带毒蚕卵中的家蚕微孢子虫DNA提取方法研究

为促进用PCR法检测家蚕微粒子病的生产应用,对带毒蚕卵中的家蚕微孢子虫DNA提取方法进行了研究。结果表明,蚕卵经30%KOH、27℃预处理后抽提的核酸能满足PCR检测对DNA质量的要求。以该方法抽提的DNA为模板,进行蚕卵集团检测,结果10~100粒蚕卵中混有1粒“有毒”卵,即能用PCR的方法检测出。“1/100”“有毒”卵的检出概率约为80%。     

微量菌鉴系统在水产养殖中的应用

运用专门检测发酵性革兰氏阴性杆菌的微量菌鉴系统——CDRC-菌鉴系统，鉴定水产养殖中分离自患病动物血液、肝胰腺和养殖水体的9个菌株，鉴定结果为9个菌株均为弧菌科细菌，其中4株属于气单胞菌属，分别为嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和豚鼠气单胞菌，其余5株属于弧菌属，为副溶血性弧菌和溶藻弧菌。     

乙醇固定中华绒螯蟹组织的DNA提取方法

由于ＲＡＰＤ技术简单、灵敏度高、设备要求不高、工作成本低和研究周期短等优点,已经在生物、医学领域被广泛地使用。张德春等[1]曾提出可用于ＲＡＰＤ分析的鱼类血样乙醇保存方法。考虑到乙醇固定标本应用范围广,且乙醇对ＤＮＡ的保护作用明显、时间长等优点,笔者直接采用75%的乙醇固定中华绒螯蟹(Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒｓｉｎｅｎｓｉｓ,河蟹)肌肉组织,初步研究了如何经乙醇固定的河蟹肌肉组织中提取ＤＮＡ的方法,作为进一步在分子水平研究河蟹基因的基本参考。以往未见有关这方面的研究报道。收稿日期:20000425基金项目:江苏省教委资助项目…     

细菌性河蟹颤抖病的鉴定与药敏试验

从来自启东的颤抖病蟹的肝胰腺和血淋巴中分离得到细菌，经人工感染试验确定为病原菌。该菌的生理、生化试验结果显示为嗜水气单胞菌。药敏结果显示，四环素、卡那霉素、吡哌酸对该病原菌均有很好的敏感性，青霉素G则均没有作用。     

细菌性"颤抖病"病原的体外中药药敏试验

嗜水气单胞菌2菌株ES-1、ES-2对地锦草、黄莲、五倍子和增效剂具有高度敏感性，这4种药物可作为防治由该菌引起疾病的首选药物，同时发现这2株菌对黄芪、穿心莲、连翘等具有不同程度的耐药性。通过3种高度抑菌药物间及增效剂之间的相互作用，得出增效剂对五倍子、黄莲有明显的增效作用，地锦草和五倍子具有协同作用，尤其增效剂对五倍子的增效作用效果最为明显，该复方药物可作为由该菌引起疾病的高效、低成本、低毒的防治药物。     

M_(12)微孢子虫的克隆

发芽试验表明，Ｍ１２微孢子用不同的溶液诱导后，在同一种发芽缓冲液中，其发芽率明显不同；同一种溶液诱导后，在不同的发芽缓冲液中，其发芽率也不同。不同处理发芽后的孢子在体外对细胞的感染性有明显差异，发芽率的高低与对细胞的感染性无直接的相关性。Ｍ１２感染细胞后，通过极度稀释法，获得了Ｍ１２微孢子的克隆。Ｍ１２感染细胞后，通过极度稀释法，获得了Ｍ１２微孢子的克隆。Ｍ１２在体外没有观察到Ｖａｒｉｍｏｒｐｈａ属典型的８孢子形成过程。     

苏、菊、明、虎母种、交原种及四元杂交种对BmNPV的抗性鉴定

为了探讨四元杂交种对家蚕核型多角体病毒(Bmobyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)的抗性遗传规律,对苏、菊、明、虎母种、交原种及四元杂交种进行了抗性鉴定。结果显示:各母种对BmNPV的抗性存在差异,抗病性由大至小的顺序为虎、明、苏、菊,各交原种的抗性高于母种,四元杂交种的抗性高于交原种,表现出较明显的杂交优势。研究结果为理解四元杂交种对BmNPV的抗性遗传规律提供了有价值的参考,为提高苏·菊×明·虎的抗性奠定了基础。     

酪氨酸羟化酶在黄粉虫血淋巴黑化反应中的作用

分析了黄粉虫血淋巴诱导前后酪氨酸羟化酶(TH)的表达特性,用TH抑制剂3-碘-L-酪氨酸(3IL)抑制血淋巴TH活性,观察TH活性被抑制后血淋巴黑化过程的变化.结果显示,TH在黄粉虫血淋巴免疫诱导后开始表达,抑制TH的活性,血淋巴黑化反应减弱,表明TH在黄粉虫血淋巴黑化反应中起着一定作用.     

家蚕SOCS-2基因的克隆与序列分析

SOCS基因是JAK/STAT信号通路的负调节基因.为了了解家蚕SOCS基因(BmSOCS)的遗传变异与进化,通过电子克隆获得了SOCS cDNA基因序列,结果显示家蚕基因组中至少存在4种BmSOCS基因,BmSOCS -2基因存在可变剪接.通过RT - PCR从家蚕中扩增得到1个BmSOCS -2基因(BmSOCS - 2A),测序结果表明,该792 bp片段含有完整的ORF,由4个外显子组成,编码263个氨基酸残基,分子量为28.8 ku.结构分析显示,BmSOCS - 2A有5个α螺旋结构,存在典型的SH2结构域和SOCS结构域.基因芯片数据分析显示,BmSOCS -2在家蚕雌雄性腺组织中表达量最高.进化分析表明,SOCS以不同种类聚类在一起,表明各种SOCS基因家族在各昆虫物种形成前就已产生.     

家蚕核型多角体病毒BmOrf99的研究

[目的]探讨家蚕核型多角体病毒BmOrf99在杆状病毒生命周期中的功能.[方法]运用Red同源重组技术构建BmOrf99缺失型重组病毒,研究BmOrf99对病毒复制、BV产生和病毒形态发生的影响.[结果]病毒转染细胞1.5h可检测到BmOrf99表达;通过Red重组系统构建敲除型病毒BmNPV-BmOrf99KO-polh-GFP,转染结果显示,敲除BmOrf99病毒仍能增殖复制,透射电镜观察显示,BmOrf99敲除对病毒粒子装配和多角体形成无明显影响.病毒DNA转染后24～72 h,敲除型病毒转染细胞培养上清BV水平略高于对照病毒BmNPV-BmOrf99WT-polh-GFP;转染后72 h,前者细胞培养上清TCID50略高于后者;转染6～72 h,敲除型病毒转染细胞中病毒DNA水平高于对照病毒转染细胞;敲除型病毒感染72 h后,细胞中BmOf998a表达水平比对照组提高2.21倍.[结论]BmOrf99为病毒早期基因,且复制非必需,缺失可促进病毒DNA复制,略增加BV水平,但对病毒形态发生无影响,BmOrf-99有可能通过调节病毒其他基因的表达而发挥作用.