大肠杆菌acrR插入序列对acrAB表达水平及多重耐药性的影响

为研究大肠杆菌(E.coli)分离株ED28的acrR基因中777bp插入片段对外排泵AcrAB表达水平及多重耐药性的影响,本研究将野生型acrR通过互补实验导入ED28中得到C-ED28。通过药物的最低抑菌浓度(MIC)测定、有机溶剂耐受性试验和实时定量PCR(qPCR)等方法检测菌株中AcrAB外排泵的活性。通过PCR方法检测ED28和C-ED28喹诺酮耐药决定区(QRDR)的氨基酸突变及携带的质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因。结果显示,临床分离菌株ED28对12种抗生素呈多重耐药表型,而互补菌株C-ED28恢复了对多种药物的敏感性。当能量抑制剂(CCCP)存在时,喹诺酮类和β-内酰胺类药物对ED28的MIC普遍降低,而对C-ED28的MIC保持不变。ED28对染料溴化乙锭(EB)的MIC为512μg/mL,对正己烷和环己烷耐受;而C-ED28对染料EB的敏感性增强,MIC为16μg/mL,对正己烷耐受,对环己烷不耐受。qPCR结果显示,基因acrA和acrB在C-ED28中的表达水平低于亲本菌株ED28,而基因marA在C-ED28中的表达水平高于ED28。靶位突变检测和耐药基因检测结果显示,ED28存在gyrA(Ser83Leu和Asp87Asn)和parC(Ser80Ile)双突变,携带aac(6’)-Ib-cr、blaCTX-M-27和blaTEM-13个质粒编码耐药基因;而C-ED28仅存在gyrA(Asp87Asn)一个突变位点,并丢失aac(6’)-Ib-cr、blaTEM-1两个基因。     

动物源产CMY-2大肠杆菌分子流行病学研究

为调查产CMY-2大肠杆菌在广东各养殖场的流行情况,对2010—2011年间分离自猪、鸡、鸭、鹅等动物的1293株大肠杆菌,采用PCR方法筛选出bla_CMY-2阳性菌株,琼脂稀释法测定阳性菌株对17种抗微生物药物的敏感性;接合转移试验和XbaⅠ酶切PFGE图谱分析bla_CMY-2基因转移扩散的方式。结果显示,1293株大肠杆菌中27 株含有bla_CMY-2 基因,检出率为2.09%,均为多重耐药菌株,主要耐药谱型为AMP/CHL/TET/FLF/CTF/CTX/CAZ/CTR/GEN/CIP/ENR/NAL/OQX;27 株携带bla_CMY-2 基因菌株中有14 株的bla_CMY-2 基因可随质粒转移到受体菌E.coli C600中,且往往与bla_TEM-1和(或)qnrS1共同转移;PFGE分析结果显示,27 株携带bla_CMY-2 基因菌株共产生17条谱带,其中有4株菌株,两两分别来自同一地区,存在克隆传播关系。提示,在广东地区食品动物养殖场内存在产CMY-2大肠杆菌的克隆传播,且bla_CMY-2 基因伴随可转移质粒或其他可转移移动元件可能是造成产CMY-2大肠杆菌流行分布的主要原因。