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101.
根据已发表的鸡D28k钙结合蛋白(CaBP—D28k)基因序列设计合成1对引物,利用RT—PCR技术从新扬州鸡小肠组织RNA中扩增出鸡CaBP—D28k cDNA,并克隆至pGEM—T中,经PCR、XhoⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定测序后,用DNAStar软件对克隆出的cDNA进行同源性分析。结果表明:新扬州鸡CaBP—D28k基因片断长为18.5kb,与GenBank中的CaBP—D28k基因具有高度的同源性(99.2%),在开发阅读框内仅有一个碱基的差别,中间没有出现缺失和插入,证明所得到的是鸡CaBP—D28k cDNA。 相似文献
102.
香蕉果实expansin cDNA克隆及序列分析 总被引:6,自引:0,他引:6
陆旺金 《华南农业大学学报》2003,24(3):40-42
提取成熟香蕉果肉的RNA并分离mRNA,以mRNA反转录合成cDNA,以该cDNA为模板,设计expansin的简并引物,进行RT-PCR(退火温度为50℃),得到的扩增产物纯化后与pGEM-T-Easy载体连接,转化大肠杆菌,任意挑选2个阳性克隆,进行序列分析,结果得到2个序列相同的expansin的cDNA基因片段,命名为MA-Exp3(以示与已登录的香蕉MA-Expl和MA-Exp2的区别),MA-Exp3中存在expansin基因的保守区域,即8个半胱氨酸残基和3个色氨酸残基,它编码177个氨基酸,与MA-Exp1的核苷酸同源性为74.2%,氨基酸同源性为86.4%。 相似文献
103.
枸杞中IPP异构酶相关基因(IPI)的分离 总被引:2,自引:0,他引:2
以宁夏枸杞叶片为材料,采用异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取完整的总RNA,利用PolyATract mRNA I-solation System(Promega公司)分离mRNA,然后利用Universal RibocloneRcDNA Synthesis System(Pro-mega公司)合成双链cDNA,在cDNA末端连接上EcoRⅠ接头,并与λExCell载体连接,利用PackageneLambda DNA Packaging System进行包装,构建出滴度为2.78×105pfu/mL,重组效率为88.1%的枸杞叶片cDNA文库。用Digoxigenin(DIG)标记龙胆草IPI探针,并对枸杞叶片cDNA文库进行筛选,获得7个IPIcDNA阳性克隆。释放质粒后,进行酶切鉴定,IPI阳性克隆cDNA插入片段的大小为1.5 kb左右。 相似文献
104.
新城疫病毒F_(48)E_8株cDNA文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以SPF鸡胚繁殖我国标准新城疫病毒F_(48)E_8强毒株,经蔗糖密度梯度超速离心纯化病毒。再以酚-SDS法提取病毒基因组RNA,作为反应模板、采用Promega公司商品试剂盒合成双股cDNA。以同聚物加尾的方法将cDNA克隆到质粒pGEM3Zf(一)中,经AIX平板筛选,限制性内切酶分析和Digoxigenin标记的核酸探针检测,共获得插入外源片段大小在0.6~4.8kb的阳性克隆75个,初步构建了F_(48)E_8株的cDNA文库 相似文献
105.
[目的]构建革胡子鲶生长激素基因原核表达体系。[方法]采用PCR方法,扩增得到了革胡子鲶生长激素基因成熟肽的cDNA序列,将该序列克隆至原核表达载体pRSET-A,构建重组质粒pRSET-mGH,并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达。[结果]革胡子鲶生长激素成熟肽cDNA序列全长534 bp,编码1个由178个氨基酸残基组成的生长激素成熟肽,分子量为20.28 kDa,等电点为5.93。SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的目的融合蛋白分子量为27.41 kDa,主要以非可溶性的包涵体形式存在于菌体沉淀中。目的融合蛋白的表达量高达细菌沉淀蛋白总量的36.8%。[结论]该研究为革胡子鲶生长激素的产业化开发和应用奠定了基础。 相似文献
106.
库尔勒香梨的苹果褪绿叶斑病毒cDNA探针检测技术研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对两种植物总RNA提取方法进行了比较研究,从中筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法;并利用RT-PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了实验研究。结果表明,当探针浓度为400ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应6h,可获得最高灵敏度。Tween20的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测,并对库尔勒地区香梨带毒情况进行了检测。结果表明,不论幼叶、老叶、皮层及冷冻叶片均可出现杂交信号,两种提取方法提取的总RNA也都出现了杂交信号,库尔勒香梨样品有45%的带苹果褪绿叶斑病毒。 相似文献
107.
以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对 2种总RNA提取方法进行了比较研究 ,从中行筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法 ;并利用RT PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针 ,在此基础上 ,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了试验研究 ,结果表明 ,当探针浓度为 4 0 0ng·ml-1,甲酰胺浓度为 4 5 % ,4 2℃杂交反应 6h ,可获得最高灵敏度。进口硝酸纤维素膜的灵敏度最好 ,基本无背景。Tween2 0的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测 ,结果表 相似文献
108.
大丽轮枝菌毒素诱导表达陆地棉cDNA序列的克隆与定位 总被引:3,自引:0,他引:3
为获得陆地棉黄萎病抗性相关候选基因,利用棉花黄萎病菌大丽轮枝菌V991毒素粗提物诱导耐黄萎病陆地棉品种'中棉12'应激基因的表达。在诱导幼根24 h时间点提取总RNA,PCR法合成双链cDNA,应用抑制消减杂交技术[1],得到了差异表达的180个克隆。经反Northern blot筛选出15个受毒素粗提物诱导应激表达的阳性cDNA克隆,将其命名为Vdrg(response gene induced by toxin of Verticillium dahliae)。本研究对所得阳性cDNA克隆进行了序列分析,并利用Pima S6 与 Acala Maxxa 海陆杂交四倍体棉花F2群体对Vdrg序列进行了棉花基因组定位。 相似文献
109.
荔枝果实两个膨大素基因的克隆与序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
以荔枝品种妃子笑果实的cDNA为模板 ,设计膨大素的简并引物 ,进行RT PCR。得到的扩增产物经纯化后与pGEM T Easy载体连接 ,转化大肠杆菌。任意挑选阳性克隆 ,进行序列分析 ,得到 2个序列不同的膨大素基因片段 ,分别命名为Lc Exp1和Lc Exp2。这 2个基因片段中均存在膨大素基因的保守区域 ,即 8个半胱氨酸残基和 3个色氨酸残基。Lc Exp1和Lc Exp2分别编码 177和 179个氨基酸 ,2者间的碱基同源性为 71.6% ,氨基酸同源性为76.3 %。在氨基酸水平上 ,Lc Exp1与Fa Exp2、Pp Exp1的同源性分别为 92 .7%和 92 .1% ,而Lc Exp2与Fa Exp2、Pp Exp1的同源性仅为 77.4%和 76.3 %。 相似文献
110.
构建cDNA表达文库用于克隆和研究牦牛角生长相关基因.Trizol提取牦牛角真皮乳头总RNA并纯化mRNA,用ZAP Express cDNA Synthesis Kit合成双链DNA,进行末端修饰,接入ZAP表达载体.经Gigapack Ⅲ Gold Packaging extract体外包装,转染XL1-Blue MRF'宿主菌,形成初级文库,初级文库进一步扩增形成稳定的cDNA文库.结果表明,文库库容量为4×107,重组率达93%,为进一步从文库中筛选相关基因提供了有效工具. 相似文献