全文获取类型
收费全文 | 548篇 |
免费 | 12篇 |
国内免费 | 26篇 |
专业分类
林业 | 26篇 |
农学 | 26篇 |
基础科学 | 7篇 |
19篇 | |
综合类 | 343篇 |
农作物 | 34篇 |
水产渔业 | 30篇 |
畜牧兽医 | 61篇 |
园艺 | 29篇 |
植物保护 | 11篇 |
出版年
2023年 | 2篇 |
2022年 | 3篇 |
2020年 | 2篇 |
2019年 | 7篇 |
2018年 | 4篇 |
2017年 | 13篇 |
2016年 | 19篇 |
2015年 | 17篇 |
2014年 | 23篇 |
2013年 | 20篇 |
2012年 | 47篇 |
2011年 | 66篇 |
2010年 | 66篇 |
2009年 | 66篇 |
2008年 | 44篇 |
2007年 | 36篇 |
2006年 | 32篇 |
2005年 | 14篇 |
2004年 | 11篇 |
2003年 | 10篇 |
2002年 | 8篇 |
2001年 | 9篇 |
2000年 | 6篇 |
1999年 | 6篇 |
1998年 | 14篇 |
1997年 | 7篇 |
1996年 | 3篇 |
1995年 | 9篇 |
1994年 | 5篇 |
1993年 | 4篇 |
1991年 | 2篇 |
1990年 | 3篇 |
1989年 | 3篇 |
1988年 | 2篇 |
1987年 | 3篇 |
排序方式: 共有586条查询结果,搜索用时 109 毫秒
101.
[目的]为家蚕蛹虫草大米培养基的应用和提高养蚕业的综合经济效益提供基础数据。[方法]分别对家蚕蛹虫草子实体及其大米培养基残基进行脱脂、热水浸提、脱蛋白、醇沉、干燥后得到粗多糖,用同种方法提取、纯化,并比较提取、纯化结果。[结果]家蚕蛹虫草子实体提取粗多糖得率为25.75%,培养基为12.85%。家蚕蛹虫草子实体和培养基粗多糖经DEAE-纤维素柱纯化,得到相似单一峰;家蚕蛹虫草子实体多糖的洗脱峰部分多糖含量占上样多糖总量的82%;培养基多糖的洗脱峰部分多糖含量占上样多糖总量的74%。两者所含多糖类似,大米培养基粗多糖得率较低,可不提取,有直接作为添加剂等生产应用价值。[结论]家蚕蛹虫草大米培养基可以作为一种新型添加剂加入饲料或调味品酿制原料中。 相似文献
102.
[目的]表达和纯化牛阴离子交换蛋白1(AEl)和生电碳酸氢钠协同转运蛋白(NBCel)的亲水结构域。[方法]根据AE1和NBCel的亲水结构域设计引物,通过PCR扩增牛AE1和NBCel的亲水结构域,通过原核表达系统,以E.coli BL2l(DE3)为表达宿主,经IPTG诱导,表达重组的牛AE1和NBCel的亲水结构域融合蛋白,并采用金属螯合层析法对目的蛋白进行纯化。15%SDS—PAGE分析目的蛋白的表达、分布和纯度。[结果]PCR扩增了牛AE1和NBCel的亲水结构域;IPTG诱导后,成功的表达了目的蛋白;目的蛋白主要存在大肠杆菌的胞浆中,可以被较好的纯化。[结论]牛AE1和NBCel的亲水结构域蛋白的表达为制备抗体和研究膜载体蛋白的调节机理提供了条件。 相似文献
103.
104.
105.
106.
饲料用米曲霉酸性蛋白酶研究 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]研究米曲霉酸性蛋白酶的纯化技术以及催化特性,为米曲霉酸性蛋白酶的开发和利用提供理论依据。[方法]采用丙酮沉淀,DEAE—Sephadex A-50柱层析方法分离纯化了米曲霉酸性蛋白酶,以酪蛋白为底物对其酶学性质进行了研究:[结果]结果表明:纯化倍数达到20.77;该酶最适pH值为6.0,最适温度为45℃;Fe^2+、Mg^2+对该蛋白酶的活性有明显的抑制作用,而Mn^2+、Cu^2+对该蛋白酶的活性有明显的激活作用。该蛋白酶Km=4.704mg/ml,Vmax=22.27μg/min。[结论]米曲霉蛋白酶具有很好的应用前景。 相似文献
107.
[目的]表达和纯化拟南芥热激因子HSF1。[方法]以构建的能表达热激因子HSF1的大肠杆菌Escherichia coli M15(pQE32/His6-HSF1,pREP4)为材料,用异丙基硫代-β—D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达HSF1,再通过镍亲和层析纯化表达的HSF1,通过变性的聚丙酰胺(SDS.PAGE)电泳分析表达蛋白和纯化蛋白。[结果]试验获得了表达的HSF1,并且进一步获得了纯化的HSF1。[结论]该研究为探讨拟南芥HSF1在基因组的结合位点提供了试验材料,为全面认识HSF1作用机理和生理功能奠定了基础。 相似文献
108.
猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值。[方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在最适条件下诱导表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行检测。应用Ni-NTAHis.Bind Resin层析柱在变性条件下纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。采用Western Blot及间接ELISA法检测复性后重组蛋白的免疫学活性。[结果]重组质粒pET-ORF7在大肠杆菌中以融合形式成功表达,融合表达产物主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE检测所表达的重组蛋白分子量为33 kD左右,与预期大小相符。Band-scan软件对表达蛋白分析发现,表达产物约占菌体蛋白的50%。Western Blot及间接ELISA法显示复性后的重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应,表明其具有良好的免疫学活性。[结论]该试验将为进一步研制PRRSV单克隆抗体及诊断试剂盒奠定基础。 相似文献
109.
鸡贫血病毒衣壳蛋白基因的原核表达 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]为VP1蛋白的免疫学研究和鸡贫血病毒基因工程疫苗的研制奠定基础。[方法]将1个新克隆的鸡贫血病毒vpl基因(AF448446)在大肠杆菌DE3中进行表达,并对该蛋白进行纯化。[结果]结果表明:已成功构建了表达载体pET30(b^+)-vp1;VP1蛋白已成功诱导表达并得以纯化;获得的VP1蛋白序列与已发表的VPl蛋白序列存在差异。[结论]试验克隆的vp1基因大小为1347bp,编码449个氨基酸的蛋白。 相似文献
110.
常乳中牛乳铁蛋白的纯化及抗菌活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]研究从常乳中纯化牛乳铁蛋白的工艺条件,探讨牛乳铁蛋白的抗菌活性。[方法]选用SP sepharose HP作为强阳离子交换介质,利用AKTApurifier10高效液相色谱仪纯化牛乳铁蛋白。[结果]结果表明,牛乳铁蛋白在pH值7.5、浓度0.85 mol/L的NaCl洗脱液中可以被洗脱下来,且产品纯度为90%以上。牛乳铁蛋白浓度为5 mg/ml时对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用。[结论]该研究建立了从常乳中纯化牛乳铁蛋白的方法,为大规模生产具有活性的牛乳铁蛋白奠定了基础。 相似文献