东方百合鳞茎快速增长的组培体系研究

以东方百合栽培品种‘Sorbonne’和‘Siberia’的组培苗为试验材料，研究了蔗糖、6-BA、IAA、PP333及活性炭（AC）的添加浓度对组培苗小鳞茎增重和直径生长的影响；结果表明：80g／L蔗糖浓度有利于‘Sorbonne’和‘Siberia’组培苗小鳞茎增重；6-BA浓度为0．2mg／L、IAA浓度为0．5和1．0mg／L时‘Sorbonne’和‘Siberia’组培苗小鳞茎平均直径增加最大，分别为120．7％和138．0％；PP333浓度达3．2mg／L和1．6mg／L时，‘Sorbonne’和‘Siberia’的组培苗小鳞茎平均直径增加最大，分别达到505．7％和211．3％；AC浓度达到2．0g／L时‘Sorbonne’试管苗小鳞茎平均直径增加最大，浓度达到4．0g／L‘Siberia’组培苗小鳞茎平均直径增加最大，分别为194．7％和220．3％。     

不同因素对农杆菌介导的杉木转化效率的影响

以杉木试管苗靠近茎尖的茎段为受体材料,研究6个影响杉木遗传转化效果的因素,初步确定杉木茎段较为合适的转化体系为:预培养1～3 d,OD600 nm为0.1～0.4的菌液浸染10～15 min,共培养3～5 d,共培养基附加乙酰丁香酮(AS)80 μmol·L-1,共培养后延迟3 d筛选.在初次筛选培养基上共得到186个卡那霉素(Km)抗性芽,在二次筛选培养基上获得39个Km抗性芽.PCR检测有2个Km抗性芽呈稳定阳性,初步证明外源天麻抗真菌蛋白(GAFP)基因已整合到这2个Km抗性芽的基因组DNA中.     

宜兴百合组培快繁体系的建立

以宜兴百合鳞片为外植体进行试管培养,经试验筛选出各培养阶段适宜的培养基为:(1)小鳞茎诱导,MS 6-BA 0.5mg/L NAA 1mg/L KT 0.2mg/L;(2)分化及继代,MS 6-BA 0.2mg/L NAA 0.5mg/L;(3)生根,MS PP3331 mg/L NAA 0.1 mg/L。     

马尾松体细胞胚胎发生相关基因PmSERKl的克隆与表达分析

体细胞胚胎发生不仅是植物微繁、种质保存的有效手段，同时也是研究高等植物胚胎发育和遗传转化的模式系统之一。本研究从马尾松未成熟合子胚诱导的胚性细胞团中成功克隆了体胚发生受体激酶基因PmSERK1。该基因全长2303bp，包含完整的开放阅读框，编码626个氨基酸，其蛋白分子量约为69kD。序列分析发现PmSERK1与其它植物的SERK基因高度同源。系统进化树重建表明，PmSERK1与已知参与体胚发生的关键SERK基因聚为一类，如MtSERK1、CuSERK1、AtSERK，和DcSERK。表达分析显示：PmSERK1在主要的组织器官（根、茎、针叶等）略有表达；但在诱导培养的非胚性愈伤中没有检测到表达，而在经继代培养的胚性愈伤中表达很高且逐渐增加，且在培养20d时达到最高。另外，在再生的子叶胚中，PmSERK1的表达量也很高。综上所述表明，PmSERK1是与体胚发生相关的关键SERK基因的直系同源基因，可以作为愈伤组织胚性的标记基因。     

百合辐射突变体的ISSR鉴定技术研究

用60Co～γ射线辐射麝香百合WhiteFox的鳞片获得变异后代,从分子水平上检测60Co～γ射线对WhiteFox遗传物质的影响。运用ISSR分子标记方法对12株变异株和对照进行分析研究,从20条引物中筛选出5条具有多态性的引物进行PCR扩增,共检测到29个位点,其中多态位点18个,占62.1%。结果表明:经过60Co～γ射线辐射获得的变异百合在DNA水平上存在多态性差异。     

细叶百合根尖染色体C-带分析

采用改良的HBSG方法对细叶百合(Lilium pumiluDC.Fish)进行Giemsa C-研究。结果表明:细叶百合的染色体数目为2n=2x=24;除B、F、J染色体外,其余每条染色体上都显示出特征带,带纹的深浅差异明显,带型公式为:2n=24=8CI+8I++2I+T++6;细叶百合的带纹集中在着丝点区域和长臂上,短臂上没有带纹。L染色体为端部着丝点染色体。     

百合总RNA提取方法的比较和分析

以卷丹、麝香百合品种富田和离体鲜切花的花蕾为材料，比较Trizol法、异硫氰酸胍法、CTAB改进法和SDS改进法提取总RNA的效果，结果表明，SDS改进法能有效去除多糖，提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍，OD260/OD280值介于1．7-2．2之间，卷丹RNA得率为132．52μg／g，富田RNA得率为186．88μg／g。进一步用SDS改进法分别提取富田外轮花瓣、内轮花瓣、雄蕊、雌蕊、叶和茎的RNA，同样可以获得完整的纯度高的RNA，其中28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍，OD260／0D280值介于1．7～2．2之间，说明此方法适用于百合各个组织RNA的提取。经RT—PCR获得了花发育基因的特异性条带，说明用SDS改进法从百合中提取的RNA质量好、产率高、完整性强，完全适合于百合进一步的分子生物学研究。     

三个卷瓣组百合的根尖染色体C-带比较

利用染色体组型分析进行种和种质资源的识别是一种有效的手段.本文利用Gemisa C-分带方法对三个卷班组百合南川百合(L.rosthornii)、川百合(L.davidii)和金佛山百合(L.jinfushanense)根尖染色体进行了研究.南川百合的带型公式为:2n=24=10C 8CI 2I 2N 2,川百合的带型公式为:2n=24=4C 2CI 2I 6I 2I 2I T 2T 2CNT 2,金佛山百合的带型公式为:2n=24=4C 4CI 4CI 4L 2I 2I 2I T 2.通过GemisaC-分带方法不但可以很好的区分各种的各条染色体,而且可以很好的区分这三个卷瓣组野生百合.     

杉木木质化过程特异表达基因文库的构建与分析

研究木质部木质化过程及其生物学特性对于了解木本植物水分和矿物质的吸收及运输机制、木材形成的遗传控制、改良材性及提高木材生长量具有十分重要的意义。为了获得杉木木质化过程中特异表达的基因,本研究利用抑制差减杂交技术,以杉木突变体独干杉无性系为测试方(Tester),正常的句容0号无性系为驱动方(Driver),构建了正向和反向两个差减文库,分别获得了618和409个克隆。利用通用引物T7和SP6进行PCR及EcoRⅠ酶切鉴定文库重组子,结果证明所构建的文库符合要求,具有代表性。该文库的成功构建为获得杉木木质化过程中特异表达的基因及深入了解木本植物木质化的机理奠定了基础。     

东方百合L_sCCR1基因的克隆及表达分析

百合茎秆的挺度直接关系到百合花采收后的货架寿命等重要商品性状,而这些商品性状与植物茎秆中的木质素的含量高低有关.本文应用RLM-RACE技术,从东方百合索蚌植株中克隆了木质素合成相关基因一肉桂酰辅酶A还原酶,定名为LsCCR1.该基因cDNA全长为1 499 bp,包括完整的阅读框,编码388个氨基酸.多重比对分析发现百合LsCCR1基因与其他植物上已经发现的CCR基因同源性多介于55%～66%之间.利用半定量PCR检测LsCCR1基因在百合不同组织中的表达差异,结果显示LsCCR1基因主要在百合的茎秆中表达,根部次之,叶片、鳞茎及花蕾中表达量较少,其表达模式与拟南芥、桉树及大麦中CCR基因的表达模式类似.