宽体金线蛭抗凝物质的提取与纯化

采用丙酮三氯乙酸法、凝胶过滤层析、阴离子交换层析、Sep-pak C18柱宽体金线蛭中抗凝物质进行分离与纯化,并且进行SDS-PAGE凝胶电泳。结果表明：SDS-PAGE电泳为单一条带,并且提取的物质具有抗凝活性,测序结果表明得到一种新的抗凝物质。     

苯氧威对黄粉虫生长发育的影响

[目的] 研究保幼激素类似物苯氧威对仓储害虫黄粉虫生长发育的影响。[方法] 配制6种不同浓度苯氧威,采用点滴法处理黄粉虫,分别观察苯氧威对黄粉虫体重增加量、发育历期、死亡率、化蛹率、羽化率、雌性率、超龄率、畸形率的影响。[结果]10.00ng/μl苯氧威使黄粉虫化蛹率、羽化率和雌蛹率显著减少,明显地引起黄粉虫的超龄和畸形;而100.00ng/μl苯氧威可明显增加黄粉虫死亡率。[结论]苯氧威对仓储害虫黄粉虫生长发育具有显著的抑制作用,能有效控制黄粉虫的危害。     

家蚕表皮酪氨酸酶和漆酶的分离纯化及酶学鉴定

酚氧化酶是昆虫黑化反应的关键酶类。采用硫酸铵分级(20%～30%、40%～65%饱和度)沉淀以及ConA Sepharose4B亲和层析和Sephacryl S-200凝胶过滤的方法,从家蚕蛹表皮样品中分离纯化出酪氨酸酶和漆酶,2种酶的比活力分别达到2 900、1 343 U/mg。经非还原SDS-PAGE电泳和酶学动力学特性分析表明:家蚕表皮酪氨酸酶的分子质量约80 kD,酶蛋白经凝胶电泳分离后用底物酪氨酸和邻苯二酚染色呈现棕褐色条带,该酶与2种底物的米氏常数(Km)分别是16.8 mmol/L和12.5 mmol/L,最适pH分别是6.5和7.5,最适温度均是30℃;家蚕表皮漆酶的分子质量约44 kD,酶蛋白经凝胶电泳分离后用底物2,2'-氨基-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸盐)(ABTS)染色呈现蓝绿色,而用酪氨酸染色颜色没有变化,该酶与底物ABTS的Km值是32.7 mmol/L,最适pH 5.0,最适温度50℃;酪氨酸酶的热稳定性比漆酶高。研究结果表明,采用硫酸分级沉淀、亲和层析和凝胶过滤方法能从家蚕表皮中分离纯化出漆酶和酪氨酸酶,酶学动力学分析二者对催化底物的特异性有差别,推测它们在家蚕表皮的硬化和黑化过程中发挥不同生理作用。     

酪氨酸羟化酶在黄粉虫血淋巴黑化反应中的作用

分析了黄粉虫血淋巴诱导前后酪氨酸羟化酶(TH)的表达特性,用TH抑制剂3-碘-L-酪氨酸(3IL)抑制血淋巴TH活性,观察TH活性被抑制后血淋巴黑化过程的变化.结果显示,TH在黄粉虫血淋巴免疫诱导后开始表达,抑制TH的活性,血淋巴黑化反应减弱,表明TH在黄粉虫血淋巴黑化反应中起着一定作用.     

纳米氧化锌对小鼠B16黑素瘤细胞生长和分化的影响

为评价纳米氧化锌(Zn O NPs)在皮肤病治疗和化妆品应用方面的生理毒性,以小鼠B16黑素瘤细胞为细胞模型,研究15、30、90 nm下Zn O NPs对B16细胞的体外生长和分化的影响及其作用机制。以不加纳米氧化锌和加体相氧化锌的处理分别作阴性、阳性对照。结果表明,15、30 nm,体相Zn O NPs处理与B16细胞共培养作用3 d,当Zn O NPs为4μg/m L以下时,Zn O NPs并未明显抑制细胞生长,引起细胞死亡;当Zn O NPs浓度大于8μg/m L时,明显抑制细胞生长。随着Zn O NPs浓度增加,细胞体积变小,细胞间隙变大,黏附性降低,细胞变圆,从培养瓶底脱落死亡。Zn O NPs诱导细胞中酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP-1)、酪氨酸相关酶相关蛋白2(TYRP-2)的mRNA表达量升高,导致细胞内酪氨酸酶活性和黑色素生成水平增高,促进了B16黑素瘤细胞的分化。相同Zn O NPs浓度下,15 nm Zn O NPs比30、90 nm Zn O NPs作用明显。     

天麻素对B16黑素瘤细胞黑色素形成的影响

[目的]探讨天麻素对体外培养的B16鼠黑素瘤细胞黑素合成的影响及其作用机制。[方法]选择不同浓度的天麻素作用于体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞,测定细胞黑素生成量,通过测定天麻素对蘑菇酪氨酸酶活性的影响,初步探讨天麻素影响黑色素形成的机制。[结果]当浓度大于15 mmol/L时,天麻素能抑制B16黑素瘤细胞黑色素形成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性。天麻素对蘑菇酪氨酸酶的半抑制浓度(IC50)为(69.37±9.22)mmol/L,对酪氨酸酶的抑制作用表现为混合型可逆抑制,抑制常数Ki=(123.8±20.2)mmol/L,提示天麻素可能通过抑制酪氨酸酶活性抑制B16细胞黑色素的形成。[结论]天麻素可作为一种潜在的色素障碍性疾病治疗药物。     

基于综合实验设计与实践的生物类本科生创新技能提升研究

综合性实验训练是培养生物类本科生创新技能的一个重要环节,以加强生物科学专业本科生自主创新能力为宗旨。采用以学生为主、教师为辅的一整套实验教学模式,对综合实验教学计划安排与实验分组、实验内容确定、实验方案设计与具体实施、实验结果汇报与讲评以及综合性成绩考核等,对苏州大学基础医学和生物科学学院对生物类本科生综合性实验教学模式进行一系列改革与探索。实践证明:这种综合性实验教学模式可以极大地激发学生的求知欲,并有助于学生自主创新学习的培养以及实验技能的提高。     

苯氧威对黄粉虫体液免疫功能的影响

[目的]研究保幼激素类似物苯氧威对仓储害虫黄粉虫体液免疫功能的影响。[方法]配制3种不同浓度苯氧威,采用点滴法处理黄粉虫,在大肠杆菌刺激前后测定黄粉虫血淋巴中酚氧化酶、溶菌酶活性和抗菌活力变化。[结果]当使用E.coli DH5α刺激后,与对照组相比,处理组酚氧化酶、溶菌酶活性及抗菌能力均明显降低。[结论]苯氧威对仓储害虫黄粉虫体液免疫功能具有明显的抑制作用,能有效控制黄粉虫的危害。     

外源微生物诱导中华绒螯蟹血清中一氧化氮合酶活性研究

[目的]研究不同类型外源微生物对中华绒螯蟹血细胞产生一氧化氮合酶（NOS）活力的影响。[方法]采用1×10^7bacteria/ml菌液对中华绒螯蟹分别进行嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母注射感染,取血淋巴分别检测血清NOS活力。[结果]除产朊假丝酵母外,嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌感染中华绒螯蟹均明显地诱导了血清中NOS活性。[结论]中华绒螯蟹血细胞存在可诱导的NOS活性,该NOS活性呈现诱导源的差异。     

极端嗜热菌Thermus thermophilus HB 27中天冬氨酸激酶在大肠杆菌中表达、纯化及酶学性质研究

为获得具有热稳定性的天冬氨酸激酶,从极端嗜热菌 Thermus thermophilus HB27基因组中扩增出天冬氨酸激酶(AK)基因,构建重组质粒,并在Escherichia coli BL21 (DE3)中进行表达,得到了较高的表达量.经热处理纯化后测定重组天冬氨酸激酶(tAK)的最适pH为7.5,最适反应温度为80 ℃, 80 ℃半衰期是18 h.酶动力学分析表明tAK的KmATP为0.23 mmol/L,Vmax ATP为840.34 nmol/(L·min),KmAsp为0.95 mmol/L,VmaxAsp为190.76 nmol/(L·min).赖氨酸和甲硫氨酸对tAK活性没有抑制作用,当苏氨酸浓度大于0.5 mmol/L时,对tAK活性有明显抑制作用,并且抑制作用与苏氨酸呈现浓度依赖性.