Igr5启动子甲基化在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的:探讨lgr5甲基化与人类卵巢癌临床病理之间的联系,以及其作为判定总的生存率的价值。方法:采用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法分析卵巢癌患者石蜡组织中lgr5启动子DNA甲基化情况。结果:lgr5在正常卵巢组织中几乎无甲基化改变,而在良性卵巢肿瘤中频率升高,上皮性卵巢癌组织中甲基化频率明显升高(P0.01);lgr5甲基化与低分化上皮性卵巢癌(P0.01)、肿瘤分期Ⅲ～Ⅳ(P0.05)以及淋巴结转移(P0.01)相关,但与组织类型关系不明显(P0.05)。在70例上皮性卵巢癌患者组织中,lgr5甲基化频率为62.9%(44/70),并且5年总的生存率明显低于未甲基化的患者(P0.05)。结论:lgr5甲基化与上皮性卵巢癌分化程度、肿瘤分期Ⅲ～Ⅳ以及淋巴结转移密切相关,同时也可以作为上皮性卵巢癌患者总的生存率的判定指标之一。     

同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒的多重PCR技术

本试验设计了一种多重聚合酶链反应（PCR）技术，可用于同时检测与猪繁殖和呼吸衰竭相关的3种病毒一猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪圆环病毒2型（PCV2）。根据3种病毒的靶序列设计引物，     

鸡新城疫融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达

根据NDVNL株的F基因序列，自行设计带有XbaⅠ和XhoⅠ酶切位点的一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增含NDVF基因的PFL质粒,扩增结果与设计相符，大小为630bp。该片段覆盖F基因的2/3的抗原决定簇。对该片段两端酶切后，克隆到融合表达载体pThioHisB中，并转化到大肠杆菌Top10内，利用AMP抗性筛选阳性重组子，并用PCR及双酶切鉴定克隆成功，用IPTG化学诱导表达了F基因。经SDS－PAGE电泳分析，结果在分子量约为35KD处可见到表达的蛋白条带。这与根据核苷酸大小计算的蛋白及融合蛋白之和的大小相符。说明外源片段插入正确表达成功。用HRP标记的兔抗鸡抗体与该条带进行Western－Blot检测，该条带呈阳性反应。进一步证实表达正确。通过蛋白灰度扫描显示表达的融合蛋白占菌体总蛋白的20％。     

陕北白绒山羊小反刍兽疫病毒RT-PCR方法的建立

为了建立适用于本地区小反刍兽疫病毒的分子生物学快速检测方法,通过分析NCBI数据库中小反刍兽疫病毒N基因序列,根据该基因设计特异性引物,建立针对本地区小反刍兽疫病毒N基因的一步法RT-PCR检测方法,利用该方法对来自疫源地的不同病料样本进行检测,结果显示该方法对病料的可选择性较多,对检测到的阳性条带通过测序分析,发现流行毒株与陕西毒株基因型差异不明显。该检测方法的建立有利于开展小反刍兽疫疫情监测,为有效防控小反刍兽疫提供技术支撑。     

鸡传染性支气管炎病毒的研究进展

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,IB)是鸡的一种急性、高度接触性传染病,它主要侵害呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统。本病呈世界性分布     

用聚合酶链反应检测犬传染性肝炎的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对人工感染犬传染性肝炎病毒（ＩＣＨＶ）的犬进行定期尿检，并以血凝和血抑制试验及病毒分离进行比较。结果表明，用ＰＣＲ方法可以快速检出排毒的犬，其灵敏度是血凝效价的上百倍。     

从山西杂粮的发展看养生农业

近年来,都市高速的生活、工作节奏带来了环境污染、疾病等不健康的因素,人们开始探寻更加健康的生活、生产方式,农业以其质朴、自然的属性进入了都市人群的视野。养生农业,一种强调人与自然和谐发展的现代农业新形式,正逐渐发展起来。以山西杂粮的发展为出发点,通过对其在满足消费者需求方面存在的问题进行分析,对其未来发展提出建议。     

Taq DNA聚合酶的热纯化制备（摘要）

[目的]提高Taq DNA聚合酶的制备效率。[方法]利用Ni柱亲和色谱纯化载有6xHis标记的Taq DNA聚合酶,并重组载体,利用Taq DNA聚合酶的耐热特性,对粗提液75℃处理1h,之后通过PCR试验验证制备酶液的活力。[结果]所获重组的pET-32A-Taq能够在BL21（DE3）宿主菌中高效表达并可通过热变性去除杂蛋白,获得了活力远高于购买的Taq DNA聚合酶的酶制剂。[结论]使用热纯化法制备的Taq DNA聚合酶工艺简单,成本较低,能满足常规大量PCR实验要求。     

大米基因组DNA不同提取方法的比较

以市售大米为材料,分别采用热解法、异丙醇沉淀法、CTAB法、SDS法、高盐低pH值法等以及它们的改良方法提取基因组DNA,并对提取的DNA进行光密度、琼脂糖凝胶电泳和PCR检测,比较这些方法的提取效果,优化对 大米材料进行分子标记检测的DNA提取方法.结果表明:除异丙醇沉淀法、SDS法和异硫氰酸胍法外,其他所有方法提取的基因组DNA均可满足PCR检测要求.同时,综合考虑基因组DNA的纯度和浓度,本研究认为大米基因组DNA提取方法的优劣顺序依次为改进CTAB法＞高盐低pH值法＞CTAB法＞改进SDS法和改进热解法.这几种大米基因组DNA提取方法都具有操作简单、耗时短、利于快速检测的优点.     

植物中依赖于RNA的RNA聚合酶研究进展

依赖于RNA的RNA聚合酶(RDR)能够以单链RNA为模版合成互补RNA链,产生双链RNA。双链RNA在细胞内被类似RNaseⅢ的酶DCL加工成20～24 nt的小分子干扰RNA(siRNA)。siRNA可以在转录水平或转录后水平抑制靶基因的表达。RDR通过基因沉默途径参与植物的生长发育调节、逆境应答以及表观遗传修饰等许多生物学过程。加深对植物RDR表达模式、生化活性及生物学功能等方面的理解将有利于植物基因沉默的发展和运用。