细菌脂肪酶分子生物学研究进展

脂肪酶是一种重要的工业用酶,已广泛应用于食品、精细化工、医药和能源等领域。细菌脂肪酶是生物催化剂的最重要组成部分。文中综述了细菌脂肪酶的基因结构、表达、分泌、折叠等方面的研究进展,并展望了细菌脂肪酶基因工程的研究方向及前景。     

分子蒸馏耦合脂肪酶催化浓缩菜籽油脱臭馏出物中维生素E研究

【目的】菜籽油脱臭馏出物是天然维生素E的重要来源之一。为了从菜籽油脱臭馏出物中获得较高纯度的天然维生素E。【方法】采用分子蒸馏和脂肪酶催化浓缩菜籽油脱臭馏出物中维生素E；在分子蒸馏预处理和单因素试验的基础上，采用响应曲面法建立脂肪酶催化反应生成的脂肪酸甲酯含量的数学模型。【结果】当20g反应原料，反应温度37℃，初始加入水量11.77 ml，加入酶量30.78 U，水解时间16 h，在后续反应中单次加入甲醇量1.32 ml和脂肪酶15 U, 共加3次，总反应时间40 h，多次分子蒸馏后维生素E的纯度达到25%。【结论】分子蒸馏耦合脂肪酶催化浓缩菜籽油脱臭馏出物中维生素E取得了较好的效果,为其工业应用提供了基础。     

水稻ARAB-1类似基因的电子克隆及生物信息学分析

[目的]对水稻OsARAB-1基因进行电子克隆,并对其进行生物信息学分析.[方法]以NP 174188.1为查询探针,通过电子克隆获得OsARAB-1基因全长cDNA,用生物信息学软件对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析.[结果]获得了OsARAB-1基因全长cDNA,基因编码区序列(CDS)全长1 086 bp.电子定位于第五染色体基因组序列NC 008398.2核苷酸序列6 769 813 ～6 773 213 bp区域.OsARAB-1蛋白属于亲水性的胞外蛋白,比较稳定,偏碱性.二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主.具有2个功能结构域:SGNH水解酶型酯酶、GDSL脂肪酶.有21个磷酸化位点、7个糖基化位点.推定的活性位点的氨基酸残基为Ser34、Gly107、Asn167、Asp333、His336.与玉米酯酶亚型B4FM12亲缘关系最近.OsARAB-1基因的表达对水稻的发育和形态发生起重要作用,与水稻抗稻瘟病有关.[结论]该研究为用试验方法克隆该基因和功能鉴定奠定了基础.     

Assessing the severity of canine pancreatitis

The objective of this study was to determine whether laboratory testing currently available is able to provide prognostic information in canine pancreatitis. A prospective study of dogs with naturally occurring pancreatitis was undertaken. Twenty-two cases with histologically confirmed pancreatic inflammation were included in the study. Each dog had routine haematology parameters, serum biochemistry (including lipase and amylase), serum trypsin-like immunoreactivity and trypsinogen activation peptides (TAP) in urine and plasma measured. Twelve of the dogs were classified as having severe disease. These dogs had statistically significant increases in urinary TAP-creatinine ratio (UTCR) measurement, serum lipase, serum phosphate and serum creatinine concentrations. Additionally dogs with severe pancreatitis had significantly decreased urine specific gravity levels. The most sensitive and specific test to assess the severity of pancreatitis was the measurement of UTCR.     

0～3周肉仔鸡消化道酶发育规律的研究

本试验以０～３周Ａｖａｉｎ商品代肉仔鸡公雏为研究对象,测试０,４,７,１０,１４,１７和２１日龄肉仔鸡体重,消化道器官重量,胰腺和肠道食糜中淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶和脂肪酶活性的变化,基本摸清了０～３周肉仔鸡体重、消化器官的生长规律及消化道酶的发育规律。试验结果表明：（１）肉仔鸡在４～１０日龄日均相对生长率达到最大值（平均每天增重达１９％）,１０日龄后下降,到１４～２１日龄,基本维持在１３％～１４％左右;（２）各器官的相对重量（ｇ／ｋｇ体重）达到峰值的时间并不一致,腺胃和肌胃的相对重量在４～７天为最高,肝和胰在７～１０天,小肠在７天左右;（３）从异速生长的指标看,肌胃的最大增长倍数是体重增长倍数的１．５倍,腺胃是２倍,肝脏是２．３倍,小肠是３倍,胰腺达６倍;（４）小肠内容物的相对重量（ｇ／ｋｇ体重）在４～１０日龄达到最大值,以后呈下降趋势;（５）胰腺和肠道的消化酶活性（活性单位／ｋｇ体重）基本上随着日龄的升高而上升。在胰腺,淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶和脂肪酶活性均在１０,７,２１和１０日龄达到峰值。在肠道,淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶和脂肪酶活性均在１０日龄达到峰值。从消化道酶的分泌情况看,肉仔鸡早期消化酶     

复合微生物制剂对草鱼生长与消化酶活性的影响

以"正大康"草鱼颗粒饲料配方为基础日粮,将1%的复合微生物制荆作为饲料添加剂投喂草鱼,30 d后分别测定草鱼的生长性能指标与肝胰脏、肠道的淀粉酶和脂肪酶的活性.结果显示,实验组草鱼的体重和体长分别比对照增长8.93%(P＜0.01)和3.93%(P＜0.01);肝胰脏和肠道的淀粉酶的活性分别提高227.36%(P＜0.01)和239.56%(P＜0.01),脂肪酶的活力分别提高22.51%(P＜0.01)和7.16%(P＜0.01).从而表明,复合微生物制剂能有效促进草鱼的生长与提高消化能力,为其在水产养殖中的应用提供参考依据.     

病毒病抗性不同的大豆品种及其F_1代过氧化物酶酯酶同工酶分析

本研究对大豆病毒病抗性不同的大豆杂交亲本及F_1代,接种SMV_1号株系后的过氧化物酶和酯酶同工酶的变化进行了分析。结果表明,抗病与感病亲本及其F_1代接种后的同工酶谱带存在着明显的差异。感病亲本及F_1代酶的活性增强,酶带数较多,而且部分酶带变宽,颜色变深。抗病亲本则不发生变化。各组合F_1代的酶谱与双亲有关,抗病×抗病的F_1代酶谱与双亲完全相同,抗病×感病的F_1代酶谱偏向抗性亲本,感病×感病的F_1代产生一个双亲所不具备的小分子新杂种酶带。未接种的感病亲本酶谱与抗病亲本相同。植株内部同工酶的变化与成株抗性相一致。因此,我们认为过氧化物酶同工酶,可作为鉴定大豆抗感病毒病的生化指标之一。     

酶法催化蓖麻油生产生物柴油的研究

[目的]优化酶法催化蓖麻油生产生物柴油的条件。[方法]从种植蓖麻试验地土壤中分离出1株脂肪酶产生菌(Pseudomonassp.)H-4,以其发酵液制备的固定化酶为催化剂,催化蓖麻油与甲醇转酯化生产生物柴油,研究该酶的转酯能力。[结果]薄层检测和气相色谱检测表明,该脂肪酶具有催化蓖麻油与甲醇发生酯交换反应制备蓖麻油酸甲酯的功能。随着反应时间的延长,酯交换率不断升高。甲醇分3次加入,酯交换率最高(78%)。反应温度40℃,酯交换率最高(81%)。酶添加量0.6 g,酯交换率最高(85%)。[结论]在醇油摩尔比3∶1,甲醇分3次加入,固定化酶添加量0.6 g,反应温度40℃,150 r/min条件下反应10 h,油脂的酯交换率达85%。     

TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪脂蛋白酯酶mRNA方法的建立

【目的】克隆猪cDNA,作为猪LPL mRNA定量检测的标准品,建立检测方法。【方法】用RT-PCR,从猪背最长肌的总RNA中逆转录扩增LPL的cDNA,将纯化的LPL cDNA与pGM-T载体进行连接,转化宿主菌TOP10,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析,对质粒标准进行实时荧光定量PCR 检测。纯化质粒并检测260 nm吸光度,确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品。【结果】建立了猪LPL mRNA实时定量PCR检测方法,特异性好,检测灵敏度达103拷贝,线性范围为1×103 ～1×1010拷贝,阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系（R2＝0.9871）。【结论】成功克隆了LPL实时荧光PCR定量标准,且TaqMan荧光定量RT-PCR的方法可对猪背最长肌LPL mRNA的表达进行准确定量。     

葡萄糖氧化酶和脂肪酶对面条品质的影响研究

研究了葡萄糖氧化酶、脂肪酶单体及复配添加对面条品质的影响。通过感官品评对面条的品质进行了评价,实验表明：葡萄糖氧化酶和脂肪酶对面条的品质均有明显的改良作用,且二者具有协同互补性。在面粉中的最佳添加量为葡萄糖氧化酶40 mg/kg和脂肪酶60 mg/kg。