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体外筛选对鸡具有免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸 总被引:6,自引:1,他引:6
分别用有丝分裂原和CpG寡脱氧核苷酸(CpG ODN)对SPF鸡全血,经低速离心分离的外周血单个核细胞(PBMC)和脾脏细胞,用淋巴细胞分离液分离的PBMC和脾脏细胞进行刺激,用^3H-TdR掺入法测定并比较上述鸡免疫细胞在不同培养温度和细胞浓度下的转化效果,从而建立了适用于大批量筛选对鸡具有免疫刺激活性CpG ODN的淋巴细胞转化方法。进一步用该方法筛选自行设计合成的38条ODN.结果表明,用低速离心法分离的鸡PBMC,在细胞含量为10^7mL^-1、37℃、5%CO2条件下,经CpG ODN刺激64~66h后,可以得到稳定的高效转化;不含CpG模体的ODN不具有免疫刺激活性;CpG ODN 10、11和14具有最佳的免疫刺激活性,刺激指数大于10。 相似文献
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猪肺炎支原体黏附因子基因R1R2区的克隆及表达 总被引:4,自引:0,他引:4
根据GenBank登录的猪肺炎支原体232株P97基因和J株黏附因子基因设计了1对引物,以我国猪肺炎支原体Z株(强毒株)基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增了该株黏附因子基因的部分序列。经序列分析后,重新设计了1对带有EcoRI和HindⅢ酶切位点的引物,并经引物的定点突变,PCR扩增了Z株黏附因子的R1R2区。扩增产物经双酶切后克隆到表达载体pET-32(a) 中。该重组质粒经酶切鉴定后,将其具有正确阅读框架的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,37℃下经IPTG诱导表达,得到相对分子质量约29000的融合蛋白,表达量约为11%。 相似文献
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猪烈性传染病是规模化猪场烈性传染病防制的重点,由于猪气喘病、蓝耳病、猪圆环病毒感染、副猪嗜血杆菌感染在大型规模化猪场广泛存在,猪烈性传染病的防制面临新的难题。本研究提出猪烈性传染病动态控制体系的新思路,通过在规模化猪场建立疫病监测系统、预防系统(包括免疫技术、生物安全技术、药物控制技术)、净化系统,通过病原调查、免疫监测和预防系统使猪场构成封闭系统,对猪场几十个相关关键点的动态控制,使猪烈性传染病疫情在警戒阶段和违和阶段前得到控制,始终使猪群健康标准保持在安全临界线以上,将猪烈性传染病疫情的危险隐患控制在萌芽状态,保持大群的健康。 相似文献
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猪肺炎支原体显色原位杂交研究方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
为建立猪肺炎支原体(Mhp)显色原位杂交(CISH)定位检测方法,本研究利用地高辛标记的Mhp P36核酸探针和DAB/H2O2显色系统,对人工Mhp感染组、自然感染组和健康对照组的实验猪肺组织样品和临床样品进行显色原位杂交检测.结果显示,设计的地高辛标记探针针对Mhp具有特异性,而与其他的猪病原菌无交叉反应;检测结果可以通过显微镜观测到Mhp定位在支气管/细支气管黏膜表面.人工感染组、自然感染组和健康对照组的CISH结果与PCR检测结果一致,临床样品的CISH检测结果低于PCR检测结果.本研究建立的Mhp显色原位杂交法是一种集直观和敏感为一体的检测方法,可以用于Mhp的定位检测和致病机理研究. 相似文献
18.
为摸清猪肺炎支原体的颜色变化单位(CCU)测定是否受试验相关因素的影响,通过不同培养体系、不同种类的容器、不同的稀释方法测定猪肺炎支原体的CCU,观察培养基的变色情况,最终通过测定各组猪肺炎支原体的CCU来分析不同因素对猪肺炎支原体培养滴度的影响。结果显示,利用不同培养体系、不同容器及不同的稀释方法测定猪肺炎支原体的CCU,其结果差异均不显著(P>0.05)。该研究可为今后支原体的CCU测定提供参考。 相似文献
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对罗斯鸡和 S P F来航鸡用鸡毒支原体强毒攻击时,以鸡致病性大肠杆菌 O7 8 血清型菌株 16 小时培养物 02m l/羽皮下注射作人工诱导发病,试验鸡出现明显气囊病变,初步建立了以鸡致病性大肠杆菌为诱导因子的 M G 野外环境人工发病的动物模型。以此开放模型检测 S P F来航鸡以鸡毒支原体 S6 克隆致弱株 F156 代培养物点眼、滴鼻免疫后 30 日、60 日龄的攻毒保护率,结果保护率分别达 90% (18/20)、84% (42/50),而对照组为 30% (6/20)、50% (15/30),中期免疫效果证明,鸡毒支原体 S6 克隆致弱株有良好的免疫保护作用。 相似文献
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