| 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析 |
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| 引用本文： | 张永富,韩春华,林健,刘月焕,韦海涛,祝俊杰,赵景义,李栋梁,马国文,布日额,李明刚,张婷,刘永宏,马明,张秋雨.猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析[J].安徽农业科学,2009,37(10):4439-4442. |
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| 作者姓名： | 张永富 韩春华 林健 刘月焕 韦海涛 祝俊杰 赵景义 李栋梁 马国文 布日额 李明刚 张婷 刘永宏 马明 张秋雨 |
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| 作者单位： | 内蒙古民族大学动物科技学院,内蒙古通辽,028000;北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京,100097;北京市畜牧兽医总站,北京,100107;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽,028000;北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司,北京,100043;内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古呼和浩特,010018;中国农业大学动物医学院,北京,100094 |
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| 基金项目： | 北京市农林科学院青年基金项目(2007020122); 北京市科委猪高致病性蓝耳病防控技术子课题 |
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| 摘 要： | 目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值。方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21（DE3）,用IPTG在最适条件下诱导表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行检测。应用Ni-NTAHis.Bind Resin层析柱在变性条件下纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。采用Western Blot及间接ELISA法检测复性后重组蛋白的免疫学活性。结果]重组质粒pET-ORF7在大肠杆菌中以融合形式成功表达,融合表达产物主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE检测所表达的重组蛋白分子量为33 kD左右,与预期大小相符。Band-scan软件对表达蛋白分析发现,表达产物约占菌体蛋白的50%。Western Blot及间接ELISA法显示复性后的重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应,表明其具有良好的免疫学活性。结论]该试验将为进一步研制PRRSV单克隆抗体及诊断试剂盒奠定基础。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF7基因 表达 纯化 免疫学活性 |
Expression of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus ORF7 Gene and Purification and Immun ological Activity Analysis of the Recombinant Protein |
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| ZHANG Yong-fu et al.Expression of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus ORF7 Gene and Purification and Immun ological Activity Analysis of the Recombinant Protein[J].Journal of Anhui Agricultural Sciences,2009,37(10):4439-4442. |
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| Authors: | ZHANG Yong-fu |
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| Institution: | ZHANG Yong-fu et al(College of Animal Science , Technology,Inner Mongolia University for the Nationalities,Tongliao,Inner Mongolia 028000) |
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| Abstract: | Objective] The aim of this study was to realize efficient expression of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) ORF7 gene in genetic engineering bacteria and analyze the immun ological activity of the recombinant protein after purification.Method]The constructed recombinant expression vector pET-ORF7 was transformed into Escherichia coli BL21(DE3) and induced by IPTG under the optimal condition.After analysis by SDS-PAGE and Western Blot,the expression products were purified by Ni-N... |
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| Keywords: | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus ORF7 gene Expression Purification Immun ological activity |
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