番木瓜环斑病毒弱毒株的构建及分析

弱毒株是利用交叉保护防治植物病毒病害的关键限制因子。通过对马铃薯Y病毒属病毒(强、弱毒株)的全长及部分氨基酸序列比对分析,筛选出在亲本强毒株PRSV-LM的P1和HC-Pro基因上的8个可能与致病性相关的氨基酸突变位点(I_(309)、K_(481)、K_(598)、R_(728)、F_(753)、L_(754)、N_(787)和D_(944))。采用定点突变和Gibson拼接法,分别成功构建了4种含有2个突变位点(L_(754)和N_(787))、4个突变位点(I_(309)、K_(481)、F_(753)和D_(944))、6个突变位点(I_(309)、K_(481)、F_(753)、L_(754)、N_(787)和D_(944))和8个突变位点(I_(309)、K_(481)、K_(598)、R_(728)、F_(753)、L_(754)、N_(787)和D_(944))的PRSV-LM全长c DNA侵染性克隆突变体:p Gprsvm~2、p Gprsvm4、p Gprsvm6和p Gprsvm8。经人工接种、病症观察和RT-PCR检测,4种突变体克隆均能系统性侵染非转基因番木瓜植株,除克隆p Gprsvm~2的病症表现与亲本强毒株PRSV-LM一致外,其他多位点突变的克隆p Gprsvm4、p Gprsvm6和p Gprsvm8在番木瓜植株上的病症严重程度出现依次减弱,而克隆p Gprsvm8的病症最弱,且延迟2周发病。本实验初步验证了6个氨基酸突变位点(I_(309)→S、K_(481)→Q、K_(598)→E、F_(753)→L、R_(728)→I和D_(944)→N)与PRSV-LM的病症表现及致病力相关,其中K_(598)→E和R_(728)→I可能是影响致病性的关键位点。     

兰州百合连作土壤水浸液自毒作用研究

【目的】探讨兰州百合(Lilium davidii var.unicolor salisb)连作土壤水浸液对自身幼苗生长的障碍因素及其作用机制。【方法】设置蒸馏水(CK)及正茬、连作2年、连作4年兰州百合根际土壤水浸液各50,100,200,300 mg/mL,共13个处理,以兰州百合种球为受试对象,测定不同条件下兰州百合幼苗生长、抗氧化酶活性、渗透调节物质及细胞膜透性的变化,并利用GC-MS技术分析各处理土壤中存在的主要自毒物质。【结果】正茬、连作2年及连作4年兰州百合根际土壤水浸液对兰州百合幼苗的生长均存在"低促高抑"现象,且抑制作用随连作年限的延长而增强。随水浸液质量浓度的增加,兰州百合幼苗CAT和SOD活性逐渐升高,POD活性先上升后下降,MDA含量、相对电导率、脯氨酸及可溶性糖含量的变化呈不断上升趋势,当水浸液质量浓度上升至300 mg/mL时,3个处理中各指标的上升或下降程度与对照相比均达显著差异水平(P0.05)。兰州百合正茬、连作2年及连作4年根际土壤中分别鉴定出9,15和17种化合物,主要包括2,3-丁二醇、1,2,3-三甲苯、邻苯二甲酸二丁酯、对苯二甲酸二辛酯、抗氧剂2246等化合物,其中大部分为自毒物质。【结论】兰州百合正茬、连作2年及连作4年根际土壤水浸液质量浓度达到300 mg/mL时,对其幼苗的生长会产生显著抑制作用。连作土壤中存在的自毒物质可以改变兰州百合植株体内的抗氧化酶活性,破坏细胞膜结构和功能,抑制兰州百合植株的生长,是导致兰州百合连作障碍发生的重要原因之一。     

菜粕有机肥解除设施连作辣椒土壤障碍因子的效果研究

由于辣椒种植方式的调整致使辣椒连作障碍连连发生,研究了菜粕有机肥对辣椒连作土壤的障碍因子的解除效应,为在生产实际中克服连作障碍提供理论和实践依据。菜粕处理可以显著改善连作辣椒的生长状况,减少辣椒植株的死苗现象,增强了其对恶劣环境的抵抗能力。通过种子发芽率实验表明连作辣椒的生长状况恶化是由一些存在于土壤中的化学因子引起的,而非生物因子。菜粕处理减少土壤中的一些化学因子对辣椒植株抑制作用,它的机理可能是由于菜粕能对土壤的一些有微生物种群的定向激发,使微生物的数量和活性有明显提高,微生物的功能也发生了显著改变,微生物的活动能够降解、转换一些有毒物质,这为以后解决有化感作用引起的连作障碍问题提供新思路和新理论依据。     

西藏高原主要麦类作物真菌毒素污染与产毒真菌分布研究

为探明西藏麦类作物中真菌毒素污染程度及产毒真菌种类与分布,以青稞、小麦为研究对象,对其籽粒中多种毒素进行分析,并对毒素污染阳性样品进行真菌分离鉴定。结果表明,2018年毒素总检出率为20.13%;杂色曲霉毒素检出率最高,为10.74%;OTA超标率最高,为3.36%;小麦的毒素检出率和超标率都高于青稞,二者的污染毒素种类以OTA、ZEN、ST为主。西藏高原42份被真菌毒素污染的农作物籽粒中共分离到199份真菌,分属23属67种真菌,青霉属为优势属,曲霉属次之。     

基于CRISPR/Cas9系统的MDCK细胞IFN-β1编码序列的敲除

为了建立高品质的犬肾(MDCK)单克隆细胞系,使用CRISPR/Cas9技术实现MDCK细胞IFN-β1基因的敲除,构建细胞培养禽流感病毒(AIV)增殖体系。首先,根据CRISPR/Cas9系统的技术要求构建了Cas9表达载体和sgRNA载体;然后,用3种载体共转染MDCK细胞,通过GFP阳性特征分选单细胞克隆,单细胞克隆培养在96孔板中。通过PCR扩增和对IFN-β1靶序列进行测序,确定了阳性MDCK单细胞克隆中IFN-β1的敲除。结果成功构建了具有IFN-β1敲除的MDCK单细胞克隆细胞系,与原始细胞相比,该细胞系的病毒增殖能力提高。     

中药十八反临床配伍一得

<正>中药"十八反"、"十九畏"、"妊娠禁忌歌"等,是前人与疾病作斗争时总结出来的经验和教训,有一定的实践依据和科学道理,素来为广大中兽医工作者所遵循,千百年来一直做为一道鸿沟而不敢涉足。余在一次治疗马胸腹积水症时,抱着试试看的心态踏入禁区,配伍中同时出现"生甘草"、"醋甘遂"、"醋芫花",非但没有出现毒性反应,而且出现了奇迹般疗效,后经数次验证,同样获效。现将病案择录如下,请同行验证。     

大华农:构建大肠杆菌与副猪嗜血杆菌弱毒融合菌株获发明专利

<正>大华农1月19日发布公告称,公司近日收到国家知识产权局颁发的"猪大肠杆菌与副猪嗜血杆菌弱毒融合菌株的构建方法"的发明专利证书。据悉,猪大肠杆菌病和副猪嗜血杆菌病对我国的养猪业带来严重危害并造成极大的经济损失,目前主要依靠抗菌药物、灭活疫苗和亚单位疫苗免疫进行防治。本发明的目的是利用微生物原生质体融合技术,设计并构建出一种猪大肠杆菌与副猪嗜血杆菌弱毒融合菌株,为研制新型的猪大肠杆菌与副猪嗜血杆菌融合二联弱毒疫苗提供了科学依据与理论指导。     

科学使用疫苗 促进家禽发展

<正>笔者在兽医站家禽门诊部工作十几年,发现家禽生病多是由于免疫失败造成的。通过笔者调查了解,造成免疫失败的很重要原因是养殖场不懂得如何防疫,在使用疫苗防疫过程中往往自以为是,不按说明书进行防疫,从而导致频频出现防疫失误。笔者认为有必要纠正这些错误观念,使他们尽快地进入畜禽生产的快车道,也使以后新入门的养殖户少走弯路。1不要总是认为外国疫苗都比国产疫苗好其实,由于我国畜牧兽医科技人员这些年的共同努力,     

一例幼狐后肢瘫痪病例原因分析及诊治

<正>2014年8月中旬,荣成市李某饲养的800只北极狐幼狐,部分幼狐出现后肢瘫痪、无法站立的症状,个别严重者死亡。因发病突然,养殖户不敢耽搁,遂前来服务中心门诊就诊。主诉:因当前水貂出血性肺炎比较流行,为预防肺炎给水貂和狐狸添加左旋氧氟沙星,按每千克体重10mg的量口服,1天2次,服用该药的第2天,部分幼狐就出现后肢无力、无法正常站立行走,然后出现瘫痪或拖拉后腿、