猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机制及防制研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)属动脉炎病毒科,动脉炎病毒属,感染猪可引起猪繁殖与呼吸障碍综合征,是一种严重危害养猪业的病毒.本文综述了近年来PRRSV与宿主细胞间关系及其致病机制方面的研究进展,并对预防猪繁殖与呼吸综合征的几种疫苗的研制及特点进行了比较分析,为今后猪繁殖与呼吸综合征的控制提供参考.     

禽流感的发病机制及预防措施

从血凝素、神经氨酸酶、聚合酶、细胞因子与致病性的关系论述了禽流感的发病机制,并提出了禽流感的预防措施。     

鹅霍乱蜂胶佐剂双价灭活菌的研究

从吉林省不同地区鹅霍乱死亡鹅心血中分离出２３株多杀巴氏杆菌．通过血清型的分析．采用强毒菌株Ｃ４８－１（５：Ａ）和分离强毒株ＪＥＨ０１（８：Ａ）制备了蜂胶佐剂双价灭活菌苗．同时用弱毒株Ｖａｃ制备了菌苗做为试验对照组．通过两种菌苗的攻毒试验．证明蜂胶佐剂双价灭活菌较弱毒苗免疫期长、保护率高、安全可靠．     

高致病性禽流感临床表现和免疫诊断

禽流感是由A型流感病毒的某些亚型病毒所引起的禽类和鸟类的高度接触性和流行性的传染病，禽流感的发病和致死率与禽的种类、易感性、病毒毒株的毒力、禽类的年龄、性别、环境因素、饲养状况及疾病并发情况密切相关，其中毒株毒力的影响最为突出，高致死性毒株引起的死亡率和发病率可达100％。近年来，大部分禽流     

狂犬病无毒疫苗株SRV_9G基因主要功能区的序列分析

通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出了狂犬病无毒疫苗株（ＳＲＶ９）糖蛋白（Ｇ）基因膜外主要功能区的两个片段，共约７４０个ｂｐ（４５０～１１４４），含有可以诱导中和抗体的两个抗原决定簇和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平端连接将两片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａＩ位点。采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。将这一序列与已发表的狂犬病病毒ＳＡＤＢ１９株的相应序列通过计算机进行比较分析。结果证明两者核苷酸序列的同源性为９８．６％，推导氨基酸序列的同源性为９５．９％，主要抗原区内的几个重要氨基酸（如３３３位精氨酸等）发生了变异，糖基化位点也改变。     

1株犬副流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究

试验旨在分离鉴定犬副流感病毒(canine parainfluenza virus,CPIV),并对其生物学特性进行研究。用Vero细胞接种感染CPIV阳性犬肺脏组织,盲传4代,收集72 h病毒液进行RT-PCR鉴定、电镜观察、血凝试验、热敏性试验、紫外照射试验及病毒一步生长曲线的测定,同时扩增N基因进行序列分析,并构建系统进化树。结果显示,试验成功从出现咳嗽、流鼻涕等呼吸系统疾病症状的病犬肺脏中分离出1株CPIV,命名为CPIV-BJ01;RT-PCR扩增结果发现,在534 bp处有特异性目的条带。病毒电镜观察发现,其超微结构呈圆形、有囊膜、直径在80～200 nm之间;血凝试验显示,病毒在4和37℃均能凝集1%猪红细胞,与报道的CPIV血凝特性一致;病毒对热敏感,长时间高温下病毒毒价会随之下降;紫外照射可使病毒在短时间内对细胞的感染性急剧下降。病毒一步生长曲线测定结果显示,在12～48 h病毒高速增殖,细胞培养液中病毒滴度急剧上升,之后趋于稳定。CPIV N基因序列与19株有代表性的副流感病毒N基因相比,其核苷酸序列同源性为97.1%～99.8%。遗传进化分析表明,CPIV-BJ01与PIV5 1168-1(登录号:KC237064.1)和PIV5 ZJQ 221(登录号:KX100034.1)位于同一分支上,亲缘关系较近。     

非典型猪瘟病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

参照GenBank上登录的非典型猪瘟病毒(atypical porcine pestivirus virus,APPV)全基因组序列设计特异性引物成功从感染APPV阳性样品中扩增出270 bp的APPV基因片段,并将其克隆到pEASY-Bluent Zero Cloning Kit载体,以纯化的重组质粒为模板优化反应条件,建立了检测APPV的特异性荧光定量PCR方法。结果显示,建立的荧光定量PCR方法C_t值与标准品在1.49×10~1～1.49×10¹⁰ copies/μL呈现良好的线性关系,相关系数为R^20.999,斜率为-3.442,扩增效率为95.207%。该方法与PCV2、PRV、PRRSV、PPV及CSFV基因组均无交叉反应,敏感性比常规PCR高出1 000倍,组内和组间重复试验变异系数均小于2%。对临床采集的20份疑似感染APPV的样品进行检测,结果显示应用所建立的荧光定量PCR成功检测到3份APPV阳性样品,而常规PCR仅检测到1份,表明所建立的荧光定量PCR比常规PCR灵敏度更高。本试验所建立的APPV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,可实现对APPV早期诊断及感染进行定量分析检测。     

鲤春病毒G蛋白基因实时荧光定量RT-PCR标准曲线的构建

为了更加精确地对鲤春病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)进行定量检测,试验以Taq Man探针法为基础,提取鲤春病毒总RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增,得到目的条带并回收,将目的片段与pMD18-T载体连接导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒并进行实时荧光定量RT-PCR测定,利用反应得到的Ct值与各浓度梯度质粒模板拷贝数的对数值绘制标准曲线。结果表明:以鲤春病毒cDNA为模板进行PCR扩增,获得清晰的目的条带,与预期相同;对鲤春病毒G蛋白重组质粒进行实时荧光定量RT-PCR扩增,所得扩增曲线有较好的重复性,各浓度梯度扩增曲线有明显的规律性,低浓度质粒模板扩增明显;获得的标准曲线有明显的线性关系,曲线回归系数为0.992。说明实时荧光定量RT-PCR方法敏感性较高、稳定性好、可靠精确,可以作为鲤春病毒检测的定量方法。     

转猪轮状病毒VP6基因烟草植物的获得

根据GenBank中轮状病毒VP6序列设计1对引物，从pGEM—T—VP6质粒中扩增VP6PCR产物。将VP6克隆到PBI121质粒中，转化根癌农杆菌LBA4404，挑取阳性菌落的质粒进行酶切鉴定。用叶盘法转化烟草，获得再生苗，用RT—PCR、PCR和PCR—southern杂交方法进行鉴定，结果表明，VP6基因已成功地转入烟草中。