猪嗜淋巴疱疹病毒3型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

依据GenBank公布的猪嗜淋巴疱疹病毒3型(porcine lymphotropic herpesviruses 3,PLHV-3)DNA序列,设计特异性引物,优化反应条件,建立荧光定量PCR方法,并对方法的灵敏度、特异性和重复性进行试验。得出方法的线性范围为:8.2×101~8.2×107,灵敏度可达82个拷贝,方法的特异性高,只能检测pMD18-T/PLHV3重组质粒,另外5种对照病原均未检出;方法的重复性好,对不同浓度的pMD18-T/PLHV3重组质粒分别扩增6次,结果重复性好。使用建立的方法检测100份临床样品,同时与普通PCR方法比较,显示荧光定量PCR检出率比普通PCR高,具有较高的灵敏度和准确性。结果表明:建立的荧光定量PCR可用于PLHV-3的临床快速诊断。     

检测猪乙型脑炎抗体胶体金免疫层析法的建立与初步应用

利用蔗糖密度梯度超速离心浓缩纯化vero细胞培养SA14-14-2株猪乙脑病毒灭活抗原,进行胶体金点样和配比优化,制备GICA试纸条.结果最优浓缩样品配比构成是PBS 1.32 mL、灭活病毒液24 mL、30％蔗糖2.6 mL、55％蔗糖6.6 mL;用于胶体金偶联的抗原浓度约2.80 mg/mL.试纸条能明显区别阴阳性血清,阳性血清稀释1∶256能显示条带,优化后灵敏度达到1∶1024.与猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、Ⅱ型圆环病毒病阳性血清不发生交叉反应.用于检测2群免疫母猪抗体阳性率分别为86％和100％,说明疫苗免疫效果较好;检测未经免疫肉猪出现阳性结果,分别达到38％和24％,说明存在病毒隐形感染.     

农用核苷酸对妃子笑果实生长发育的影响

研究结果表明,妃子笑在第一次雌花谢花后3天喷施农用核苷酸2~4次,能有效提高第一次雌花的座果率,增加产量和提高果实的商品价值,其中以喷施农用核苷酸4次的效果最好;在第一次雌花谢花后10~12天即幼果已分大小时喷施农用核苷酸2~4次,能有效减少裂果,其中喷施农用核苷酸4次的果皮显著增厚,裂果率仅为1.82%;同时还表明喷施农用核苷酸不会影响妃子笑果实的品质。     

实验猴粪便样品中沙门氏菌LAMP检测方法的建立及应用简

A loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay was developed for detection of Salmonlla in fecal samples of experimental monkeys. According to the specific sequences (fimY) of Salmonlla in GenBank, one set of primers was selected and the reaction condition was optimized. The results showed that the detection limit of LAMP method was 1.35×10¹ and 1.35×10³ CFU/mL in Salmonella pure culture and clinical samples,respectively,which was the same as routine PCR. The amplification could complete in one hour, and the result could be distinguished by naked eyes. There was non-specific amplification of other pathogens. These results suggested that this LAMP assay was a simple and specific method for rapid detection of Salmonlla in fecal samples.     

乙烯利在果树上的应用研究进展

概述了10多年来国内外乙烯利应用于果树生产上的研究进展,如乙烯利对果实成熟的代谢效应、对氨基酸代谢和果实采后呼吸作用的影响,以及在控梢促花、催熟、疏花疏果和贮藏保鲜等方面的应用,并对乙烯利在果树上的应用提出一些建议。     

牛白血病病毒LUX^TM实时荧光聚合酶链式反应检测方法的建立

采用LUXTM新型荧光PCR技术原理,设计并合成1对单标记LUXTM荧光引物.建立了LUXTM荧光PCR和RT-PCR方法,可快速检测牛白血病病毒(BLV)前病毒DNA和病毒RNA.结果显示所建立的LUXTM荧光PCR/RT-PCR体系可特异检测牛白血病病毒核酸,而对蓝舌病、牛病毒性腹泻-粘膜病、水泡性口炎、口蹄疫、牛流行热、牛传染性鼻气管炎等病毒核酸以及牛结核分支杆菌、大肠杆菌、健康动物组织核酸扩增均呈阴性反应.敏感性实验表明LUXTM荧光RT-PCR对RNA前病毒的检测敏感性达0.49 ng/μL,荧光PCR对pTblv-gp51重组质粒的检测敏感性可达0.138拷贝,比OIE规程的巢式PCR方法高104倍以上.采用该方法从血清学阳性临床牛血清中检出BLV阳性样品.     

广州口岸进口海鱼的异尖线虫幼虫感染情况调查

本刊讯2007年9月20-22日,由我国外交部和亚洲开发银行资助,农业部国际合作与交流中心承办的中亚国家兽医人员禽流感防控技术培训班结束了在北京的首轮培训,移师青岛,在中国动物卫生与流行病学     

鸡马立克氏病Ⅰ型弱毒株的选育

本研究利用从国外引进的鸡马立克氏病Ⅰ型弱毒疫苗株，采取回归无特定病原（ＳＰＦ）雏鸡和在细胞培养物上交替接种的方法，连续传代５次后，进行免疫效力试验的结果表明，本研究选育的ＭＤＶ－Ｇ１毒株含１０，０００和２，０００独斑形成单位（ＰＦＵ）／只鸡剂量试验组对ＭＤ的保护率均达１００％；未经选育的进口ＭＤＩ型弱毒商品疫苗２，０００ＰＦＵ／只鸡剂量试验组，对ＭＤ的保护率为８６．７％；而常规使用的ＨＶＴ商品疫苗     

广东省猪PCV-2感染的病原学调查

2004年-2006年从广东省4个不同地区458个规模化猪场采集2128份病料,进行了PCV-2的抗原检测,结果表明,被检地区的猪群中普遍存在PCV-2感染,检测的458个规模化猪场中有372个猪场有PCV-2阳性猪,平均阳性率达到81．22%;2128份被检病料样品中有863份为阳性,平均阳性率达40．55％（863／2128）;不同地区不同时段猪场阳性率为63．64％～92．86％,病料样品的阳性率为24．00%～48．00％。     

应用荧光RT-PCR技术检测口蹄疫病毒

1　材料与方法1.1　试剂　裂解液 ,DEPC水、carrier RNA、RT-PCR反应液 ,RT- PCR酶颗粒 (Beads)、Taq酶。均由深圳匹基生物工程股份有限公司提供。1. 2　引物设计　上游引物 :5′- TCCACTAGC-GAGTGTTAGTAGC- 3′;下游引物 :5′- GCCTGT-CACCAGTGTTTGAGTA- 3′。1.3　试验材料　进口冻肉、冻猪脚、冻猪耳等。1.4　仪器　荧光 PCR仪 ,L ight cycler(Roche公司生产 )。1.5　操作方法1.5 .1　样本处理　 (1)取 n个 1.5 ml灭菌离心管 (n=样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照 ) ,作好标记。 (2 )在各离心管中加入 6 0…