刺楸根插育苗技术

采用L9(34)正交试验法,研究促根剂种类、促根剂浓度、根穗粗度、扦插方式4个因素对春、秋2季采挖的刺楸根插生根能力的影响。结果表明:秋季采挖的根条经冬季沙藏后进行根插育苗效果更佳,选用100 mg/L NAA促根剂浸泡处理30 min,埋根横插,成活率为66.7%,生根率达53.3%。     

与亚洲百合无花粉性状相连锁的SRAP标记

百合是世界著名的五大鲜切花之一,在国内外花卉市场上十分畅销,有着显著的经济效益。但在百合的销售和消费过程中,存在一个突出的问题是花药产生的大量花粉污染花瓣和衣物。为了解决这一问题,目前主要采用手工摘除花药的方法,此法费时费力,不仅增加了切花的成本,而且也降低了百合的商品价值和观赏性。因此,市场迫切需要无花粉或少花粉的百合品种。本研究旨在通过研究亚洲百合无花粉分离群体的SRAP标记特征,筛选与无花粉性状相连锁的SRAP标记,为培育观赏性好、无花粉污染的百合新品种提供依据。试验以亚洲百合‘H08-03’(♀)与‘Pollyanna’(♂)杂交获得的F1代分离群体为试材。其中,‘Pollyanna’的花粉量正常,编号‘H08-03’的材料无花粉,F1代中有花粉子代和无花粉子代个数分别为54和51个基因型。采用L16(45)正交设计,对影响SRAP-PCR反应体系的Mg2+、d NTPs、Taq酶、引物和模板DNA等5因素进行4个水平的优化试验,结合正交直观分析和方差分析,对影响反应较大的几个因素进行单因素实验,以确定最为合适的PCR反应各因素的浓度。之后对两步退火温度分别进行单因素分析,最终确定亚洲百合SRAP-PCR最佳的反应体系。应用建立的SRAP体系,结合BSA法,针对无花粉和有花粉基因型分别混池,对该分离群体进行连锁分析,在无花粉池和有花粉池之间筛选272对SRAP引物组合,以期找出两基因池扩增存在差异条带的引物。将扩增存在差异的引物对用于群体的单株验证,验证该引物对在打开基因池后于分离群体单株间是否存在上述同样差异。若存在同样差异,对其特异片段进行回收、克隆和测序。经正交直观分析和方差分析的结果表明:Mg2+、Taq酶、模板DNA三个因素对亚洲百合SRAP-PCR反应影响较大,对其进行单因素梯度实验后,最终确定了亚洲百合SRAP-PCR最佳的反应体系为:20μL体系,模板DNA约100 ng,1×PCR Buffer,3.5 mmol·L-2Mg2+,0.6 mmol·L-2d NTPs,上下游引物各0.5μmol·L-2,Taq酶3 U,不足部分以dd H2O补足。PCR反应程序的两步最适退火温度第一步为35℃,第二步为53℃。应用建立的SRAP体系,对272对引物进行多态性筛选,最终筛选出53对扩增多态性丰富且稳定的引物对。53对引物中获得了与无花粉性状连锁的SRAP标记3个,分别是EM2/ME3、EM2/ME9和EM17/ME14。并成功对EM2/ME3标记扩增出的特异性片段进行回收、克隆和测序,得到了该片段376 bp的碱基序列。该标记可用于亚洲百合无花粉性状的早期分子辅助育种。     

异源三倍体百合为母本的杂交后代GISH分析

百合异源三倍体是渐渗育种的常用亲本。为了评价异源三倍体‘Royal Lace’的育种价值,采用基因组原位杂交技术分析了‘Royal Lace’及其与亚洲百合‘Pollyanna’的6个杂种后代的基因组组成。研究结果显示：‘Royal Lace’含有24条亚洲百合染色体和12条麝香百合染色体,为异源三倍体,包括1条亚洲百合重组染色体和1条麝香百合重组染色体。6个杂种后代均为非整倍体,染色体数27 ~ 32,不同杂种后代的重组染色体及重组位点存在差异,杂种后代基因组组成的不同是后代表型变异的遗传基础,因此,‘Royal Lace’是百合渐渗育种及非整倍性育种的良好亲本。