超早期断奶应激对仔猪消化酶活性的影响初报

试验选用两窝１４ 日龄杜×（ 大×长） 三元杂交商品猪,每窝１０ 头,每窝仔猪按体重平均分为断奶处理组和哺乳对照组,每组两个重复（ 栏） ,每栏５ 头猪。分别于断奶后第０（１４ 日龄） 、２ 、４ 、６ 、９ 天从每栏内随机抽取一头猪,屠宰后取胰腺和空肠内容物样品,测定胰蛋白酶、淀粉酶及脂肪酶活性。试验结果表明,断奶应激不同程度地降低了仔猪胰腺和空肠内容物中胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性。随着断奶后时间的推移和采食量的增加,断奶仔猪空肠内容物中胰蛋白酶、脂肪酶以及胰腺中淀粉酶活性得以恢复并呈上升趋势。     

树鼩脂蛋白脂肪酶的cDNA克隆、组织分布及活性测定

目的了解不易感动脉粥样硬化动物树鼠句的脂蛋白脂肪酶的结构和活性特点,并与其它种属比较,探讨脂蛋白脂肪酶在树鼠句独特脂代谢中的作用。方法以树鼠句脂肪细胞mRNA反转录获得的cDNA一链为模板,应用SMART-RACE技术获得树鼠句脂蛋白脂肪酶的cDNA序列并推导出其氨基酸序列;实时定量PCR方法检测树鼠句脂蛋白脂肪酶mRNA在各组织中的分布;真核表达树鼠句和人脂蛋白脂肪酶蛋白,放射性同位素法测定二者的活性并比较。结果树鼠句脂蛋白脂肪酶cDNA序列全长为3293bp,其中编码区1437bp,编码20个氨基酸的信号肽和458个氨基酸的成熟蛋白,该成熟蛋白N-端比人脂蛋白脂肪酶多10个氨基酸。树鼠句脂蛋白脂肪酶与其它哺乳类动物的氨基酸序列同源性大于90%,功能域高度保守。树鼠句脂蛋白脂肪酶的组织表达谱比较广泛,在心肌和脂肪组织中大量表达,但在骨骼肌中未检测到,却在肝脏中有中低水平表达,与人脂蛋白脂肪酶在这两种组织中的表达相反。活性测定结果显示,树鼠句脂蛋白脂肪酶活性显著高于人(7.67倍),这与测定的树鼠句血浆低甘油三酯水平相符。结论树鼠句的高活性脂蛋白脂肪酶可能是其血浆低水平甘油三酯的主要原因。     

钙处理对盐胁迫下大豆种子萌发及其生理生化指标的影响

试验了不同浓度的ＣａＣｌ２，Ｃａ（ＮＯ３）２和ＣａＳＯ４三种钙盐对大豆生长前期盐胁迫的缓冲效应，结果表明：ＣａＣＬ２，ＣａＳＯ４都有明显的缓解作用，其中以１５ｍｍｏｌ／Ｌ，ＣａＣｌ２的缓解效果最佳。     

固定化脂肪酶催化合成生物柴油的研究

研究了固定化脂肪酶（LBK-H100）催化大豆油与甲醇合成生物柴油的反应。考察反应条件如醇油比、反应温度、反应次数对酯化率的影响。结果表明，固定化酶催化大豆油醇解反应最适醇油比为3:1，甲醇分3次加入，可避免酶在甲醇溶液中失活，在反应温度35℃条件下，酯化率可以达到90%以上；固定化酶重复使用15次(连续反应30d)，仍具有一定的催化活性。     

Reconciling apparent variability in effects of biochar amendment on soil enzyme activities by assay optimization

We studied the effects of a biochar made from fast pyrolysis of switchgrass on four soil enzymes (β-glucosidase, β-N-acetylglucosaminidase, lipase, and leucine aminopeptidase) to determine if biochar would consistently modify soil biological activities. Thus, we conducted a series of enzyme assays on biochar-amended soils. Inconsistent results from enzyme assays of char-amended soils suggested that biochar had variable effects on soil enzyme activities, thus we conducted a second experiment to determine if biochar reacts predictably with either enzyme or substrate in in vitro reactions. Both colorimetric and fluorescent assays were used for β-glucosidase and β-N-acetylglucosaminidase. Seven days after biochar was added to microcosms of 3 different soils, fluorescence-based assays revealed some increased enzyme activities (up to 7-fold for one measure of β-glucosidase in a shrub-steppe soil) and some decreased activities (one-fifth of the unamended control for lipase measured in the same shrub-steppe soil), compared to non-amended soil. In an effort understand the varied effects, purified enzymes or substrates were briefly exposed to biochar and then assayed. In contrast to the soil assays, except for β-N-acetylglucosaminidase, the exposure of substrate to biochar reduced the apparent activity of the enzymes, suggesting that sorption reactions between substrate and biochar impeded enzyme function. Our findings indicate that fluorometric assays are more robust to, or account for, this sorption better than the colorimetric assays used herein. The activity of purified β-N-acetylglucosaminidase increased 50-75% following biochar exposure, suggesting a chemical enhancement of enzyme function. In some cases, biochar stimulates soil enzyme activities, to a much greater degree than soil assays would indicate, given that substrate reactivity can be impeded by biochar exposure. We conclude that the effects of biochar on enzyme activities in soils are highly variable; these effects are likely associated with reactions between biochar and the target substrate.     

硅藻土吸附增强的(RS)-2,4-DP对映体选择性酶促水解

利用手性气相色谱技术研究了硅藻土吸附作用对(RS) 2 ,4 二氯苯氧丙酸甲酯(2 ,4 DP)酶促水解对映体选择性的影响。实验结果表明,硅藻土吸附作用显著增强了酶促反应的对映体选择性(ER值由1.5 8增加到5 .31)。进一步研究表明,硅藻土对脂肪酶的吸附,引起酶构象变化,影响农药底物与酶结合的微环境,是酶促反应的对映体选择性增强的主要原因。吸附在硅藻土上的脂肪酶,与R 2 ,4 DP结合更为困难,反应速率下降;而S 2 ,4 DP接近酶反应中心更加容易,反应速率上升。此外,硅藻土吸附作用对农药底物的束缚引起处于“自由状态”的底物减少,也使酶促反应的对映体选择性略有增强     

维生素C对圆斑星鲽早期发育的影响

本研究旨在探究维生素C(V_C)对圆斑星鲽(Verasper variegatus)早期发育中孵化率、出膜率和成活率的影响,对其消化酶和脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)及肝脂酶(Hepatic Lipase,HL)的影响。实验用圆斑星鲽为人工受精卵,分为5组,孵化水体V_C浓度分别为0、20、25、30和35 mg/L,分别在成熟卵、受精卵、原肠中期、晶体出现期、内源营养期(2日龄)、混合营养期(6日龄)及外源营养期(9日龄)取样。记录圆斑星鲽的出膜时间、出膜率和成活率,测定对照组和生长指标优越组的消化酶活性和2种酯酶的活性。结果显示,25 mg/L的V_C能显著提高圆斑星鲽的出膜率和成活率,并缩短出膜时间(P0.05)。V_C能促进圆斑星鲽早期发育过程中蛋白质的沉积。外源营养期后,胃蛋白酶活性显著提高(P0.05),淀粉酶活性在混合营养期显著提高(P0.05),脂肪酶和胰蛋白酶活性在内源营养期就显著提高(P0.05)。25 mg/L V_C溶液浸泡使圆斑星鲽胚胎发育过程中的LPL和HL比活力显著升高(P0.05)。合子中的LPL和HL基因可能在原肠期开始表达,合成脂质水解酶分解脂质,为胚胎发育供能。研究表明,圆斑星鲽成熟卵受精后脂肪酶和胰蛋白酶酶优先发挥作用,分解卵黄中的碳水化合物为胚胎发育迅速提供能量。25 mg/L的V_C能显著提高消化酶活性,并促进蛋白质的沉积,有利于孵化成活的V_C浓度可以显著促进圆斑星鲽早期发育的脂质代谢。     

重金属铬和铜对花生种子萌发和脂肪酶活力的影响

[目的]研究重金属对花生种子萌发的影响,[方法]用不同浓度的Cr^6＋和Cu^2＋溶液浸泡花生种子,测定了不同处理的发芽率、发芽指数、活力指数和脂肪酶活力。[结果]低浓度铬和铜溶液浸种可以提高花生种子的发芽指数和活力指数,当铬和铜溶液达到50和300mg／L时,则降低种子的发芽指数,抑制种子的活力,其浓度越高,抑制作用越明显。以5和30mg／L铬处理的花生种子酶活力为最高,其次为3mg／L,其他铬浓度处理均比对照低;以25mg／L铜溶液处理的花生种子酶活力为最高,其次为50和100mg／L的处理。[结论]铬和铜对花生种子萌发的影响表现为低浓度促进高浓度抑制。     

耐甲醇脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究

[目的]筛选耐甲醇脂肪酶产生菌,并对其酶学性质进行研究。[方法]采用培养基中添加不同浓度甲醇（0、5%、10%、15%、20%）的方法筛选甲醇耐受性脂肪酶产生菌,形态学和ITS序列分析确定菌株的种属关系,硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose FF纯化脂肪酶,并对纯化的酶进行耐甲醇试验和酶学性质研究。[结果]筛选到183株脂肪酶产生菌,菌株SXL-107对浓度20%甲醇具有较好耐受性,脂肪酶活力达104 U/ml;ITS同源性分析确定该菌为Galactomyces geotrichum;经过纯化的SXL-107脂肪酶在浓度10%甲醇溶液中作用48 h后,剩余酶活为96.15%;该酶最适温度为40℃,pH为7.0,50℃温浴60 min仍有80%的酶活力,在pH 4.0~9.0间稳定,微量的Mg2＋、K＋和Zn2＋对该酶有激活作用,Mn2＋和CO2＋有抑制作用,分子量约为66 kDa。[结论]筛选到一株耐甲醇能力较强的脂肪酶产生菌,为该酶在生物柴油中的应用奠定基础。