甘薯贮藏期主要病害及其防治方法

我国是世界最大的甘薯生产国,常年甘薯种植面积500万hm<'2>,占世界甘薯种植总面积的57.3%,收获产量占世界甘薯总产80%.甘薯不仅是传统的粮食作物,随着其综合开发利用的深入,已发展成为用途广泛、高产高效的经济作物.在甘薯的生产、利用过程中,安全贮藏是稳产、增效的关键.     

CRISPR/Cas9介导的绵羊示踪脐带间充质干细胞系的建立

【目的】利用CRISPR/Cas9技术建立绵羊示踪脐带间充质干细胞系,为间充质干细胞的临床治疗与分化机制研究奠定基础。【方法】根据绵羊ROSA26的基因组序列,利用在线工具ZiFiT Targeter Version 4.2设计合成3对引物,利用点突变法,以px330质粒为模板分别进行PCR,DpnⅠ去除质粒DNA后,PCR产物自身环化,酶切测序鉴定,构建以绵羊Rosa26为靶标基因的sgRNA/Cas9载体,构建的质粒含Cas9和向导RNA(single-guide RNA,sgRNA) 表达盒,由U6启动子驱动表达。将上述载体分别利用脂质体转染绵羊脐带间充质干细胞(sUMSCs),提取其基因组PCR后进行T7E1酶切,琼脂糖电泳分析条带灰度以检测载体编辑活性。根据sgRNA序列在绵羊ROSA26靶位点的上下游设计并合成左、右同源臂扩增引物,提取绵羊全基因组为模板分别进行PCR扩增得到左右同源臂,回收纯化后分别与pMD19-Simple连接,酶切测序鉴定获得左、右同源臂重组质粒。根据PCR引入的酶切位点,将左同源臂质粒和Donor表达载体DC-DON-SH02 ROSA26进行酶切连接,鉴定获得左臂重组打靶载体,使用相同方法将右同源臂质粒连接到左臂打靶载体上,鉴定获得Donor打靶载体,载体携带嘌呤霉素抗性基因和绿色荧光蛋白（GFP）报告基因。在生长良好的sUMSCs中加入不同浓度的嘌呤霉素,观察细胞存活时间,确定最佳抗性筛选浓度和时间。利用脂质体共转sgRNA/Cas9载体和Donor载体到绵羊间充质干细胞,在其ROSA26位点切割DNA双链,在DNA断裂处通过同源重组方式引入报告基因,转染48 h后进行嘌呤霉素抗性筛选,筛选结束后更换正常培养基继续培养,观察绿色荧光的表达并提取阳性细胞基因组,针对ROSA26位点设计上下游两对引物对其进行PCR检测其整合情况。【结果】（1）针对绵羊Rosa26位点设计3对PCR引物,利用点突变法将sgRNA 克隆至px330的BbsⅠ酶切位点上,成功构建sgRNA/Cas9载体px330-sgRNA1/2/3,将其分别转染sUMSCs,T7E1酶切结果表明px330-sgRNA2/3出现脱靶现象,未在靶位点发生编辑,px330-sgRNA1的编辑效率最高,约为20%;（2）基于sgRNA1,PCR法获得打靶载体的左、右同源臂,经一系列分子生物学方法先后连接到载体DC-DON-SH02 ROSA26上,经酶切和PCR鉴定,成功获得绵羊ROSA26位点的重组载体sROSA26-HA;（3）筛选得到sUMSCs最佳抗性浓度时间,利用Lipofectamine2000共转染sgRNA/Cas9载体和Donor重组载体到sUMSCs,1.5 μg·mL^-1嘌呤霉素筛选15d至对照组细胞全部死亡,获得的阳性克隆并扩大培养。显微镜下可观察到明显的绿色荧光,且与对照组相比,阳性细胞克隆的基因组PCR均检测到特异条带,表明sUMSCs的ROSA26位点发生同源重组,GFP基因被成功敲入到基因组中并能正常表达,该细胞可以用于动物疾病模型中追踪sUMSCs的去向和分化方向的研究。【结论】成功利用CRISPR/Cas9系统在sUMSCs内实现外源GFP基因的定点敲入,获得绵羊示踪脐带间充质干细胞系,为间充质干细胞进一步的临床转化奠定了基础。     

治疗青、草鱼“三瘸”的特效药—六合剂

我校2.5亩实验鱼池,1985年6月4日发生青、草鱼肠炎病、烂鳃病、赤皮病并发症。当天死青鱼3尾、草鱼5尾,第二天又死青鱼8尾、草鱼11尾,我们当即投喂六合剂药饵,第三天病情被控制,死鱼明显减少,仅死青鱼2尾、草鱼4尾,第四天到第五天停药后一直未见死鱼现象,1986年6月初我们采用六合剂药饵预防,结果也未发生“三病”和死鱼现象。由此认为,六合剂是一种防治青、草鱼“三病”的特效药物。六合剂的配方是晶体敌百虫50克,敌敌     

落叶型大丽轮枝菌T-DNA插入突变体库的构建

采用ATMT技术建立大丽轮枝菌落叶型菌株XJ2008菌株的T-DNA插入突变体文库,共获得6 043个突变体。从中随机挑选104个突变体,以野生型XJ2008菌株为参照,评价其致病性、菌落生长速率、分生孢子及微菌核的产生能力等。结果表明,有12.5%的突变体丧失产孢能力,4.8%的突变体的生长速率显著减慢,8.7%的突变体的生长速率显著加快,12.5%的突变体丧失产生微菌核的能力,47.1%的突变体的致病性显著低于野生型菌株XJ2008,且突变体2-736、2-740、2-745的病情指数分别约为野生型菌株XJ2008的0.184、0.168和0.197倍。该突变体库突变体遗传稳定性好,性状多样性丰富。     

光合细菌(PSB)和翻富(FAMP)在温室无沙养鳖中的应用研究

一般的温室养鳖存在着鳖池底质和水质容易污染的问题，净化处理费工耗能；无沙养鳖新工艺可以妥善解决这一难题。本试验通过四个处理组──有沙、无沙、无沙＋ＰＳＢ、无沙＋ＦＡＭＰ──进行对比，显示出无沙养鳖法具有节能、低耗、高产、优质等特点。光合细菌（ＰＳＢ）对改善水质，提高鳖的产量有一定作用，但在较好的水质环境条件下其作用不明显。翻富（ＦＡＭＰ）为新型饲料添加剂及水质改良剂，在本次试验中增产效果亦不明显。     

不同冰温温度对山楂果实生理及品质的影响

为延长山楂果实的保鲜期,提高果实贮藏品质,筛选适宜山楂果实冰温温度参数。在以普通冷藏(0±0.5)℃,以及果实温度为-0.4、-1.0、-1.6℃的4个不同温度的贮藏条件下,对贮藏期间‘敞口’山楂果实采后生理及品质变化进行研究。结果表明,-1.0℃的冰温处理降低了山楂果实的乙烯生成速率和最大生成量,减缓了果肉硬度、可滴定酸(TA)和维生素C(Vc)含量的下降,有效抑制了果肉中丙二醛(MDA)的积累,减轻了贮藏后期多酚氧化酶(PPO)活性的上升和酚类物质含量的减少,进而延缓了山楂果实的生理衰老进程,维持了山楂果实的良好贮藏品质;而在贮藏160天后,-1.6℃的冰温处理的山楂果实乙烯释放峰值显著增高,TA和Vc降解迅速,MDA含量显著上升,PPO活性明显上升和酚类物质含量迅速减少,加速了果实的褐变速率,生理伤害症状明显,品质劣变严重。综上所述,在-1.0℃的冰温条件下,山楂果实生理代谢被有效抑制且未出现生理伤害,贮藏效果最佳。     

葡萄贮藏保鲜技术研究进展

二氧化硫(SO_2)是目前防治灰霉菌侵染和保持葡萄果穗鲜绿度的最有效措施。鉴于SO_2残留引起的食品和环境安全隐患,近年来,有关研究人员从物理、化学、生物等方面进行了降硫或替代硫的可行性探索研究,并取得了一定成果。通过综述了近几年国内外的葡萄贮藏保鲜技术研究进展,对比分析了传统的SO_2保鲜措施和主要的SO_2替代型保鲜措施的技术原理、性能特点及研究现状,并总结出上述技术在实际应用中存在的问题,以期为今后葡萄采后保鲜的进一步研究提供理论参考。     

油桐嫁接繁殖技术的研究

本试验研究对油桐嫁接繁殖中嫁接材料的选择、嫁接方法的应用、嫁接时期的确定,影响嫁接成活率的因素以及嫁接后的科学管理等进行了研究。     

《埋地钢质管道强制电流阴极保护设计规范》中若干问题的分析

通过对《埋地钢质管道强制电流阴极保护设计规范》的学习和实践，就规范中一些参数的物理意义、计算方法等问题提出了不同看法，以供研讨，目的是为了完善规范内容，提高规范的执行能力。     

贮藏温度和包装方式对红富士苹果贮藏效果的影响

以红富士苹果为试材,分别于0℃和冰温条件下,研究了不同包装材料及保鲜剂对红富士苹果采后贮藏保鲜期间品质变化的影响。结果表明,在冰温条件下,"微孔保鲜袋+高效乙烯吸收剂"和"保鲜袋+化学吸收剂"2种贮藏方式效果最好,延缓了果肉硬度及可溶性固形物(TSS)的下降速率,贮藏8个月仍能保持良好的品质。