三种融合标签对大熊猫轮状病毒结构蛋白VP6-VP7可溶性表达的影响

大熊猫轮状病毒(giant panda rotavirus,GPRV)是引起幼龄大熊猫腹泻的主要病原,对圈养大熊猫产生了较大的危害。轮状病毒结构蛋白VP6是一种载体蛋白,可介导黏膜免疫反应。VP7是轮状病毒结构蛋白中主要的中和抗原。因此,VP6-VP7的融合表达作为候选抗原对该病的防治具有重要的意义。传统大肠埃希菌原核表达存在表达量低、可溶性差以及纯度低等弊端。本研究使用醛缩酶(EDA)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)3种融合标签,以实现获得表达量高和纯度高的GPRV-VP6-VP7重组表达蛋白。将扩增的VP6、VP7基因片段利用同源重组酶构建到含3种融合标签的表达载体pET21b上,将重组质粒转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)感受态细胞中进行低温诱导表达。用Ni-柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Image J分析蛋白表达量和可溶性,Western blot分析得到表达的重组表达蛋白正确且具有蛋白活性。实验结果证明,EDA标签能显著促进VP6-VP7蛋白的原核可溶性表达,提高VP6-VP7蛋白表达量。     

二倍体和四倍体泥鳅线粒体ND-5/6基因多态性的PCR-RFLP分析

采用PCR-RFLP分析方法,对洞庭湖、武汉两地的二倍体和四倍体泥鳅线粒体DNAND-5/6基因多态性及4个群体遗传变异和遗传关系进行了研究。结果表明,120尾泥鳅mtDNAND-5/6扩增片段长度均为2.2kb;从13种限制性内切核酸酶中筛选出6种多态性内切酶(HaeⅢ、DraⅠ、RsaⅠ、TaqⅠ、HinfⅠ、MspⅠ),对扩增产物进行酶切,共检测到66种单倍型。泥鳅群体内单倍型多样性和核苷酸多样性分别为0.7679～0.9385和0.01041～0.03212;其中,洞庭湖二倍体核苷酸多样性最高(0.03212),武汉二倍体其次(0.02452),二倍体群体内核苷酸多样性高于四倍体。群体间的核苷酸多样性(π)大小为0.02588～0.04144,平均值为(0.031737±0.000005)。群体间的核苷酸歧化距离(δ)大小为0.00462～0.01617,平均值为(0.010659±0.000003);其中,武汉二倍体和四倍体之间的核苷酸歧化距离最大(0.01617),武汉四倍体和洞庭湖二倍体之间的核苷酸歧化距离最小(0.00462)。MonteCarlo模拟x2检验表明,4个群体间的单倍型频率存在极...     

三肽囊素对鸡血浆蛋白组分及IL-2与IL-6含量的影响

144只1日龄黄羽肉鸡随机分为4组,第7日龄时第Ⅰ～Ⅳ组分别注射0、0.005、0.010、0.030mg/kg剂量的三肽囊素,在14、35及56日龄时每组各取一个重复,取血浆,醋酸纤维薄膜电泳检测血浆蛋白各组分的比率,放射免疫法检测血浆IL-2与IL-6的含量.结果显示不同剂量的三肽囊素可提高血浆γ球蛋白水平:对血浆...     

m6A甲基化在鸡肌肉生长发育中的表达研究

试验旨在研究RNA m6A修饰相关基因去甲基化酶Alk B同源蛋白5（Alk B homologue 5，ALKBH5）、去甲基化酶肥胖相关蛋白（fat mass and obesity-associated protein，FTO）、甲基转移酶样蛋白3（methyltransferase like 3，METTL3）、甲基转移酶样蛋白14（methyltransferase like 14，METTL14）和成肾细胞瘤1-结合蛋白（Wilms’tumor 1-associating protein，WTAP）在鸡骨骼肌发育过程中的表达，分析其与骨骼肌m6A甲基化水平的相关性。首先，利用实时荧光定量PCR技术检测m6A甲基化相关基因在金茅花鸡12（E12）、14（E14）、16（E16）、18（E18）胚龄和1日龄腿肌和胸肌组织中mRNA表达水平，以及其在鸡成肌细胞50%、100%增殖期和1、2、3、4、5 d分化期的mRNA表达水平；随后，利用m6A甲基化试剂盒检测金茅花鸡E12和1日龄腿肌和胸肌组织中m6A甲基化修饰水平，与m6A甲基化相关基因表达水平进行相关性分析。结果显示，m6A去甲基化基因ALKBH5和FTO mRNA表达水平在骨骼肌发育过程中显著上调（P<0.05），即在E12、E14低表达，E16、E18逐渐上调，1日龄达到最高。m6A甲基化写入基因METTL14、METTL3和WTAP mRNA表达水平在E12、E14、E16逐渐上升，E18下降，随后至1日龄表达量回升。在细胞增殖过程中，ALKBH5、FTO、METTL14、METTL3和WTAP基因表达均上调；在细胞分化过程中ALKBH5和FTO基因表达水平显著上调（P<0.05），在分化第5天达到最高。METTL14、METTL3和WTAP基因mRNA表达水平在细胞诱导分化的1、2、3、4 d表达量呈下降趋势，而在诱导分化的第5天有所回升。甲基化水平检测结果显示，腿肌和胸肌m6A甲基化水平变化趋势一致，均在胚胎发育过程中显著下降（P<0.05），至1日龄达到最低。相关性分析结果显示，鸡骨骼肌RNA m6A甲基化水平与m6A去甲基化修饰基因ALKBH5、FTO mRNA表达水平呈显著负相关（P<0.05）。综合以上试验结果，推测m6A甲基化修饰与鸡骨骼肌发育相关，而去甲基化基因ALKBH5、FTO可能通过调控RNA m6A甲基化水平，影响鸡骨骼肌发育。本研究结果为进一步研究m6A甲基化修饰调控鸡骨骼肌生长发育的功能和分子机制提供理论依据。     

Plant growth regulator and its interactions with environment and genotype affect maize optimal plant density and yield

Increasing planting density is important to raise maize yield, however, high density often leads to an increase risk of lodging due to dense canopy and weak stem. Maize yield and optimal plant density are increased by applying plant growth regulator compound of ethephon and DA-6, however, we do not know if this compound would interact with location and genotype. In this study, a novel plant growth regulator, as the synthesis of N, N- diethyl − 2 − hexanoyl oxygen radicals − ethyl amine (2-ethyl chloride) phosphonic acid salt (DHEAP), combining the effects of ethephon and DA-6 in one chemical, was developed and tested at three locations, five plant densities (6.75, 8.25, 9.75, 11.25 and 12.75 plants m⁻²) and three cultivars in 2014–2015. This study aimed to quantify the interactions between environment, genotype and management (Appling DHEAP and plant density) on lodging-related optimal plant density and yield. DHEAP significantly increased grain yield by 10.7% due to the increases of kernel weight by 3.2% and kernel number per ear by 4.4%. On average across genotypes and environments, applying DHEAP increased optimum plant density by 6%. The optimal plant density interacted with cultivar, DHEAP and environment. Applying DHEAP reduced lodging percentage by lowering ear height. The yield-lodging relationship was affected by genotype and location. We concluded that maize yield could be enhanced by optimizing plant density, applying DHEAP and cultivar selection, but climatic and environmental differences of locations should be considered.     

草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白与大肠杆菌LTB亚基植物融合表达载体的构建

根据GenBank中草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,,CCRV)VP6蛋白的全基因序列(AF403394)和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的基因序列(M17874),设计并合成特异性引物,从感染草鱼呼肠孤病毒(GCRV)09草鱼(Ctenopharyngodon idellus),肾细胞...     

鸡白细胞介素-6原核表达及双抗夹心ELISA方法的建立

应用分子生物学技术原核表达ChIL-6，以ChIL-6重组蛋白为免疫原，按免疫程序分别制备兔抗和鼠抗IL-6重组蛋白的多克隆抗体。应用此抗体建立双抗夹心EL-ISA方法后，为了优化此方法本试验对该方法的最佳试验条件、标准曲线、重复性和初步应用进行确定。结果显示，经SDS-PAGE和Western-blot分析，表明ChIL-6在大肠杆菌中正确表达，为了建立检测ChIL6的双抗夹心ELISA方法，本试验应用表达的重组蛋白制备兔抗和鼠抗多克隆抗体。建立的双抗夹心ELISA方法最佳反应条件为包被抗体的质量浓度为50mg／L，4℃过夜；酶标二抗稀释度为1：400，37。C1h；应用该方法检测感染金黄色葡萄球菌后的ChIL-6，其结果与本实验室之前应用人的ELISA试剂盒检测的结果相似。结果表明，本试验建立的检测ChlL-6的双抗夹心ELISA方法可用于临床。     

引入6S管理体系提高个体食品生产者职业素质

介绍了6S管理的内涵、实施方案,以及引入6S管理的必要性与可行性。针对当地个体食品生产者生产馒头的现状,引入6S管理体系,取得了良好的效果。     

低温对2种紫草科植物△6 脂肪酸脱氢酶基因表达的影响

以紫草科植物新疆软紫草(Arnebia euchroma)和假狼紫草(Nonea capsica(willd.)G.Don)为材料,翻译延伸因子EF1a为内参基因,利用半定量逆转录聚合酶链式反应(semi-RT-PCR)技术,对2种紫草植物中γ-亚麻酸合成关键酶基因△6-脂肪酸脱氢酶基因的表达进行研究。结果表明,△6-脂肪酸脱氢酶基因在紫草植物的叶、茎、根中均表达,在低温诱导不同时间后紫草植物叶片中△6-脂肪酸脱氢酶基因的表达有所增强。气相色谱分析显示,其产物γ-亚麻酸在低温下积累,推测紫草科植物叶片中△6-脂肪酸脱氢酶基因表达量增加可能与适应低温胁迫的逆境有关。     

维生素B6对史氏鲟幼鱼胰蛋白酶活性的影响

试验研究了饲料中不同水平维生素B6对史氏鲟（Acipenser schrencki）幼鱼胰蛋白酶活性的影响。在温度为（20±0.5）℃、pH值为6.8～7.5的条件下,研究了低蛋白含量（28%）饲料中,添加不同水平的维生素B6（0、15、30、45、60、75mg/kg）对史氏鲟幼鱼[（34.07±3.44）g]胰蛋白酶活性的影响。结果表明,饲料中的维生素B6添加量为45～60mg/kg时,对幼鲟胰蛋白酶的激活作用最大,并可相应提高对饲料蛋白质的消化率。