鹅感染多杀性巴氏杆菌和大肠杆菌的分离鉴定

某地一鹅群发生一种以败血、高死亡率为特征的急性传染病．其临床表现为沉郁、不食、下痢等。病变特征以内脏器官充血、出血和坏死为主。本文从鹅体内分离到16株细菌．经鉴定为多杀性巴氏杆菌和大肠杆菌混合感染；并进行了毒力试验和药敏试验，结果表明多杀性巴氏杆菌致病性较强．大肠杆菌致病性稍弱．两菌混合感染致病性最强。恩诺沙星、单诺沙星和头孢氨苄西林对两种菌均为高敏。其余药物为中敏或不敏感。     

奶牛γ-干扰素基因的克隆及其在COS-1细胞中的表达

应用RT—PCR技术从经体外植物血凝素(PHA)刺激诱导的奶牛外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出牛γ-干扰素(bovine interferon-γ,BovIFN-γ)基因。将扩增出的BovIFN-γ克隆到PMD18-T载体中,经过限制性酶切分析筛选正向插入的克隆。测序结果表明,所克隆到的基因编码区序列与已报道基因存在3个核苷酸的差异。将该基因片段从PMD18-T载体中用Hind Ⅲ和BamH Ⅰ双酶切后克隆到真核表达载体pcDNA3．1／zeo ( )中,构建真核表达载体pcDNA—BovIFN-γ,通过脂质体转染COS-1细胞,用鼠抗BovIFN-γ高免血清和FITC标记的羊抗鼠IgG进行间接免疫荧光实验(IFA)检测,结果表明,在COS—1细胞的细胞膜和胞浆内均有rBovIFN-γ表达,细胞病变抑制实验证实,转染后细胞培养上清液具有一定的干扰素活性,转染后72h细胞培养上清液在MDBK细胞上抑制VSV病毒的效价可达到128IU／mL。研究结果为进一步筛选稳定表达BovIFN-γ基因细胞系、开发奶牛疾病预防控制的新产品以及开展奶牛疾病的基因治疗奠定了基础。     

Ⅰ群禽腺病毒江苏分离株(FAVI-JS)的分离鉴定

通过形态学、致细胞病变和序列比较等对一株疑为Ⅰ群禽腺病毒江苏分离株FAVI-JS进行了鉴定,试验结果表明:该病毒为球形、无囊膜、二十面体对称,直径为70 nm～80nm;不具有凝集鸡、鸭、鹅红细胞的能力但可以凝集大鼠红细胞.在鸡胚肾细胞(CEK)上可致细胞变圆,折光性增强等病变;通过PCR方法扩增出的FAVI-JS L、R、ITR三个片段,经过测序分析并与GenBank上发表的属于血清Ⅰ型的CELO病毒、FAV-1、FAV-A和血清8型的禽腺病毒(FAV-8)全基因组的相应序列比较,FAVI-JS与Ⅰ群禽腺病毒各毒株在三个片段上同源性都很高,其中与血清Ⅰ型的同源性高达96%以上,在根据对遗传上具有重要意义的ITR序列绘制的遗传进行树分析,FAVI-JS与Ⅲ群禽腺病毒EDS、Y81G4株明显属于不同的分支,而与群禽腺病毒,特别是与血清Ⅰ型的禽腺病毒更接近,这些结果证明,FAVI-JS确为Ⅰ群禽腺病毒.     

犬瘟热病毒OP株囊膜糖蛋白F基因片段表达产物的免疫原性

根据已发表的犬瘟热病毒OP株核酸序列设计2对引物,以犬瘟热病毒OP株感染Vero细胞收获病毒提取的RNA为模板,应用RT-PCR扩增出F基因的769、832 bp片段.将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进pGEX-6p-1载体中谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因的下游,再将重组质粒转化入宿主菌BL21中,在37℃1.0 mmol/LPTG诱导下,F基因2个片段获得了良好的表达.表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,确定所表达的融合多肽大小分别为54 000、56 000.将表达产物回收后混合免疫小鼠,IFA显示,免疫小鼠血清能与病毒感染细胞呈现特异反应,并表现出116的中和抗体活性,表明体外表达的F多肽保留了天然蛋白的部分抗原性.     

J亚群禽白血病病毒的免疫荧光检测效果

应用特异性抗J亚群禽白血病病毒（ALV－J）的单克隆抗体JE9建立了免疫荧光检测ALV－J抗原和抗体的方法。结果表明，在ALV－JADOL－Hcl感染鸡胚成纤维细胞（CFF）24小时后，可以用1FA检测出阳性细胞，感染72小时后，可以检测出最小病毒感染量≥1．25TCID50／孔。对人工感染ALV－J鸡肾脏冰冻切片检测结果证明，免疫荧光法可以检测出组织中的ALV－J抗原，表现强阳性反应。用重组病毒rBac4817－env感染的Sf9细胞作抗原，可以检测出鸡血清中抗ALV－J的特异性抗体。该方法在ALV－J的控制中必将产生重要作用。     

江苏安徽两省鸭疫里默氏杆菌病的流行病学调查研究

1996年1月至2001年6月，对江苏、安徽两省86个鸭场的发病鸭从日龄、品种、流行季节、流行菌株的血清型以及血清流行病学等方面进行了鸭疫里默氏杆菌病的调查。结果，在57个鸭场的樱桃谷鸭、番鸭及野鸭体内分离到鸭疫里默氏杆菌92株，而从麻鸭的病料中未分离到该菌；分离到病原的鸭最小为12日龄，最大为41日龄，主要集中在12－30日龄；这些地区鸭疫里默氏杆菌病的流行无明显季节性；这些地区鸭场疫里默氏杆菌流行菌株的血清型至少有5个，其中1、2和10是流行株的主型。     

犬瘟热病毒OP株囊膜糖蛋白F基因片段表达产物的免疫原性

根据已发表的犬瘟热病毒OP株核酸序列设计2对引物，以犬瘟热病毒OP株感染Vero细胞收获病毒提取的RNA为模板，应用RT—PCR扩增出F基因的769、832bp片段。将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进pGKX—6p—1载体中谷胱甘肽—S—转移酶(GST)基因的下游，再将重组质粒转化入宿主菌BL21中，在37℃ 1．0mmo1/L IPTG诱导下，F基因2个片段获得了良好的表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，确定所表达的融合多肽大小分别为54000、56000。将表达产物回收后混合免疫小鼠，IFA显示，免疫小鼠血清能与病毒感染细胞呈现特异反应，并表现出1：16的中和抗体活性，表明体外表达的F多肽保留了天然蛋白的部分抗原性。     

免疫抑制鸡群鸡传染性贫血病毒和网状内皮增生症病毒共感染检测

分别用digoxigenin标记的鸡传染性贫血病毒（CAV)和禽网状内皮增生症病毒（REV）核酸探针以及PCR技术对某种鸡场进行检测，检测结果表明，在20个样品中，CAV和REV感染的阳性率分别为10％和5％，这一结果显示，CAV和REV感染是导致该鸡场发生免疫抑制的主要病因之一。     

I型马立克氏病病毒特异性核酸探针试剂盒的制备和应用

应用非放射性的地高辛标记法来标记Ⅰ型马立克氏病病毒特异性DNA，通过优化核酸探针标记、检测的步骤，建立了马立克氏病的诊断试剂盒。该探针在1：1250的工作浓度下，能检出1－2pg/μl的马立克病病毒基因组DNA，探针与其它病毒DNA不发生反应，具有较好的特异性，该试剂盒稳定性较好，可重复使用，初步具备了诊断试剂盒的基本要求，该探针和方法成功地用于鸡群中马立克氏病感染状态的流行病学调查。     

鸡贫血病毒细胞凋亡素基因的原核表达及其免疫学活性

将鸡贫血病毒 (CAV)细胞凋亡素基因克隆入表达性载体 p GEX- 5 X- 3,在大肠杆菌中以融合蛋白的形式获得表达。再以表达产物免疫小鼠 ,制备抗 CAV凋亡素的多克隆抗体。以其对 CAV感染的 MSB1细胞作间接免疫荧光试验(IFA)检测呈阳性 ,表明表达产物保留了其相关的天然抗原特性。