转基因牛多重PCR检测方法的建立

为建立一种快速检测转基因牛的多重PCR方法,针对牛线粒体16 S rRNA基因(BOS mtD-NA16 S rRNA,BOS)、转基因动物常用标记基因新霉素磷酸转移酶基因(NPT Ⅱ)、人乳铁蛋白编码基因(human laetoferrin gene,hLF)、人-α-乳清蛋白编码基因(human α-lactalb...     

紫菜中扑草净残留的快速检测方法

建立了高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UVD)法测定紫菜中除草剂扑草净残留量的方法.样品用乙腈提取,经石墨化碳黑固相萃取柱、LC-NH2固相萃取柱净化,HPLC-UVD测定紫菜中扑草净残留量.结果表明,HPLC法检测扑草净的线性范围为0.05~10 μg/ml,相关系数为r2=0.999 9,最低检出限为0.03 mg/kg,样品的加标回收率为91.32%~95.51%,相对标准偏差为2.26%~9.25%.     

牛阴离子交换蛋白1和生电碳酸氢钠协同转运蛋白亲水结构域的克隆·表达和纯化

[目的]表达和纯化牛阴离子交换蛋白1（AEl）和生电碳酸氢钠协同转运蛋白（NBCel）的亲水结构域。[方法]根据AE1和NBCel的亲水结构域设计引物,通过PCR扩增牛AE1和NBCel的亲水结构域,通过原核表达系统,以E．coli BL2l（DE3）为表达宿主,经IPTG诱导,表达重组的牛AE1和NBCel的亲水结构域融合蛋白,并采用金属螯合层析法对目的蛋白进行纯化。15％SDS—PAGE分析目的蛋白的表达、分布和纯度。[结果]PCR扩增了牛AE1和NBCel的亲水结构域;IPTG诱导后,成功的表达了目的蛋白;目的蛋白主要存在大肠杆菌的胞浆中,可以被较好的纯化。[结论]牛AE1和NBCel的亲水结构域蛋白的表达为制备抗体和研究膜载体蛋白的调节机理提供了条件。     

暗纹东方中BAFF基因相关序列的性质探讨

[目的]为探索暗纹东方基因组中是否存在BAFF基因。[方法]通过比对人、小家鼠、野猪、原鸡的BAFF基因cDNA序列,获取高度保守的同源片断。根据红鳍东方基因组文库序列设计引物,从野生暗纹东方肌肉样品中提取总DNA进行PCR扩增,并进行PCR产物的克隆与测序。[结果]通过PCR扩增获得3条特异性条带,大小分别为542、349、221 bp。在红鳍东方基因组文库中未找到与542 bp序列匹配的片段。349和221 bp序列在暗纹东方和红鳍东方中是保守的。暗纹东方与红鳍东方序列比对结果表明,碱基突变的主要方式为插入或缺失。[结论]3个扩增条带为BAFF基因相关序列的可能性较小。在鱼类生物体中很可能不存在与哺乳类、鸟类BAFF同源基因。     

Trichoderma reesei外切葡萄糖苷酶CBH Ⅰ对木糖的糖苷合成性质的研究

[目的]探讨Trichoderma reesei外切葡萄糖苷酶CBHⅠ对木糖是否有糖苷合成活性。[方法]以木糖为底物,检测了155min反应体系中还原糖含量的变化,并以GC/MS对反应产物进行定性分析。结果]在封闭的反应体系中,还原糖含量出现规律的周期性上升下[降的特征,在2条回归曲线y=3E-05x+0.7151和y=-0.0002x+0.6276之间呈波状振荡,还原糖含量振荡周期为(33.75±4.79)min,从而推断出CBHⅠ可以以木糖为底物合成非还原性产物。对非还原性产物衍生后进行GC/MS分析,产物中有以木糖为单位的非还原性二糖存在。[结论]CBHⅠ对木糖有糖苷合成活性,这扩大了其在糖苷合成中底物的应用范围。     

富营养化浅水湖泊蓝藻的种群结构和多样性研究

比较研究不同富营养化浅水湖泊中蓝藻种群结构和多样性,对于认识蓝藻水华的区域分布特征具有重要的生态和环境意义。于2009年7月在富营养化严重的滇池、巢湖和太湖各选取4个采样点,采用16S-23SrRNA基因间隔区（Internaltranscribedspacer,ITS）序列作为生物标记,通过末端限制性片段长度多态性技术（Terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP）分析蓝藻种群结构和多样性。实验共得到36个不同的末端限制性酶切片段（Terminal restriction fragment,T-RF）,反映3个湖泊中蓝藻种群具有丰富的基因多样性。T-RFLP聚类分析结果表明,在所研究的湖泊中蓝藻种群结构存在空间差异性,其中滇池和巢湖间蓝藻种群结构更为相似。环境因子与蓝藻种群的多元统计分析表明,正磷酸盐（POa-P）和pH与附着细菌样品蓝藻种群结构动态变化具有显著的相关性（P〈0．05）,电导率（Conductivity）和总有机碳（TOC）与浮游细菌样品蓝藻种群结构动态变化具有显著的相关性（P〈0．05）。因此,不同湖泊蓝藻水华的基因型和驱动因子存在差异。     

富营养化浅水湖泊蓝藻的种群结构和多样性研究

比较研究不同富营养化浅水湖泊中蓝藻种群结构和多样性,对于认识蓝藻水华的区域分布特征具有重要的生态和环境意义.于2009年7月在富营养化严重的滇池、巢湖和太湖各选取4个采样点,采用16S～23S rRNA基因间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列作为生物标记,通过末端限制性片段长度多态性技术(Terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)分析蓝藻种群结构和多样性.实验共得到36个不同的末端限制性酶切片段(Terminal restriction fragment,T-RF),反映3个湖泊中蓝藻种群具有丰富的基因多样性.T-RFLP聚类分析结果表明,在所研究的湖泊中蓝藻种群结构存在空间差异性,其中滇池和巢湖间蓝藻种群结构更为相似.环境因子与蓝藻种群的多元统计分析表明,正磷酸盐(PO4-P)和pH与附着细菌样品蓝藻种群结构动态变化具有显著的相关性(P＜0.05),电导率(Conductivity)和总有机碳(TOC)与浮游细菌样品蓝藻种群结构动态变化具有显著的相关性(P＜0.05).因此,不同湖泊蓝藻水华的基因型和驱动因子存在差异.     

米酒糟是有价值的对虾饵料蛋白源

<正> 据报道,酵母作为对虾饵料蛋白源优于鳀鱼粉和豆饼等植物蛋白源,而黄酒酿造业的下脚料——米酒糟富含酵母及其它微生物菌体蛋白,且排放量大,价格低廉.为此,探讨米酒糟的利用是很有价值的。 1.试验方法和材料米酒糟采用江苏如东酒厂生产黄酒的下脚料,其原料由全大米组成,含水量约50％～60％,使用时晒干或烘干。其干物质营养成分(％)为:粗蛋白55.5,粗脂肪13.8,粗纤维0.93,无氮浸出物28.5,粗灰分1.3,钙0.011,磷0.061。其氨基酸     

牛分支杆菌MPB70和CFP10-ESAT6基因的表达与检测

以牛分支杆菌染色体DNA为模板,分别以MPB70、CFP10-ESAT6融合蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约600 bp的DNA片段,并将其克隆入PQE30质粒,构建出原核表达载体PQE30-MPB70,PQE30-CFP10-ESAT6.将质粒转化至感受态DH5α中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见相应外源蛋白带.纯化蛋白后作为包被抗原建立ELISA方法,为进一步研究牛结核病诊断方法奠定基础.