贵阳市鸡群中禽流感不同亚型抗体的检测与分析

禽流感是由A型流感病毒引起禽类的一种烈性传染病,被世界动物卫生组织及国家农业部列为一类或A类动物疫病。根据A型流感病毒的血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）抗原性的差异,可将A型流感病毒分为不同的亚型。禽流感病毒属于A型,不同毒株的致病性存在差异,根据其对禽类致病力的不同,又可划分为高致病性毒株、低致病性毒株和非致病性毒株。     

山羊痘病毒P32基因的克隆、测序及在原核细胞表达

为比较山羊痘病毒贵州分离株P32基因与国内外分离株的关系,并获得P32蛋白,应用PCR方法从贵州山羊痘病毒分离株的核酸样本中扩增出P32基因片段,将PCR产物克隆至pMDl8-T载体,对重组质粒进行了基因序列测定.将测定的P32基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank中相应序列作比较,同源性分别达到99.4%和98.4%,表明山羊痘病毒的P32基因具有高度保守性.将P32基因克隆至原核表达载体pET-28a,成功构建重组表达质粒pET-28a-P32/LD,转化至大肠杆菌BL2l(DE3)进行诱导表达.SDS-PAGE检测显示,重组细菌在35.5 kDa处表达一条特异性的蛋白带,而阴性对照未见这条蛋白带;Western-Blotting检测证实,这条蛋白带能与山羊痘高免血清反应而显示其免疫学活性.     

一例鸡马立克氏病的病原学诊断

为确诊贵州省福泉市某养殖场鸡群死亡病因,采集病鸡的组织病料进行细菌分离培养,同时采用普通PCR和荧光定量PCR方法对组织病料进行相关病原核酸检测。结果:病鸡组织中未分离出细菌;病原核酸检测显示,马立克氏病病毒阳性,新城疫病毒、禽流感病毒、鸡滑液囊支原体均呈阴性。结论:确诊病例为马立克氏病病毒感染。     

一例牛病毒性腹泻病毒与大肠杆菌混合感染的实验室诊断

为查明贵阳市某养牛场犊牛发病死亡的病因,采集2头病死犊牛的病料进行细菌分离培养鉴定、药敏试验,以及牛支原体、病毒性腹泻病毒核酸检测。结果:分离细菌为革兰氏阴性短杆菌,16S rDNA测序分析鉴定为大肠杆菌,药敏试验显示其对硫酸安普霉素、硫酸粘菌素高度敏感;牛病毒性腹泻病毒核酸检测为阳性,牛支原体核酸检测为阴性。结论:诊断病例为牛病毒性腹泻病毒与大肠杆菌混合感染。     

牛支原体与附红细胞体混合感染病例的实验室诊断

为查明贵州省安顺市某养殖场牛群发病死亡的原因,采集病料进行支原体核酸检测、血液原虫检查以及细菌分离培养。结果:肺脏样品PCR扩增出351 bp的牛支原体目的基因条带,血液样品姬姆萨染色镜检观察到大量附红细胞体,未分离培养出细菌。结论:根据病牛临床症状、病理变化和实验室检测结果,确诊为牛支原体与附红细胞体混合感染。     

基于N基因的小反刍兽疫病毒贵州流行株分子特征与分群研究

为探讨小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)贵州流行株N基因分子特征和分群,试验设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术对小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR)临床样本进行N基因扩增,克隆至pMD19-T载体,对阳性重组质粒进行测序,应用DANStar软件对测序序列和参考序列进行核苷酸同源性、氨基酸同源性、变异位点及系统进化树分析。结果显示:PPRV贵州流行株N基因扩增长度为1 578bp,其相互间核苷酸、氨基酸同源性分别为99.6%~100.0%及99.2%~100.0%,与国内参考株N基因的核苷酸序列(97.7%~99.9%)及氨基酸序列(98.3%~100.0%)同源性较国外参考株(88.5%~97.7%和92.2%~98.5%)高;PPRV贵州流行株N基因编码的氨基酸同疫苗株Nigeria 75-1相比存在26个位点突变,但没有氨基酸的缺失或增加;基于N基因系统进化分析显示,PPRV贵州流行株同国内参考株处于同一个进化分支,但与国外参考株处于不同进化分支;其属于病毒进化的Ⅳ基因群,与国内参考株处于同一系统分群,但与疫苗株Nigeria 75-1(Ⅰ基因群)处于不同基因群。     

感染细胞与痘疹样本中山羊痘病毒PCR检测方法的建立

比较Trizol法和SDS-蛋白酶K法提取山羊痘病毒DNA后,根据山羊痘病毒P32基因设计引物,建立了能检测感染细胞培养物与组织病料的PCR方法,结果显示以SDS-蛋白酶K法提取的病毒DNA在含量与纯度上均明显高于Trizol法;该PCR方法对山羊痘标准毒株细胞感染物能扩增出特异性的DNA条带,最小检出量为40.625ng;且能检出山羊痘疫苗毒Y株、贵州现场分离毒LD株和QL株的细胞感染物以及山羊痘疹样本中病毒DNA,而对鸡痘疫苗毒株感染细胞、正常细胞及正常山羊皮肤均为阴性反应。这些结果表明,建立的PCR方法具有特异性强、可靠性好、灵敏度高等特点,可用于山羊痘的临床诊断。     

山羊痘病毒贵州株的分离与鉴定

山羊痘是由羊痘病毒属山羊痘病毒(GPV)引起的一种严重危害山羊的高度接触性传染病.试验通过病原分离、琼脂扩散试验、鸡胚接种、电镜形态学观察及PCR鉴定等方法对贵州地区山羊群爆发的疑似山羊痘进行病原的分离与鉴定,现报道如下.     

猪病毒性腹泻疫苗研究进展

猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒是当前猪病毒性腹泻的主要病原,临床表现主要为呕吐、水样腹泻、脱水、逐渐消瘦等症状。不同年龄和品种的猪均可感染,严重危害养猪业的健康发展。疫苗接种是防控猪病毒性腹泻的关键措施之一,但大量临床试验显示抗体阳性率低,免疫效果不佳。文章针对猪病毒性腹泻疫苗的研究进展进行综述,旨在为临床上预防猪病毒性腹泻提供参考。     

山羊痘病毒的分离与鉴定

对贵州省2002年以来发生的疑似山羊痘病例样品进行了病毒的分离与鉴定。取山羊痘病羊的皮肤痘疹和水疱作待检病料,接种BHK-21传代细胞盲传3代后,出现了明显的、规律的细胞病变(CPE),病毒细胞培养物在F4代以后,能与山羊痘标准阳性血清在琼脂扩散试验中出现白色沉淀线,而与正常细胞的培养物及PBS不出现沉淀线;参照GenBank上山羊痘病毒P32基因序列,设计了1对特异性引物,对现场分离毒株进行PCR扩增,可扩增出963bp特异性的DNA条带。用待检病料感染的BHK-21细胞培养物接种9日龄鸡胚绒毛尿囊膜,随着传代次数的增加,痘斑病变的出现率从13.3%～20%上升至33.3%～40%;用山羊痘病变皮肤、鸡胚绒毛尿囊膜和感染细胞进行超薄切片,在电子显微镜下可以观察到典型的山羊痘病毒粒子。