小白鼠乳腺上皮细胞的体外培养

本试验对小白鼠乳腺上皮细胞的原代培养方法进行了探索。胶原酶消化法和组织块种植法均可用于培养小白鼠原代乳腺细胞。胶原酶消化法容易得到均匀的乳腺细胞，且上皮细胞所占比例也比较高。组织块种植法不容易丢失、损伤上皮细胞，然而上皮细胞长出较晚，且占比例较低。结果表明，可结合组织块转移、胰蛋白酶消化纯化上皮细胞。     

草鱼肠道胰蛋白酶同工酶GT-B的纯化及性质

深入了解草鱼消化蛋白酶的性质有利于充分探讨草鱼内脏的可利用途径和研究草鱼消化生理学.将草鱼肠道用冰丙酮脱脂,用磷酸盐缓冲溶液提取,然后经过硫酸铵粗分级沉淀,再经过离子交换层析、凝胶层析等纯化,分离得到一种碱性蛋白酶.SDS-PAGE分析表明其相对分子质量为26400.SDS-底物-PAGE以及抑制实验等表明酶可以水解酪蛋白和N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐(BAEE),其活性被大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)和甲苯磺酰氟(PMSF)强烈抑制,表明这是一种胰蛋白酶,命名为GT-B.用BAEE作底物时,该酶的最适作用温度为45℃,在65℃加热20 min,酶活性基本丧失;最适作用pH为8.5,在pH5.5～10.5范围内保持稳定,但在酸性环境里很容易失去活性.该酶的Vmax和Km值分别为3.33×103 min-1和31.68 μmol·mL-1,其生理转化效率高,为105.26 mL·μmol-1·min-1.该酶催化水解合成底物时的活化能Ea比较低,为18.31 kJ·mol-1.其活性不受Ca2+的影响,但是Ca2+能提高该酶的热稳定性.Zn2+, Cu2+, Hg2+和 Al3+等的存在会使此酶活性降低.     

胰蛋白酶酶解鹿血条件的优化

研究了胰蛋白酶对鹿血的酶解作用,以酶解产物对超氧阴离子自由基和羟基自由基清除能力为指标,分析了酶浓度(酶∶蛋白)、底物浓度(鹿血∶水)、pH值、酶解时间和酶解温度等因素对酶解反应的影响.结果表明,最佳酶解条件是酶浓度为8%,底物浓度(鹿血∶水)为1∶3,pH值为7.5,酶解时间为3 h,酶解温度为55℃.在此条件下酶解产物对超氧阴离子自由基和羟基自由基清除率分别可达91.63%和94.32%.     

大豆分离蛋白对幼建鲤肝胰脏发育及消化道蛋白酶活力的影响

研究了大豆分离蛋白（SPI）对10～35g幼建鲤Cyprinus carpio Var．Jian肝胰脏发育及消化道蛋白酶活力的影响。结果表明：饲料中用SPI替代鱼粉蛋白水平对幼建鲤肝胰指数、肝胰脏中的胰蛋白酶、凝乳蛋白酶活力以及肠道中胰蛋白酶、凝乳蛋白酶活力影响极显著（P＜0．01）或显著（P＜0．05）,随着SPI替代鱼粉蛋白比例的增加,蛋白酶活力均极显著下降（P＜0．01）,肝胰指数显著升高（P＜0．05）。用SPI替代鱼粉蛋白后,可引起幼建鲤消化能力下降,肝胰脏和肠道等消化器官的发育受阻,胰蛋白酶和凝乳蛋白酶的活力降低,饲料利用率下降;SPI中胰蛋白酶抑制因子是引起上述症状的重要因素之一。     

胰蛋白酶在环氧氯丙烷活化的2%珠状琼脂糖凝胶上固定化条件的研究

用环氧氯丙烷活化 2 %的珠状琼脂糖凝胶 ,并与胰蛋白酶进行偶联反应制备固定化酶。实验结果表明 ,固定化胰蛋白酶的活力受环氧氯丙烷量 ,活化反应的碱浓度及给酶量的影响。每 1.0 g的 2 %珠状琼脂糖凝胶 ,当活化剂量为 5 74 2 μmol,NaOH浓度为 0 .5mol·L-1,活化时间 3h ,给酶量为 5mg·ml-1,偶联 12h时 ,固定化酶活力最大     

山合欢种子胰蛋白酶抑制剂纯化及部分性质研究

采用去离子水抽提、硫酸铵分步盐析、亲和层析和分子筛层析等方法,从山合欢种子中得到一种胰蛋白酶抑制剂.SDS-PAGE结果表明,该抑制剂由2条多肽链构成,分子量分别为14.5和5.5 kDa.MALDI-TOF测定该抑制剂的精确分子量为19768.23 Da.该抑制剂能与胰蛋白酶形成1∶1的复合物,并且它们的结合不受SDS的影响.该抑制剂的肽指纹图谱中有7个主要的信号簇.通过串联质谱测定该抑制剂的部分氨基酸序列,比对发现与其他Kunitz蛋白酶抑制剂有较高的同源性.     

转基因抗虫作物中豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI）酶联免疫检测方法的建立

 从10个不同豇豆品种中筛选出抑制剂活性最高的901青皮豇豆，提取豇豆胰蛋白酶抑制剂。通过G-75凝胶过滤、亲和层析纯化了豇豆胰蛋白酶抑制剂（CpTI）并制备了其兔多克隆抗体。用所制备的抗体建立了酶联免疫检测方法并检测了转CpTI编码基因棉花、水稻中的CpTI含量，发现棉花不同器官CpTI的表达量不尽相同。     

根癌农杆菌介导的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜的研究

为得到具有较强抗虫性的新的芥菜种质资源，用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入芥菜，获得了Kan抗性植株。经PCR扩增、PCR-Southern blot和Northern blot分析，转化再生植株大部分呈阳性，而非转化的再生植株均为阴性，证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中。在室内进行了喂虫试验，结果表明转基因芥菜抗虫性明显高于对照，转基因植株之间存在抗虫性差异。     

壳聚糖固定化胰蛋白酶研究

以自制的壳聚糖为载体,以戊二醛为交联剂,制备了壳聚糖固定化胰蛋白酶。经测定该酶活性回收率达到72.7%,操作半衰期为12 d,表观米氏常数为5.88 mg/ml,最适pH值为8.0,最适温度为40℃;与游离胰蛋白酶相比,酶的耐热性和操作半衰期有明显提高,但表观米氏常数也略有增大。     

红豆草胰蛋白酶抑制剂的部分性质

通过胰蛋白酶偶联的Sepharose 4B亲和柱,从红豆草茎叶中分离纯化出一种胰蛋白酶抑制剂,对其抑制剂的抑制活力、摩尔抑制比和抑制活性中心等进行研究.结果表明:红豆草胰蛋白酶抑制剂对胰蛋白酶具有抑制作用,红豆草胰蛋白酶抑制剂对胰蛋白酶的摩尔抑制比为1∶2;用氨基酸修饰法,进一步证明红豆草胰蛋白酶抑制剂的两个活性中心分别是精氨酸残基和赖氨酸残基.