框镜鲤维氏气单胞菌CY0806株鞭毛flaA基因的克隆与生物信息学分析

以框镜鲤Cyprinus carpio维氏气单胞菌Aeromonas veronii CY0806株细菌基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得flaA基因,将其克隆并测序,测序结果与气单胞菌属的不同菌株进行相似性分析,并对flaA基因编码蛋白质进行生物信息学分析.结果显示:获得框镜鲤维氏气单胞菌鞭毛flaA基因,长915 bp,编码304个氨基酸,系统进化树分析,其与其他维氏气单胞菌flaA基因处于同一分支,相关生物信息学分析显示,flaA基因编码的蛋白质相对分子质量32 098.66,等电点5.57,半衰期30 h,不稳定系数为32.31,脂肪系数81.05,不存在信号肽和跨膜区,二级结构预测:flaA基因以α螺旋和β折叠为主,同时,以同源建模法预测了flaA基因编码蛋白的三维立体结构.     

牛分枝杆菌特异性多重PCR反应在临床样本检测中的应用

本试验应用建立的三重PCR反应检测256份血液样本,结果其中的2份样本呈阳性.应用在线blast进行同源性比较,结果发现,牛分枝杆菌特异性基因IS6110,IS1081和recA与牛分枝杆菌AF2122/97株的同源性均达到99％以上.     

框镜鲤维氏气单胞菌的生物学特性

研究分别测定了维氏气单胞菌CY0806在液体LB中的生长曲线,培养温度、pH值、渗透压对其生长的影响,在不同培养基的生长状况,对小鼠和几种不同的养殖鱼类的致病力情况,以及毒力因子检测。结果显示:菌株CY0806在液体LB培养基中存在二次生长现象;其可以在营养琼脂、RS培养基、TSA培养基、麦康凯培养基、营养肉汤中生长良好;该菌株有较强的耐受性,可以在pH值3～11、培养温度20℃～40℃、氯化钠含量在0%～5%中生长;可以引发小鼠、鲢、团头鲂死亡,引起鲫、乌鳢发病;该菌株具有多种毒力基因:溶血素、气溶素、细胞毒性肠毒素、鞭毛、磷脂酶、丝氨酸蛋白酶、LuxS等。     

森林脑炎病毒E基因DomainⅢ段的克隆表达及鉴定

从森林脑炎病毒森张株的细胞培养液中提取总RNA,通过RT-PCR扩增E蛋白基因DomainⅢ段,克隆入原核表达载体GSTpET-30a(+)中,构建重组原核表达质粒,用IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化后,进行Western blot鉴定,并用针对不同病毒的兔免疫血清验证其检测特异性。重组原核表达质粒GSTpET-30a-ED3经酶切证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约为41 kD,主要以包涵体的形式表达,并可与TBE阳性兔免疫血清特异性反应。结果表明:成功克隆了森林脑炎病毒森张株E蛋白基因DomainⅢ段,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,获得的ED3蛋白质具有良好的特异性。     

榆耳发酵产物的体外抑菌及免疫增强作用

为探讨榆耳G930菌种发酵上清液的抑菌谱及理化因素对其体外抑菌作用的影响和榆耳发酵液多糖对小鼠的免疫增强作用,采用杯碟法对体外抑菌作用进行研究,通过测定小鼠脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬率、血清溶血素水平及淋巴细胞转化率对免疫增强作用进行研究。结果表明,榆耳发酵上清液抑菌谱较广,对肠道致病菌的体外抑制作用强于对呼吸系统致病菌的体外抑制作用;榆耳发酵上清液中的抑菌物质具有良好的热稳定性及耐酸性,但在碱性环境中易失活。小鼠饲喂榆耳发酵上清液多糖21 d后,所有试验组小鼠的血清溶血素水平均极显著增强(P0.01);当榆耳发醇上清液多糖的剂量为5、10 mg/d时,可以显著增强小鼠的脾脏指数、淋巴细胞转化率(P0.05),极显著增强腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数(P0.01),说明榆耳发酵液多糖可增强机体免疫功能。     

抗菌肽高表达量黄粉虫对肉鸡生长性能、肠道菌群和小肠绒毛形态的影响

为探讨抗菌肽高表达量黄粉虫对肉鸡生长性能、肠道菌群和小肠绒毛形态的影响。试验以玉米和豆粕为主要原料配制饲粮,试验采用单因子随机区组设计,选择1日龄雌雄各半、体质量相近、健康的爱拔益加（AA）肉鸡300只,测体质量后随机分为3个组,分别为对照组、黄粉虫未诱导组和黄粉虫诱导组,每组5个重复,每个重复20只鸡。对照组饲喂基础日粮,未诱导组和诱导组分别用未诱导和诱导的2%黄粉虫粉等量替代基础日粮中的鱼粉。试验期42d。结果显示,各组肉鸡的日采食量差异均不显著（P=0.559）,黄粉虫诱导组日增重极显著高于对照组和黄粉虫未诱导组（P=0.005）,而料肉比极显著低于对照组和黄粉虫未诱导组（P〈0.000 1）。黄粉虫诱导组大肠杆菌数量极显著低于对照组和黄粉虫未诱导组（P〈0.000 1）,各组肉鸡乳酸杆菌数量在21目龄差异不显著（P=0.191）,42日龄差异显著（P=0.034）。添加抗菌肽高表达量的黄粉虫极显著提高十二指肠、空肠和回肠小肠绒毛的长度（P〈0.000 1）和绒毛长度与隐窝深度的比值（P〈0.000 1）,各组肉鸡的隐窝深度差异不显著,但呈诱导组〈未诱导组〈对照组的趋势。结果表明,抗菌肽高表达量黄粉虫能够提高肉鸡的生长性能,降低肠道中大肠杆菌数量,促进肠道中乳酸杆菌繁殖,改善小肠绒毛形态。     

猪附红细胞体病的诊断与防治

为了解猪附红细胞体病的概况,有效控制该病的流行与发展,减少该病对养猪业的危害,笔者通过对猪附红细胞体病的病原体、流行特点、临床症状、诊断与防治等方面进行了系统阐述,目的是让广大兽医工作者深刻了解猪附红细胞体病的特点,以此采取有效措施控制该病的发生与流行,进而促进养猪业的健康发展。     

一株鹿源纤维素降解菌Lu14的分离与鉴定

从梅花鹿粪便中分离筛选出24株芽孢杆菌,初筛获得10株具有纤维素降解能力的菌株,经过复筛,菌株Lu14纤维素降解能力较高,其内切葡聚糖酶活和滤纸酶活分别为1.106 U/m L和0.76 U/m L。对Lu14进行菌落形态、生理生化特征鉴定和16S rDNA序列分析,结果发现其与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的相似性高达99.99%,故鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。     

狂犬病病毒免疫组织化学定位方法的建立

应用抗狂犬病病毒的特异性抗体及免疫组织化学方法检测接种了狂犬病病毒SRV-9毒株感染的小鼠脑组织,并对狂犬病病毒抗原进行了组织定位分析。结果表明:在小鼠的小脑分子层蒲肯野氏细胞胞浆出现明显的局灶型阳性颗粒。说明免疫组织化学方法检测狂犬病病毒敏感度高、直观,可作为诊断狂犬病病毒的辅助性方法,对研究狂犬病病毒在脑组织神经细胞及其他组织器官内的分布具有一定的意义。     

不同转染介质对狂犬病病毒糖蛋白基因免疫的效应

将狂犬病病毒糖蛋白 ( RGP) c DNA Bgl 片段 ( 1 .6 7kb)分别克隆进质粒 p GFP-Cl、p SV2 -dhfr和pc DNA3 ,构建了重组质粒 p GFP-C1 -RGP、p SV2 -RGP和 pc DNA3 -RGP,通过脂质体和聚乙烯亚胺 ( PEI)包裹后分别转染 BHK-2 1细胞和乳鼠脑内接种 ,3种重组质粒均能表达出 RGP。表达水平高低依次为 p GFP-C1 -RGP>pc DNA3 -RGP>p SV2 -RGP。 3种重组质粒分别以全裸质粒、质粒 -脂质体、质粒 -PEI形式 ,经骨骼肌免疫小鼠 ,间接 ELISA检测。结果显示 ,免疫鼠血清中特异性抗体水平明显高于对照组 ;80 %免疫小鼠能抵抗狂犬病病毒强毒的攻击。全裸质粒免疫诱生的抗体水平同其剂量相关 ;而以 PEI或脂质体作为转染介质、质粒接种量超过 2 0μg时 ,诱生抗体水平不再随质粒剂量增大而显著变化。质粒免疫后 1 50 d采用 PCR仍然能从注射部位检测到 RGP基因的存在