一种高质量天门冬基因组DNA提取方法

针对天门冬[Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.]成熟叶片富含多糖、多酚、蛋白质及其他次生代谢物质的特点,采用改良CTAB法对其基因组总DNA进行提取,并对DNA进行质量检测。结果表明,改良CTAB法可从天门冬成熟叶片中获得纯度高、完整性好的总DNA,其OD260 nm/OD280 nm为1.86,OD260 nm/OD230 nm为2.36,浓度为390μg/mL,产率达11.7μg/g,多糖、多酚和RNA杂质被去除干净,无降解现象,说明该方法提取的天门冬基因组总DNA质量较高。     

DNA折纸术的研究进展

为了帮助广大研究者在短时间内了解DNA折纸术的最新研究现状,掌握DNA折纸术相关软件的应用,本论文将DNA折纸术的相关内容进行了归纳。首先介绍了DNA折纸术的起源与基本原理;然后综述了近几年国内外的研究进展与取得的成果;接下来对DNA折纸术相关软件-Tiamat和Cadnano的应用和功能进行了简单的介绍,并对不同的软件进行了比较;最后对DNA折纸术的应用前景进行了展望。DNA折纸术虽然取得了一定的研究进展,但其未来的发展和应用前景将更广阔。     

大豆对大豆胞囊线虫侵染的应答机制研究

大豆胞囊线虫病(Heterodera glycines,soybean cyst nematode,SCN)是大豆生产上的重要病害,其特点为危害重、分布广、难防治,每年对大豆生产造成极大的损失。种植大豆抗性新品种是防治SCN目前最为有效的措施,研究大豆对SCN侵染的应答机制,是培育大豆持久抗病品种的前提,对加快抗线虫品种选育及SCN的防控具有重要的意义。本文综述了大豆对SCN侵染的组织细胞学应答机制;介绍了大豆在SCN侵染后酶系变化及酚类代谢的生理生化应答机制;从分子水平阐明了SCN侵染后大豆的基因转录变化,差异蛋白及DNA甲基化的应答机制,以期为大豆胞囊线虫病害的进一步研究与防治提供参考。     

青海巨型住肉孢子虫线粒体cox1基因的克隆及进化分析

为了研究青海省巨型住肉孢子虫线粒体细胞色素C氧化酶第一亚基(cox1)基因部分序列(pcox1)的遗传变异情况,并用pcox1序列构建巨型住肉孢子虫与其他住肉孢子虫的种群遗传关系。利用PCR技术扩增巨型住肉孢子虫的pcox1,将测序所获序列进行比对,并进行同源性分析和系统发育树的构建。结果显示,所获得的pcox1序列长度均为968 bp,与GenBank已公布的巨型住肉孢子虫相似度为99.1%~99.8%。系统发育树表明,所有分离株与已知巨型住肉孢子虫位于同一分支。巨型住肉孢子虫pcox1序列种内相对保守(0.2%~0.7%),种间差异较大(6.8%~20.8%),可用作种间遗传变异研究的标记。     

常熟市玉米地方品种陆市小黄糯分子标记辅助选择的改良

与其他玉米地方品种一样,陆市小黄糯(常熟本地传统糯质玉米品种)个体之间遗传组成和性状都不尽相同,从而影响了该特色农产品的商品质量和产业化开发。采用少代选株自交+株系鉴定筛选+多代去杂繁殖技术、配合基于SSR分子标记技术的DNA指纹图谱建立,使改良后的陆市小黄糯在特异性方面基本完好地保留了原始种质的特征特性,并提升了性状的一致性与稳定性。     

种公猪精子活力与mtDNA拷贝数的关联

为探讨猪精子线粒体DNA拷贝数和精子活力高低关系,选取长白猪、大约克猪和杜洛克猪新鲜精液,采用上游法分离高、低活力精子,对其进行活力检测,后提取上、下游精子DNA,采用实时荧光定量PCR技术测定精子线粒体DNA(mtDNA)拷贝数。结果表明,上、下游精子活力差异显著(P0.05),活力高的精子mtDNA拷贝数显著低于活力低的mtDNA拷贝数(P0.05),长白猪的mtDNA拷贝数与杜洛克猪、大约克猪差异显著(P0.05)。由此可见,mtDNA拷贝数可能影响猪精子活力,不同品种猪mtDNA拷贝数差异显著。     

铝处理对六堡茶苗抗性生理和DNA甲基化水平的影响

为探讨铝胁迫时六堡茶的生理生化变化,进而为六堡茶选育栽培和产业发展提供参考,本研究以六堡茶苗为材料,在溶液p H值为4条件下,设计0(CK)、50(T1)、100(T2)、200(T3)、400 mg/L(T4)的铝浓度进行水培处理,并于30 d后测定叶片中MDA含量和CAT、SOD、POD活性,以及DNA甲基化水平。结果表明:随着铝浓度增大,六堡茶苗的MDA含量呈先升高后降低再升高的趋势,T3处理的MDA含量最低,与CK差异显著,T1处理则略高于CK,但差异不显著; CAT活性表现为先降低再升高后降低再升高趋势,T2处理的CAT活性最高,是CK的2. 76倍,其它处理则与CK无显著差异; SOD活性呈先升高后降低再升高再降低趋势,与CK相比,T3处理的SOD活性升高12. 69%,与对照差异显著,其它处理则与对照无显著差异; POD活性表现为先降低再升高再降低趋势,T3处理的POD活性最大,T1处理最小,均与CK差异显著; DNA甲基化水平表现为先升高后降低趋势,T3处理的5-甲基胞嘧啶含量最高。     

高含固率木质纤维素厌氧发酵物总DNA的4种提取方法比较

不同的样本特性和提取方法对获得微生物总DNA的质量有重要影响。文章基于高含固率木质纤维素厌氧发酵物腐殖酸、酚类物质含量高、质地均一性差、微生物浓度低的特点,研究了4种方法提取不同高含固率粪秸厌氧发酵物中微生物总DNA的效果。结果表明,常规的十二烷基磺酸钠法(sodium dodecyl sulfate,SDS)、十二烷基磺酸钠和溴化十六烷基三甲铵结合法(sodium dodecyl sulfate and cetyltrimethyl ammonium bromide,SDS-CTAB)和商业的粪便试剂盒法提取的DNA质量均较差,SDS法和试剂盒法未能获得聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增目的条带,SDS-CTAB法得到的条带较模糊;改进SDS-CTAB法获得的DNA杂质少、纯度高,具有较好的稳定性,A260/A280和A260/A230值分别为1.74~1.86和1.65~1.86,每克样品的DNA浓度在50 ng·μL^-1以上,电泳条带单一齐整、清晰明亮,PCR扩增的目的条带清晰度高,适宜后续分子生物学技术的分析。林格氏液洗脱、聚乙烯吡咯烷酮-40(Polyvinyl Pyrrolidone-40,PVP-40)洗涤液除杂以及裂解液和多种酶联合破壁是改进SDS-CTAB法获得该类专一性样本高质量微生物总DNA的关键步骤。     

油菜杂交种DNA高通量获取方法

通过油菜(Brassica napus)杂交种深孔板内发芽,简化碱裂解法提取DNA步骤,配合高通量研磨器FastFluid Management SK300样品混匀仪的使用,提供了一整套快速高通量低成本获取油菜杂交种子叶DNA样品的集约化方案。该方法可以实现10 h完成万份DNA样品的提取,极大提高了DNA获取效率,有利于利用分子标记对杂交油菜种子进行纯度鉴定。