究

猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白是诱导猪产生特异性中和抗体的主要结构蛋白,包括A,B,C,D4个抗原决定位。为进一步生产TGEV植物转基因疫苗提供可操作性强、具免疫活性的外源基因,以猪传染性胃肠炎华毒弱株(TGEVH)的S基因为基础,扩增并连接4个抗原决定位相应的碱基序列,构建pPROEX-HTa原核表达载体,转化大肠杆菌诱导表达。结果表明,修饰后的S蛋白的表达量为19.8%,仍能和相应的血清发生抗原抗体反应。     

猪捷申病毒中国株3ABC基因的克隆及序列分析

根据已报道的Swine/CH/IMH/03基因序列设计1对引物,从已分离的中国株捷申病毒中提取总RNA,经RT-PCR扩增得到3ABC基因.并将该基因克隆到pMD18-T载体中,经序列测序,并与GenBank上的14种毒株序列进行比对.结果表明:猪捷申病株中国株(PTV-3ABC)与F65毒株、PTV-1毒株、Swine/CH/IMH/03毒株和Talfan毒株的同源性比较高,分别为96.5%,99.5%和99.4%分别为99.4%,氨基酸同源性分别为95.6%,98.8%,98.4%和98.8%.系统发育树表明,此中国株捷申病毒属于PTV-1型.     

中职校德育课教学实效性的反思与对策

德育课要做到知识学习与能力培养和行为养成相统一,切实增强针对性、实效性和时代感。德育课教学成效如何,直接关系到所培养人才的素质。笔者根据中职校德育课的培养目标,针对当前中职学校德育课教学实效性不佳的状况,分析、反思德育课教学的现状和成因,提出提高中职校德育课教学实效性的对策。     

2010—2011年仔猪腹泻的病因分析和防控措施

自2010年12月起，我国主要养猪省份相继出现了以哺乳仔猪腹泻和高死亡率为特征的猪病，给我国的养猪业造成了很大的经济损失，导致我国猪肉价格不断上涨。对于该次哺乳仔猪腹泻的病因众说纷纭，使广大猪场管理人员感到迷惑和恐慌。笔者多次和现地养猪场的管理人员、技术人员及哈尔滨维科生物技术开发公司的业务员进行交流，了解现地猪场的疫情，归纳总结了2011年哺乳仔猪腹泻病的特征。     

2011年～2012年G9型猪轮状病毒流行病学调查及VP7基因遗传进化分析

为分析G9型猪轮状病毒(RV)的遗传变异情况,本研究根据GenBank中VP7序列设计合成一对扩增VP7基因的引物,采用PCR方法对2011年～2012年分离的部分RV VP7基因进行扩增、克隆和序列测定,并进行比对和遗传进化分析.结果表明:531份病料中RV阳性份数为39,阳性率为7.34％;而在检测的121个猪场中,共有23个猪场显示阳性,猪场阳性率为19％.VP7基因全长1 062 bp,含有一个982 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸.与参考病毒株VP7全长基因核苷酸比较,同源性为91.5％～99.3％.在31nt、56 nt、75 nt、82 nt、191 nt、215 nt等位置均存在点突变,无插入和缺失.核苷酸系统发育进化树表明:黑龙江省哈尔滨市、桦南、绥化,辽宁省大连市、内蒙古自治区采集病料样品的基因间差异较小,与采集自中国广西、浙江、贵州、北京的病料样品基因相比差异性较大,这表明VP7基因存在地域差异.     

猪流行性腹泻病毒蛋白对Vero E6核蛋白B23.1的影响

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)核蛋白N对Vero E6细胞核仁蛋白B23.1的影响,将本实验室构建的DsRed-N1/B23.1重组质粒转染Vero E6细胞,转染6h后接种PEDV,分别在转染后12、18h和24h三个时间点,进行病毒感染细胞的间接免疫试验,同时设未感染对照组,而后利用激光共聚焦显微镜分析感染和转染细胞中B23.1蛋白的变化。结果表明,PEDV N蛋白与Vero E6核蛋白B23.1有共定位特征,在PEDV感染Vero E6细胞12h后,B23.1蛋白开始发生变化,随着时间的延长逐渐碎裂、分散。这个结果提示,病毒可能通过破坏核仁的结构和核仁蛋白的功能,进而为病毒的复制提供便利。     

猪流行性腹泻弱毒株的培育

用ＰＥＤＶＣＶ７７７株强毒适应Ｖｅｒｏ细胞系并传至１４７代。以ＰＥＤＶ沪株做效检用强毒，传代毒８３代之后适应仔猪肾原代细胞，自９０年代起进行了５次克隆纯化，克隆是２次群斑（由５～７个单斑组成）的基础上，再进行３次单斑挑选（均是１ｍｍ以内小空斑）以８３－７斑５株继续传代并做系列试验，传代毒的毒价为１０＾７．０～１０＾７．５ＴＣＩＤ５０／０．３ｍｌ。免疫接种途径为后海穴位，克隆后５代（总代次１０４代）     

猪传染性胃肠炎与猪流行性腹泻二联疫苗及其应用

我所研制成的猪传染性胃肠炎(TGE)和猪流行性腹泻(PED)二联灭活苗及二联活疫苗，是预防由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的仔猎呕吐，水样腹泻及新生仔猪高死亡率(可达100％)的高度传染性肠道病发病的有效措施。用于妊娠母猪的被动免疫以保护仔猪，也用于主动免疫保护不同年龄的猪只。