犬用配方羊奶粉对比格幼犬生长性能和肠道菌群的影响

为了探究配方羊奶粉对比格幼犬生长性能与肠道菌群的影响,选取12只15日龄比格犬,随机分为对照组和羊奶粉组,每组6只,对照组幼犬由母犬母乳喂养,羊奶粉组幼犬饲喂足量配方羊奶粉,每3d测量体重并计算体重增长,18 d后采集血样进行血常规、血清生化、免疫因子指标检测,采集粪样进行肠道菌群测序.结果 显示:相比于对照组,羊奶粉...     

鲤春病毒G蛋白基因实时荧光定量RT-PCR标准曲线的构建

为了更加精确地对鲤春病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)进行定量检测,试验以Taq Man探针法为基础,提取鲤春病毒总RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增,得到目的条带并回收,将目的片段与pMD18-T载体连接导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒并进行实时荧光定量RT-PCR测定,利用反应得到的Ct值与各浓度梯度质粒模板拷贝数的对数值绘制标准曲线。结果表明:以鲤春病毒cDNA为模板进行PCR扩增,获得清晰的目的条带,与预期相同;对鲤春病毒G蛋白重组质粒进行实时荧光定量RT-PCR扩增,所得扩增曲线有较好的重复性,各浓度梯度扩增曲线有明显的规律性,低浓度质粒模板扩增明显;获得的标准曲线有明显的线性关系,曲线回归系数为0.992。说明实时荧光定量RT-PCR方法敏感性较高、稳定性好、可靠精确,可以作为鲤春病毒检测的定量方法。     

锦鲫致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析

为鉴定长春市某水产养殖场发病锦鲫(Brocaded crucian)病原菌,本研究从患病锦鲫体内分离得到一株优势菌株,并对其进行了常规理化特性、分子生物学、人工感染试验及药敏检测。结果显示:分离菌株为革兰氏阴性短杆菌,其理化特性与维氏气单胞菌(A.veronii)特征相符,并且其16S r DNA基因、gyr B基因、dna J基因、rpo D基因与Gen Bank中A.veronii相应基因序列的同源性均高达99%,在系统进化树中与A.veronii聚为一族,将其命名为JLND-1611;人工感染试验结果显示,锦鲫感染7 d后全部死亡,临床症状与自然病例相似,而且对斑马鱼LD_(50)为1.51×10~(2.67)cfu/m L;毒力基因检测显示,从JLND-1611可以扩增出6种毒力因子:脂肪酶(lip)、核酸酶(exu)、密度感应系统调控基因(luxs)、粘附素(aha)、气溶素(aer)及氨酸蛋白酶(ser);综合检测结果表明该分离株为致病性A.veronii。药敏试验结果显示,分离株对19种抗菌药物中头孢曲松、头孢哌酮及多西环素等药物敏感。本研究为锦鲫感染A.veronii的鉴定及治疗药物的选取提供了参考依据。     

微生态制剂调控比格幼犬生长性能和肠道菌群的研究

【目的】 研究复合微生态制剂对哺乳期比格幼犬生长性能与肠道菌群结构的影响。【方法】 选取12只15日龄比格犬, 随机分为对照组和微生态制剂组, 每组6只。微生态制剂组幼犬每日灌喂犬用微生态制剂20 mL, 对照组幼犬灌喂生理盐水20 mL, 于试验第0、3、9、12、15、18、21、25、28 d测量体重并计算净增重, 第28天采集全血样、血清样和粪样。全血样进行红细胞(RBC)计数和血红蛋白(HGB)浓度测定, 血清样检测碱性磷酸酶(AKP)、无机磷(IP)、总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、白介素-1β(IL-1β)、脂多糖(LPS)含量; 粪样进行菌群测序, 统计Goods coverage指数、Observed species指数和Shannon指数, 对样本进行PCoA分析, 并统计各样本在门、属、种水平上的物种分布。【结果】 与对照组相比, 微生态制剂可显著提高幼犬体重(P<0.05), 显著增加血清中RBC数量及HGB、AKP和IP含量(P<0.05), 促进比格幼犬生长发育; 微生态制剂可显著降低血清TG含量(P<0.05), 但对TCHO、IgA、IgG、IL-1β、LPS含量无显著影响(P>0.05)。Observed species指数和PCoA分析结果表明, 微生态制剂可显著改变幼犬肠道菌群结构(P<0.05)。在门水平上, 微生态制剂组幼犬肠道菌群拟杆菌门和放线菌门相对丰度显著降低(P<0.05), 梭菌门、酸杆菌门和疣微菌门相对丰度均显著增高(P<0.05);在属水平上, Escherichia-Shigella、霍尔德曼氏菌属、双歧杆菌属和布劳特氏菌属相对丰度均显著降低(P<0.05), 梭菌属、链球菌属、梭杆菌属、乳球菌属和片球菌属相对丰度均显著增高(P<0.05)。在种水平上, 大肠杆菌和短双歧杆菌相对丰度均显著降低(P<0.05), 犬大肠梭菌、格氏乳球菌、Vagococcus teuberi、贝莱斯芽孢杆菌、粪肠球菌和死亡梭杆菌相对丰度均显著增高(P<0.05)。【结论】 犬用微生态制剂可显著促进幼犬生长, 提高其血氧含量, 改变肠道菌群结构, 优化肠道菌群组成。     

黄金鲫致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析

为确定吉林省黄金鲫鱼发病死亡的原因,从患病黄金鲫体内分离到致病菌JLJ-1,对该菌进行形态学观察及生理生化特性的鉴定,并对16S rDNA和管家基因gyrB、rpoD、dnaJ序列、毒力基因携带情况及耐药性进行了分析。结果表明,该菌为革兰阴性菌,结合细菌形态学特征及其生理化生化特性与维氏气单胞菌(Aerornonas veronii,A.veronii)基本相同;16S rDNA与gyrB、rpoD、dnaJ序列进化比对分析显示,该病原菌与A.veronii同属一个分支,且同源性较高。将分离菌人工感染黄金鲫,7d后黄金鲫全部死亡,且临床症状与自然病例相似。通过毒力基因检测发现,JLJ-1株可扩增出6种毒力因子:气溶素(aer)、细胞毒性肠毒素(act)、黏附素(Aha)、丝氨酸蛋白酶(ser)、核酸酶(exu)及脂肪酶(lip)。药敏试验显示,该菌对氟苯尼考、头咆哌酮及头炮曲松等药物比较敏感。本研究为黄金鲫感染A.veronii的鉴定及治疗药物的选取提供科学依据。     

猪源复合乳酸菌的筛选及其改善仔猪肠炎的研究

为了探究猪源复合乳酸菌对鼠伤寒沙门菌感染仔猪引起的肠道损伤的保护效果，对实验室前期从猪粪便中分离并保存的23株猪源乳酸菌进行体外耐酸、耐胆盐及体外抑菌试验筛选，并将筛选得到的乳酸菌等比例混合，形成复合乳酸菌。选取16只日龄、体重相近的断奶仔猪，随机分成4组，分别饲喂复合乳酸菌、沙门菌、复合乳酸菌+沙门菌和无菌PBS(对照组),每日记录仔猪体重变化，于6 d后屠宰采样，分别采集回肠、结肠及回肠内容物，利用苏木精-伊红(HE)染色观察回肠、结肠病理变化，过碘酸-雪夫(PAS)染色检测回肠中杯状细胞数量，16S rRNA测序检测回肠内容物中微生物组成，并测定沙门菌载量和肠道炎症相关细胞因子、黏蛋白(muc2)表达量。结果：经体外试验筛选得到5株耐酸、耐胆盐及体外抑菌效果良好的乳酸菌，等比混合组成的复合乳酸菌能有效改善鼠伤寒沙门菌导致的仔猪体重增长减缓(P=0.087),并能修复肠道组织学损伤，显著降低回肠中鼠伤寒沙门菌载量(P<0.05),抑制促炎因子白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达(P=0.083,P=0.073)。本研究还发现，复合乳酸菌能够显著改善沙门菌...