岷江百合生境及遗传多样性

在踏查岷江百合分布区的基础上随机选取两个阴坡与阳坡群体,设样地调查其群落特征,测定其土壤化学性质指标,并用ISSR分子标记分析两群体遗传多样性。结果表明,岷江百合生长在兰花莸、小角柱花、美丽胡枝子、黄花蒿等为优势的干旱河谷灌丛中,在垂直结构上居于灌木层片。数量上较多,但因冠副较小,群落外貌上不明显。土壤为褐土,呈弱碱性,土壤潜在肥力水平较高,但有效成分较低。阴坡土壤有效成分高于阳坡。物种水平的多态性谱带的比例为96.72%,有效等位基因数为1.5572,Shannon’s多样性指数为0.4932,平均期望杂合度为0.3276。其中阴坡群体的遗传多样性参数要高于阳坡群体。群体间遗传差异占总遗传差异的17.57%,群体内遗传差异占总遗传差异的82.43%。两个群体间的基因流为5.0660,说明两群体亲缘关系较近,而群体内遗传分化强烈,阴坡群体的遗传分化强于阳坡群体。     

百合尖孢镰刀菌鳞茎腐烂病研究进展

由尖孢镰刀菌引起的百合鳞茎腐烂病是百合生产中危害最严重的病害之一,对百合切花生产影响很大。本文综述了该病的发生规律、防治方法及病原菌的鉴定方法,总结了不同百合品系对病原菌的抗性,介绍了百合抗鳞茎腐烂病育种研究现状,并对百合抗病育种的前景进行了展望。     

宜昌百合、泸定百合核型分析

用常规压片法对重庆金佛山的宜昌百合与四川宝兴的泸定百合进行了核型分析.结果为两种染色体数目均为24,核型类型均为3B型,核型公式均为2n=2x=24=4m(2SAT) 10st(2SAT) 10t.2个种均在第1对染色体短臂上有居间随体,但另一对随体位置有差异.宜昌百合核型不对称系数80.91%,泸定百合不对称系数为78.72%.宜昌百合核型为首次报道.     

岷江百合ISSR-PCR反应体系的优化

以岷江百合为材料,对影响ISSR-PCR反应的主要参数进行优化,建立了适用于岷江百合的ISSR-PCR反应体系.20μL反应体系中,内含1×PCR buffer、1.25 mmol/L Mg2 、0.4 mmol/L dNTPs、0.6 μmol/L引物、0.5 U Taq DNA聚合酶、20ng模板DNA.扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性40 s,52.8℃退火45 s,72℃延伸1min 30s,共45个循环;最后72℃延伸8 min.该优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术开展岷江百合遗传多样性研究奠定了基础.     

杉木子叶和下胚轴的器官发生与体胚发生

以杉木实生苗的子叶和下胚轴为起始外植体,研究了基本培养基、6-BA、TDZ、苗龄等因素对器官发生和体胚发生的影响.研究结果表明：基本培养基、6-BA、TDZ及苗龄对子叶和下胚轴不定芽发生和体胚发生均产生显著影响.DCR＋6-BA 1.0mg/L＋TDZ 0.003mg/L＋NAA 0.1mg/L是子叶和下胚轴诱导不定芽发生及下胚轴诱导体胚发生的最佳培养基;DCR＋6-BA 1.0mg/L＋TDZ 0.002mg/L＋NAA 0.1mg/L对子叶诱导体胚最有效;不定芽在DCR基本培养基中可有效伸长;1/4MS＋IBA 0.2mg/L＋NAA 0.1mg/L可有效诱导不定芽生根.     

杂种鹅掌楸花粉发育过程中细胞游离Ca2+的动态变化

利用钙离子荧光探针Fluo-3/AM低温装载技术,在激光扫描共聚焦显微镜下观察杂种鹅掌楸花粉发育不同阶段细胞内游离Ca2 的分布,以其相对荧光强度的强弱来衡量细胞内游离Ca2 水平的动态变化.研究发现在初生造孢细胞中Ca2 荧光较弱,次生造孢细胞和小孢子母细胞时期Ca2 荧光增强.早期四分体小孢子细胞质中Ca2 荧光强度较强,胼胝质壁无荧光;后期细胞质中的Ca2 荧光减弱,而胼胝质壁处Ca2 荧光增强.小孢子内Ca2 分布不均匀,细胞质中的Ca2 荧光较弱,细胞壁处Ca2 荧光较强,二细胞花粉时期,细胞呈现较强的Ca2 荧光.在花药壁组织内Ca2 分布也呈现规律性的变化:造孢组织时期,花药壁组织Ca2 荧光强度在不同壁层组织中分布均匀;小孢子母细胞时期,药壁中层细胞Ca2 荧光最强,绒毡层细胞次之;单核小孢子时期,绒毡层细胞呈解体状态,Ca2 荧光最强,并保持到二核花粉时期直至绒毡层完全消失,但此时花药纤维层发育形成,表现出较强的Ca2 荧光.花药组织中Ca2 分布动态显示出Ca2 由外而内流动的迹象,而且细胞内游离Ca2 分布特征与花粉发育过程的重要转变环节密切相关.     

与亚洲百合无花粉性状相连锁的SRAP标记

百合是世界著名的五大鲜切花之一,在国内外花卉市场上十分畅销,有着显著的经济效益。但在百合的销售和消费过程中,存在一个突出的问题是花药产生的大量花粉污染花瓣和衣物。为了解决这一问题,目前主要采用手工摘除花药的方法,此法费时费力,不仅增加了切花的成本,而且也降低了百合的商品价值和观赏性。因此,市场迫切需要无花粉或少花粉的百合品种。本研究旨在通过研究亚洲百合无花粉分离群体的SRAP标记特征,筛选与无花粉性状相连锁的SRAP标记,为培育观赏性好、无花粉污染的百合新品种提供依据。试验以亚洲百合‘H08-03’(♀)与‘Pollyanna’(♂)杂交获得的F1代分离群体为试材。其中,‘Pollyanna’的花粉量正常,编号‘H08-03’的材料无花粉,F1代中有花粉子代和无花粉子代个数分别为54和51个基因型。采用L16(45)正交设计,对影响SRAP-PCR反应体系的Mg2+、d NTPs、Taq酶、引物和模板DNA等5因素进行4个水平的优化试验,结合正交直观分析和方差分析,对影响反应较大的几个因素进行单因素实验,以确定最为合适的PCR反应各因素的浓度。之后对两步退火温度分别进行单因素分析,最终确定亚洲百合SRAP-PCR最佳的反应体系。应用建立的SRAP体系,结合BSA法,针对无花粉和有花粉基因型分别混池,对该分离群体进行连锁分析,在无花粉池和有花粉池之间筛选272对SRAP引物组合,以期找出两基因池扩增存在差异条带的引物。将扩增存在差异的引物对用于群体的单株验证,验证该引物对在打开基因池后于分离群体单株间是否存在上述同样差异。若存在同样差异,对其特异片段进行回收、克隆和测序。经正交直观分析和方差分析的结果表明:Mg2+、Taq酶、模板DNA三个因素对亚洲百合SRAP-PCR反应影响较大,对其进行单因素梯度实验后,最终确定了亚洲百合SRAP-PCR最佳的反应体系为:20μL体系,模板DNA约100 ng,1×PCR Buffer,3.5 mmol·L-2Mg2+,0.6 mmol·L-2d NTPs,上下游引物各0.5μmol·L-2,Taq酶3 U,不足部分以dd H2O补足。PCR反应程序的两步最适退火温度第一步为35℃,第二步为53℃。应用建立的SRAP体系,对272对引物进行多态性筛选,最终筛选出53对扩增多态性丰富且稳定的引物对。53对引物中获得了与无花粉性状连锁的SRAP标记3个,分别是EM2/ME3、EM2/ME9和EM17/ME14。并成功对EM2/ME3标记扩增出的特异性片段进行回收、克隆和测序,得到了该片段376 bp的碱基序列。该标记可用于亚洲百合无花粉性状的早期分子辅助育种。     

百合属野生种及品种亲缘关系的ISSR分析

利用ISSR分子标记对14个百合野生种及7个栽培品种的亲缘关系进行分析.用15条引物扩增出150条谱带,均为多态谱带.UPGMA聚类分析结果将野生种基本分为2个类群,与形态分类的百合组和卷瓣组基本相符;宜昌百合与岷江百合亲缘关系较近.栽培品种分为2个类群,东方系为一个类群,麝香系与亚洲系为另一类群.麝香系与亚洲系比东方百合距卷瓣组百合亲缘关系更近.ISSR分子标记技术适合百合属植物的组间亲缘关系分析.     

麝香百合花发育基因LLGLO1在花蕾中的时空表达

 为了获得百合花发育相关的B功能基因LLGLO1在调控百合花发育过程中的重要信息,以麝香百合（Lilium longiflorum）未开放的花蕾为试材,以LLGLO1基因的特异片段为探针,应用RNA原位杂交技术,对LLGLO1基因在花发育各个阶段的时空表达动态进行了研究。结果表明,LLGLO1基因在外轮花被、内轮花被、雄蕊和心皮等4轮花器官中均有表达,但表达强度随不同的发育阶段而变化。长度2.0和3.0 cm的花蕾中LLGLO1基因的表达量明显高于0.5和1.0 cm的花蕾,说明随着花器官的发育成熟,该基因在各轮花器官中的表达量逐渐增加。