青藏高原蕨麻种质资源遗传多样性POD同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析75份蕨麻过氧化物同工酶,结果与形态学标记、细胞水平、分子标记研究的结果一致,显示蕨麻的遗传多样性丰富。证实蕨麻具有丰富遗传变异,为合理保护与科学利用蕨麻资源提供科学依据。检测显示,蕨麻叶片过氧化物同工酶电泳共出现14条酶带;酶带多态位点百分率为100%;NTSYSpc 2.1软件计算的遗传相似系数为0.214~1.000,平均值为0.681;以遗传相似系数为基础,采用非加权类平均法进行聚类分析,在相似系数为0.67时分为2大类,第1类为蕨麻,第2类为鹅绒委陵菜。蕨麻种质资源遗传多样性及遗传变异均较丰富。说明,蕨麻丰富的遗传多样性是在青藏高原复杂的地理环境中长期进化的结果。     

临床分离食品动物源多重耐药大肠杆菌耐药分子特征研究

本研究从主动外排机制、膜孔蛋白缺失及氟喹诺酮类药物作用靶位改变等几个方面探讨,临床分离的20株动物源性多重耐药大肠杆菌的耐药分子特征。实验结果表明,20株临床分离大肠杆菌gyrA83、gyrA87、parC80的突变率分别为95％、85％、55％。gyrA和parC共同突变的有11株,突变率为55％;20株多重耐药菌大肠杆菌普遍存在主动外排机制,主要介导对部分氨基糖苷类、四环素、氟苯尼考和氟喹诺酮类药物耐药,当添加外排泵抑制剂PAβN后多数菌株庆大霉素、新霉素、四环素、氟苯尼考及氟喹诺酮类药物的MIC都降低了2倍～256倍。利用建立的ELISA方法检测外排泵AcrA蛋白的表达水平,结果证实所有,临床分离菌外排泵表达都增高;20株分离大肠杆菌中,部分菌株缺失OmpC或OmpF蛋白,同时缺失这两个蛋白的只有3株。部分菌株OmpF蛋白条带附近存在有多重耐药相关蛋白（Mar）。本研究结果揭示多重耐药大肠杆菌对常用抗菌药物高水平的耐药表型是主动外排机制、药物作用靶位的改变、外膜通透性的改变及其它机制共同作用的结果。     

药酶活性大小对药物药理作用的影响

药酶即肝微粒体药物代谢酶,也称肝微粒体混合功能氧化酶.该酶主要存在于肝细胞平滑内质网内,能催化药物等外源性物质代谢,使药物转化成极性较高、水溶性较强的代谢物排出体外,使其失去药理活性.药物在体内受药酶的作用而发生生物转化或代谢是药物灭活的最主要的方式.因此药酶的活性大小直接影响着药物药理作用的强弱.实验前,先采用药酶诱导剂和药酶抑制剂来增强和抑制药酶的活性,然后通过实验来观察药酶对药物药理作用的影响.1 材料与方法1.1 药酶的诱导药酶的活性可受某些化学物质的影响而提高,此即酶的诱导.在动物实验中,已确定200多种化学物质具有酶诱导作用.本实验采用酶诱导剂苯巴比妥钠进行诱导.诱导方法:取健康家兔三只,分别标号为1、2、3,于实验前第五天,用大剂量苯巴比妥钠0.1g/只进行腹腔注射,连续注射四天,每天一次,停药一天,再进行实验.     

基于学习者特征的农村成人教育实效性探讨

农民学习具有成人所具有的一般特点和作为农民的成人所具有的特殊性,提高农村成人教育的实效性,一是要让农民喜欢培训,二是让农民学到他想要的东西。因此,要正确定位农村成人教育的功能,根据农民的需要确定培训内容,根据农民的学习特点组织培训。     

寡核苷酸芯片检测兽医病原菌耐药性的研究

 利用寡核苷酸芯片（oligonucleotide array）对兽医临床常见病原菌耐药性检测进行了初步研究。设计1对兼并引物扩增3种病原菌（E. coli、S. aureus、M. gallisepticum）的gyrA基因片段，并用cy5-dCTP标记荧光。设计一系列检测病原菌对氟喹诺酮类药物耐药的寡核苷酸探针，将探针固定在APS-PDC法制作的Microarray上，用标记的PCR产物与之杂交，置于Scanarrray4000中扫描，利用ImaGene3.0软件对杂交图像进行分析。研究结果表明，设计的兼并引物能很好地扩增出3种病原菌的gyrA基因片段，与Microarray杂交后在相应的位点出现可检测的杂交信号，样本O78S（禽大肠杆菌）、SS（金黄色葡萄球菌）、S6-10（鸡毒支原体）的ratio比值均≥2，说明这3株是敏感株；样本EDr（犬大肠杆菌）、ECr（猫大肠杆菌）与a1探针（检测GyrA第83位氨基酸发生突变的探针）的ratio比值≤0.5，说明这两株是耐药突变株，均与样本的实际情况相吻合。说明利用Oligonucleotide array能快速准确地检测出GyrA亚基第83、87位发生突变的耐药菌株，是可行、有效、快捷的抗菌药耐药性的监测方法。本研究为进一步研制和开发兽医临床常见病原菌耐药性检测芯片打下初步基础。     

抗生素压力下不同血清型沙门氏菌耐药性研究

本研究旨在探讨不同血清型沙门氏菌在环丙沙星抗生素压力下突变频率及在耐药发展过程中靶位基因突变、外排泵及调控基因表达的差异。选取临床分离的印第安纳型、肠炎型和鼠伤寒型沙门氏菌的敏感菌株,在环丙沙星压力下诱导耐药突变,分别获得一系列不同程度的耐药突变株。分别检测不同血清型沙门氏菌突变株的突变频率、靶位基因喹诺酮耐药决定区(QRDRs)和外排泵调控基因ramR-ramA突变及外排泵相关基因的表达水平;同时检测了母株在羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)存在情况下环丙沙星药物的蓄积浓度,以确定母株是否存在外排泵的作用。结果表明,在环丙沙星压力下,印第安纳型沙门氏菌较肠炎型和鼠伤寒型有更高的突变频率,易获得耐药株;印第安纳血清型菌株耐药性的获得主要是由于靶位基因gyrA发生单突变,协同外排泵外排作用增强而获得高水平耐药;肠炎型沙门氏菌耐药性获得主要是由于靶位基因gyrA发生83和87位双位点突变,并随着gyrB和parC基因的多位点同时突变而获得高水平耐药,耐药性的发展过程中没有外排泵作用参与;而鼠伤寒沙门氏菌在抗生素压力下不易发展成耐药菌,耐药性发生主要是由于靶位基因gyrB发生突变,而伴随parC基因突变及微弱的外排泵作用导致耐药水平增加。     

动物源产CMY-2大肠杆菌分子流行病学研究

为调查产CMY-2大肠杆菌在广东各养殖场的流行情况,对2010—2011年间分离自猪、鸡、鸭、鹅等动物的1293株大肠杆菌,采用PCR方法筛选出bla_CMY-2阳性菌株,琼脂稀释法测定阳性菌株对17种抗微生物药物的敏感性;接合转移试验和XbaⅠ酶切PFGE图谱分析bla_CMY-2基因转移扩散的方式。结果显示,1293株大肠杆菌中27 株含有bla_CMY-2 基因,检出率为2.09%,均为多重耐药菌株,主要耐药谱型为AMP/CHL/TET/FLF/CTF/CTX/CAZ/CTR/GEN/CIP/ENR/NAL/OQX;27 株携带bla_CMY-2 基因菌株中有14 株的bla_CMY-2 基因可随质粒转移到受体菌E.coli C600中,且往往与bla_TEM-1和(或)qnrS1共同转移;PFGE分析结果显示,27 株携带bla_CMY-2 基因菌株共产生17条谱带,其中有4株菌株,两两分别来自同一地区,存在克隆传播关系。提示,在广东地区食品动物养殖场内存在产CMY-2大肠杆菌的克隆传播,且bla_CMY-2 基因伴随可转移质粒或其他可转移移动元件可能是造成产CMY-2大肠杆菌流行分布的主要原因。     

一种简便、快速检测鸡毒支原体的PCR方法

鸡毒支原体（MG）是造成鸡慢性呼吸道疾病的主要病原菌。通常采用血清学方法诊断该病，由于存在非特异性交又反应，这给临床诊断带来困难。为解决MG快速诊断问题，该研究根据已发表的鸡毒支原体种特异性序列FMG-2合成一对引物（MG1，MG2），用PCR方法检测MG。结果表明，该PCR方法对MG能特异性扩增732bp目的片断，而对照菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等）却不能扩增出目的片段。PCR产物经测序，其序列与Genbank序列同源性为98．86％。用PCR方法检测60份感染样本，其阳性检出率为80％，而用传统的分离培养方法检出率仅为50％。     

动物药学专业人才产学合作培养模式的探究

随着我国农业产业结构的调整,兽药行业正以前所未有的速度发展,随之而来的是对动物药学专门人才的需求与日俱增,本文对动物药学专业人才培养模式进行了阐述,以及对如何开展产学合作模式培养创新型动物药学人才进行了探讨。     

耐氟喹诺酮类药物鸡毒支原体gyrA基因突变的研究

鸡毒支原体(MG)是引发鸡慢性呼吸道疾病的主要病原,临床常采用抗菌药物进行控制[1]。FQ s作为控制鸡毒支原体感染的主要药物,随着药物的广泛使用,尤其不合理用药,临床已反映该类药物疗效并不理想。但有关MG临床株对FQ s耐药性的研究却鲜有报道。仅有的几篇报道也限于诱导耐药株