枯草芽孢杆菌分泌载体构建及其对脂肪酶A的分泌表达

[目的]构建含不同信号肽编码序列的枯草芽孢杆菌分泌表达载体,并研究这些载体对脂肪酶A的分泌表达效率。[方法]克隆得到枯草芽孢杆菌168株的脂肪酶A编码基因,同时扩增得到蛋白质NprE、Bpr、YweA的信号肽编码序列,构建了脂肪酶A分泌表达载体pMA5-estA、pMA5-nprE-estA、pMA5-bpr-estA和pMA5-yweA-estA,并转化到枯草芽孢杆菌168株中得到相应的重组分泌表达菌株。[结果]对4株重组表达菌株进行摇瓶培养,所有菌株都实现了脂肪酶A的分泌,20 h后,168（pMA5-bpr-estA）的细胞外脂肪酶A的酶活力达到1.68 U/ml,约占该菌株脂肪酶A总表达量的86%。[结论]枯草芽孢杆菌Bpr信号肽对脂肪酶A具有较高的分泌效率。     

细菌脂肪酶的固定化研究

[目的]在传统海藻酸钠包埋的基础上,探索出一种固定化脂肪酶的有效方法,为其工业化生产提供参考。[方法]以高岭土和海藻酸钠为载体,用包埋法制备固定化脂肪酶,并测定固定化脂肪酶的活力及酶活得率。[结果]固定化脂肪酶的相对活力达到30．00％,酶活得率为62．55％。[结论]固定化脂肪酶具有良好稳定性,有利于工业化生产应用。     

猪胰脂肪酶固定化载体的优化

[目的]考察不同固定化载体与酶量的比例对固定化效果的影响以及缓冲溶液pH值对固定化效果的影响。[方法]以大孔树脂、硅藻土和活性炭的不同加入量作为因素,同时以缓冲溶液的不同pH值作为另外一个因素来考察对固定效果的影响。[结果]通过采用经典的橄榄油乳化法对脂肪酶水解活力进行测定,将得出的结果进行综合性比较。最终试验结果表明,利用大孔树脂的物理吸附法获得了较高的固定化酶水解活性收率。在固定化温度为30℃条件下,以大孔树脂作为载体时固定化猪胰脂肪酶效果最佳,此时缓冲溶液K2HPO4-KH2PO4的pH值为6.4,大孔树脂与猪胰脂肪酶的质量比为2.5∶1.0。如对反应温度、反应时间以及用酶量进行适当的控制,将可以得到活性更高的固定化脂肪酶。[结论]研究得出,固定化载体的选择以及缓冲溶液的pH值都是影响固定化效果的重要因素。     

有机相中脂肪酶催化合成乙酸芳樟酯的研究

[目的]以乙酸酐和芳樟醇为底物,采用脂肪酶催化法合成乙酸芳樟酯。[方法]通过考察不同种类的脂肪酶对该反应的催化效果,研究不同种类固定化载体对该脂肪酶活性的影响,探讨固定化后的脂肪酶在有机相中催化合成乙酸芳樟酯的条件。[结果]获得了一种对该反应催化效率较高的脂肪酶Novozym 435,得出其最佳固定化条件,确定了固定化后的脂肪酶在有机相中催化合成乙酸芳樟酯的最佳反应条件:异辛烷为最佳有机溶剂,以摩尔比为1∶1.5的芳樟醇和乙酸酐为底物,底物浓度为0.5 mol/L,在45℃下振荡反应24h,此条件下乙酸芳樟酯的收率较高。[结论]该反应体系的建立为今后工业生物催化法合成乙酸芳樟酯奠定了良好的基础。     

高效油脂降解菌的筛选与鉴定

[目的]筛选并鉴定高效油脂降解菌。[方法]采用富集分离法从食堂下水道口的污泥、污水池、油脂加工厂和发霉菜籽饼中分离出8株具有油脂降解能力的菌种,经复筛最终得到1株降解油脂能力较高的菌株,通过从菌株形态和生理生化特征进行鉴定。[结果]菌株CS-4的初始酶活力为10 U/mL,在牛肉膏蛋白胨固体培养基上表面光滑,单菌落,湿润,革兰氏阳性杆菌,有运动性,好氧,葡萄糖发酵产酸,初步确定该菌为芽孢杆菌属。[结论]该研究为在油脂下脚料及油脂污染中采用生物降解提供一定的理论依据。     

洋葱伯克霍尔德菌0107产脂肪酶发酵条件优化研究

[目的]对洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）0107产脂肪酶发酵条件进行优化。[方法]探讨碳源、氮源、诱导物和pH值等条件对产脂肪酶的影响。[结果]较为合适的培养基组成为玉米粉1.50%,蛋白胨1.50%,橄榄油1.00%,K2HPO40.20%,MgSO40.05%。较优化的培养条件为：起始pH值9.0,30℃培养60h,酶活达9.15U/ml,与初始相比酶活提高1.7倍。酶的最适pH值和温度分别为8.5和所60℃,70℃保温2h酶活稳定,这些性质都有利于对动植物油脂的转酯化。[结论]该研究为洋葱伯克霍尔德菌0107所产酶的广泛应用奠定了基础。     

Development of digestive enzyme activity in larvae of spotted sand bass <Emphasis Type="Italic">Paralabrax maculatofasciatus</Emphasis>. 1. Biochemical analysis

Spotted sand bass Paralabrax maculatofasciatus is a potential aquaculture species in Northwest Mexico. In the last few years it has been possible to close its life cycle and to develop larviculture technology at on pilot scale using live food, however survival values are low (11%) and improvements in growth and survival requires the study of the morpho-physiological development during the initial ontogeny. In this research digestive activity of several enzymes were evaluated in larvae, from hatching to 30 days after hatching (dah), and in live prey (rotifers and Artemia), by use of biochemical and electrophoretic techniques. This paper, is the first of two parts, and covers only the biochemical analysis. All digestive enzyme activities were detected from mouth opening; however the, maximum activities varied among different digestive enzymes. For alkaline protease and trypsin the maximum activities were detected from 12 to 18 dah. Acid protease activity was observed from day 12 onwards. The other digestive enzymes appear between days 4 and 18 after hatching, with marked fluctuations. These activities indicate the beginning of the juvenile stage and the maturation of the digestive system, in agreement with changes that occur during morpho-physiological development and food changes from rotifers to Artemia. All enzymatic activities were detected in rotifers and Artemia, and their contribution to enhancement the digestion capacity of the larvae appears to be low, but cannot be minimised. We concluded that the enzymatic equipment of P. maculatofasciatus larvae is similar to that of other marine fish species, that it becomes complete between days 12 and 18 after hatching, and that it is totally efficient up to 25 dah.     

根霉产脂肪酶液态发酵条件及部分酶学性质研究

对根霉脂肪酶液态发酵条件进行了研究 ,结果显示 :豆饼粉和麸皮各 5g对产酶有利 ;2 8℃、15 0r/min ,添加 0 .3g蔗糖和 0 .3g硝酸钠对产酶最有利。接种量为 2ml( 1× 10 7) ,2 8℃培养时 ,可得较高的酶活力。酶的最适反应pH值为 6.5 ,温度为 3 5℃。酶的半失活温度为 47.5℃ ,在pH值 6～ 8酶活力保持在 90 %以上     

脂肪酶基因工程菌NJY-1-69产脂肪酶在制备生物柴油中的应用

主要考察了水的添加量、催化剂用量、醇油摩尔比、有机溶剂的添加、反应时间、反应温度、甲醇流加方式对生物柴油转化率的影响.结果表明,脂肪酶基因工程菌NJY-1-69产脂肪酶制备生物柴油的最佳工艺条件：水的添加量为0.15％,醇油摩尔比为3∶1,催化剂用量14％,反应温度30 ℃,反应时间36 h,甲醇流加方式是分3次加入,获得的生物柴油最高转化率为89％.     

Rqflex法检测牛乳中脂肪酶的实验报告

本文重点介绍了Rqflex仪测定脂肪酶法，并简单介绍一些常规的方法。