牛白血病病毒GP51蛋白在大肠杆菌中表达及胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立

为了建立一种快速诊断牛白血病(BLV)的检测方法,本研究从BLV中扩增出其囊膜糖蛋白gp51基因,经测序后克隆于表达载体pET32a(+)中,构建了重组表达质粒pET32a-gp51。将其转化受体菌BL21,用IPTG诱导后表达出约42ku的目的蛋白,经western blot检测表明目的蛋白具良好的反应原性。以胶体金标记的羊抗牛IgG(Fc)抗体作为标记抗体,将纯化的His-gp51重组蛋白和羊抗牛IgG分别标记于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,各部件按序装配形成快速诊断试纸条。对22份样本分别用试纸条和ELISA试验进行检测,2种方法的阳性符合率为88.9%(8/9),表明本研究建立的胶体金免疫层析方法简便、快捷,具有较好的特异性和一定的敏感性,适宜基层初筛诊断和现场应用。     

进口牛在出口隔离场免疫牛病毒性腹泻疫苗对后续检疫工作的影响及应对策略

本文分析了进境种牛在境外出口隔离场免疫牛病毒性腹泻灭活疫苗后,对该病后续检疫工作的影响:从血清样品中进行病毒分离会受到干扰;对出口隔离场检疫所用的抗原捕捉ELISA几乎没有影响;对种牛在国内进口隔离场检疫及后续检疫时,如使用针对结构蛋白Erns的抗原捕捉ELISA试剂盒,则影响较小,如使用针对非结构蛋白的NS2-3抗原捕捉ELISA试剂盒,则影响很大;免疫导致无法区分自然感染和免疫反应。进而提出了取消免疫该疫苗的建议,并得到了进出口国政府主管部门的认同并付诸实施。     

警惕北美新发现的疫病--犬流感

美国相关机构和养犬者正在担心一种新出现的犬流感病毒会在北美蔓延。该病毒引起急性呼吸道感染,在赛犬场、保护动物协会的犬庇护所、宠物寄养园和兽医诊所等犬活动的场所发生流行,有些赛犬场和宠物饲养园被强令关闭几周进行清洗消毒。美国目前已经出现此病的有阿拉巴马、阿肯色、亚利桑那、科罗拉多、佛罗里达、爱荷华、堪萨斯、麻省、罗得岛、德克萨斯、纽约和西弗吉尼亚等地区,引起世界广泛关注。     

马流感病毒RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank上马流感病毒H3N8 HA和NA的基因序列,设计并合成了扩增HA和NA基因RT-PCR引物及NA基因荧光定量RT-PCR引物探针,经条件优化,建立的HA和NA RT-PCR方法检测下限为10 TCID50;荧光PCR方法检测下限为0.1 TCID50。对H5、H7、H9、H3N1、H3N2、Pi等6种病毒核酸进行扩增,发现具有良好的特异性,显示建立的方法具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于马流感病毒的检测和监控。     

斑点叉尾鮰中一种病原菌的分离与鉴定

目的未知病菌对江苏地区斑点叉尾鮰的养殖业造成了巨大的危害,本文对该地区某养殖场病鱼中分离的细菌进行了鉴定及微生物学特性研究。方法采用VIA培养基分离优势菌株;采用回归感染实验确认病原菌;采用形态学观察、生理生化特征测定、细菌特异性引物PCR扩增检测及细菌基因测序分析鉴定细菌;采用药敏实验测定它对部分抗生素的敏感性。结果从病鱼症状及菌株的培养特性、形态特征与嗜麦芽寡养单胞菌感染斑点叉尾鮰症状十分相似,病鱼有典型的肠套叠和肝脏变性现象。分离菌株为革兰氏阴性杆菌,氧化酶阴性、硝酸还原阴性,不发酵糖类,无动力。最初判为嗜麦芽寡养单胞菌,而经过VITEK2生化及16S rRNA基因系统发育进化显示,与不动杆菌16S rRNA核苷酸同源性最高,为98.7%～99.8%,该菌株为约翰逊不动杆菌。结论分离出的约翰逊不动杆菌grp2580083能导致斑点叉尾鮰患病,症状与嗜麦芽寡养单胞菌感染具有类似性,对渔业养殖造成影响。     

猪肉产品出口步履艰难 练内功破壁垒扩大出口——从我国猪肉产品的贸易现状看其前景及对策（二）

中国冷冻猪肉产品出口的国际市场格局在短时间内不会有太大的改变，仍然将是以俄罗斯市场为主、香港和澳门市场次之，另外再辅以新加坡、朝鲜、东欧一些小国家。而活猪的出口则仅是港澳地区，但也因当地饮食结构的变化和猪肉替代品的增多，将会呈缓慢下降之势。最具有吸引力的出口市场是日本，其次是丹麦和美国。     

OIE《陆生动物卫生法典》(2005年版)关于禽流感的规定

国际动物卫生组织（OIE）2005年版的《陆生动物卫生法典》与2004年版相比,有着重大变化：首先该章的题目就由2004版中的高致病性禽流感改为2005版中的禽流感,正式引入须申报的禽流感、须申报的高致病性禽流感、须申报的低致病性禽流感的概念,表明OIE对禽流感的关注已经不再局限于高致病性禽流感;其次删除了2004版中的2.7.12.1条至2.7.12.4的4条正式条款,而将2004版中很多不需强制执行的研究中条款变成了正式条款,同时还增加了全新的正式条款.     

西尼罗病毒套式RT-PCR检测方法的建立

从GenBank上调取西尼罗病毒的基因序列,经过分析,设计并合成2套套式RT-PCR引物,分别对西尼罗病毒灭活苗进行扩增,结果扩增出与目的片段大小一致的条带,将其克隆入pMD18-T-Vector中,进行序列测定,证实为WNV的基因。建立了套式RT-PCR检测方法,经各反应条件的优化后,发现2套nest-PCR引物能分别扩增出85个拷贝和62个拷贝的双链DNA,对乙型脑炎病毒、黄热病毒等11种病毒核酸进行扩增,发现具有良好的特异性,显示建立套式RT-PCR具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于口岸WNV的检测和监测。     

鉴别牛5种重要病毒的LAMP-基因芯片方法的建立

为建立牛的主要疫病的快速、准确及高通量鉴别诊断技术,以赤羽病病毒(AKV)、牛白血病病毒(BLV)、蓝舌病病毒(BTV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)5种牛传染病病原为研究对象,将LAMP技术与微流控芯片技术有机结合,建立了相应的基因芯片检测技术,并优化了该基因芯片的反应条件。结果表明,建立的基因芯片可同时检测上述5种病原,特异性好,60 min反应时间即可给出检测结果。其中AKV和PPRV的敏感性为10~3 copies/μL,BLV的敏感性为10~5 copies/μL,BTV和BVDV的敏感性为10~2 copies/μL,与LAMP检测的敏感性一致。成功建立了基于LAMP技术的5重RT-LAMP基因芯片,可同时快速准确检测上述5种病毒,为口岸检疫探索出一种能快速、高通量检测动物疫病的方法。     

二噁英污染及对犬的危害

二噁英是指结构和性质都很相似的包含众多同类物或异构体的一大类含氯有机化合物。二噁英有极强的稳定性和吸附性，熔点较高，难溶于水，是无色无味的脂溶性物质，所以非常容易在生物体内积累。二噁英在土壤中降解的半衰期为12年，在空气中光化学分解的半衰期为8．3天，在犬体内为7年。