鸭疫里氏杆菌形态特征的电镜观察

自鸭传染性浆膜炎的病死鸭中分离鉴定的鸭疫里氏杆菌(RA)Ⅰ、Ⅱ型两个菌株，用负染法和超薄切片法制备样品，于透射电镜下进行观察。结果观察到约占1／3的RA具有特殊的形态结构：在细菌的顶端或侧面有1～2个与菌体相连的芽状赘生物，有的也能从菌体上脱落下来。它在超薄切片中的大小约为菌体的1／3～1／5，能观察到其内部也具有类似菌体内部的结构。且具有类似菌体的“细胞壁”，类似于核体部分的结构位于“细胞壁”的一侧。而用相同的方法制作的鸭大肠杆菌(E．cozi)对照样品，却见不到这种特殊的形态结构。说明这种形态特征可能是RA特有的。     

山羊生精上皮细胞分离研究

采用四种酶法分离二月龄关中奶山羊生精上皮细胞,A组:胶原酶Ⅳ;B组:胶原酶Ⅳ +透明质酸酶;C组:胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶与EDTA;D组:胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶与EDTA+DnaseI。结果二月龄羔羊曲细精管主要包含Sertoli细胞、精原细胞和管周排列的肌样细胞。每 200mg睾丸实质收获生精上皮细胞总数 (×105 )A,B,C,D组分别为 6. 91±0. 68, 6. 67±0. 80, 5. 94±0. 81, 5. 74±0. 82;细胞存活率 (% )分别为 76. 82±3. 80, 75. 96±1. 61, 94. 19±2. 89, 92. 32±1. 97;圆形细胞比率 (% )分别为 17. 54±1. 68, 16. 70±1. 46, 23. 64±1. 72, 22. 90±2. 38;细胞贴壁率(% )分别为 5. 93±0. 36, 5. 81±0. 54, 26. 94±1. 54, 25. 00±1. 74。C,D组不但组织块解离效果及细胞离散程度均较A,B好,且原代培养细胞团块数少。多重比较C,D组显著优于A,B组 (P<0.05);C组与D组差异不显著(P>0.05),但与A,B组比较细胞存活率、圆形细胞比率及贴壁率差异极显著(P<0.01)。结论认为C组是较简单有效的山羊生精上皮细胞分离酶组合。     

鸡新城疫强毒株的分离与鉴定

从山东某鸡场的产蛋下降而无其他典型ND症状的高抗体蛋鸡群中分离到一株病毒。经过试验鉴定．该分离株具有血凝性，且可被ND标准阳性血清所抑制和中和，不能被AI（H5亚型与H9亚型）标准阳性血清抑制；该病毒的最小致死量病毒致死鸡胚的平均时间（MDT）为50．4，1日龄SPF鸡脑内接种分离病毒致病指数（ICPI）为1．85，6周龄SPF鸡静脉接种致病指数（WPI）为2．42，回归试验鸡出现了新城疫症状和病变，该病毒株确定为新城疫病毒强毒型，并暂命名为ShD-dzh04。     

2000～2004年间广西新城疫病毒强毒株的分离与鉴定

近年来从广西不同地区规模化鸡场的13个肉鸡群病死鸡中分离到13株有血凝性的病毒,这13株病毒的血凝性均能被新城疫标准阳性血清抑制,经过血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验和RT-PCR检测结果确定为新城疫病毒.13株病毒的生物学特性测定实验结果证明该13株病毒均为新城疫病毒强毒株.     

血清1、2、4、5型鸭疫里默氏杆菌的RAPD

以37℃摇震培养舜口烛缸厌氧培养，从12种培养基中选择出鸭疫里默氏杆茼的最优培养基和培养条件。以血清1、2、4、5型的鸭疫里默氏杆菌代表株A1、A2、A3、A4为研究对象，培养增殖后分别提取基因组DNA，利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术，对其基因组进行了DNA分析。从20条随机引物中筛选出8条随机引物，这8条引物对4种血清型的鸭疫里默氏杆菌的扩增图谱有较好的多态性，可作为分子标记鉴别4种不同血清型的鸭疫里默氏杆菌，同时还筛选出能在4个血清型的鸭疫里默氏杆菌代表株均出现相同的特征条带，而对照茼大肠杆菌、沙门氏茼无该条带的随机引物，从而为鸭疫里默氏杆菌病的分子诊断打下了一定基础。     

黑木耳简单快速组织分离新法

利用酒精、镊子对黑木耳耳片进行组织分离,方法方便、快捷,分离成功率100%。     

贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定、毒力基因检测及耐药性分析

为了解贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA）的流行血清型、毒力和耐药情况，本试验从贵州省三穗县6个规模养鸭场临床疑似RA感染的病鸭体内分离出6株分离菌，对病原菌进行分离鉴定、毒力基因检测和耐药性分析。细菌分离鉴定结果显示，分离菌在巧克力琼脂培养基上长出表面光滑、圆形半透明的滴状菌落；革兰氏染色呈阴性短小杆菌，瑞氏染色呈两极浓染；分离菌均不具运动性，尿素、触酶和氧化酶试验均为阳性，符合RA生化特性，将6株分离菌分别命名为SS-RA1~SS-RA6；6株分离菌的16S rRNA基因序列与NCBI上RA参考菌株的基因序列相似性≥98%，说明6株分离菌均是RA；SS-RA1~SS-RA4为血清2型且含有8种毒力基因（OmpA、CAMP、wza、AS87_04050、Fur、SIP、TbdR1和luxE基因），SS-RA5和SS-RA6为血清11型，缺失AS87_04050基因，仅含有上述其余7种毒力基因；动物回归试验结果显示，攻毒组雏鸭均全部死亡，对照组雏鸭未表现明显临床症状，表明6株分离菌对雏鸭均有致病力；药敏试验结果显示，6株分离菌仅对羧苄西林、哌拉西林、头孢他啶、头孢氨苄、头孢曲松、头孢拉定和头孢哌酮7种抗菌药物敏感，对其他13种抗菌药物均表现不同程度的耐药，对氨基糖苷类和大环内酯类抗菌药物的耐药率为100%。本试验成功分离得到6株RA，为贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌病的疫苗选择和药物防治提供理论依据。     

Analysis of Mycosporine-Like Amino Acids in Selected Algae and Cyanobacteria by Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography and a Novel MAA from the Red Alga Catenella repens

Mycosporine-like amino acids (MAAs), a group of small secondary metabolites found in algae, cyanobacteria, lichens and fungi, have become ecologically and pharmacologically relevant because of their pronounced UV-absorbing and photo-protective potential. Their analytical characterization is generally achieved by reversed phase HPLC and the compounds are often quantified based on molar extinction coefficients. As an alternative approach, in our study a fully validated hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) method is presented. It enables the precise quantification of several analytes with adequate retention times in a single run, and can be coupled directly to MS. Excellent linear correlation coefficients (R² > 0.9991) were obtained, with limit of detection (LOD) values ranging from 0.16 to 0.43 µg/mL. Furthermore, the assay was found to be accurate (recovery rates from 89.8% to 104.1%) and precise (intra-day precision: 5.6%, inter-day precision ≤6.6%). Several algae were assayed for their content of known MAAs like porphyra-334, shinorine, and palythine. Liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) data indicated a novel compound in some of them, which could be isolated from the marine species Catenella repens and structurally elucidated by nuclear magnetic resonance spectroscopy (NMR) as (E)-3-hydroxy-2-((5-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methoxy-3-((2-sulfoethyl)amino)cyclohex-2-en-1-ylidene)amino) propanoic acid, a novel MAA called catenelline.     

提高二倍体马铃薯原始栽培种原生质体分离与分裂频率的研究

为获得较高的原生质体分离和分裂频率,试验以马铃薯二倍体原始栽培种‘47-33’‘5-19’试管苗叶片为材料,进行了原生质体游离和培养的研究.结果表明:培养21d的两品系试管苗叶片均在含有2.0%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.25%离析酶,渗透压为0.35mol/L的酶解液中解离效果最好,原生质体产量分别为2.31×106个/gFW和2.52×106个/gFW;在28℃酶解温度条件下缓慢摇动14h或1h静置+13h缓慢摇动的,可促进叶片原生质体的大量释放.此外,1.0mg/L NAA+0.5mg/L 2,4-D+0.4mg/L BAP外源激素组合有利于叶片原生质体的分裂,‘47-33’‘5-19’原生质体一次分裂频率分别达到8.85%和12.56%.在0.35mol/L渗透压的液体培养基中,‘47-33’叶片原生质体分裂更早,分裂频率达13.85%.研究获得了稳定的原生质体分离体系以及较好的原生质体培养条件,为马铃薯二倍体原始栽培种的体细胞融合奠定了基础.     

一起穿山甲疫情的病原分析

为了查明一起人工养殖穿山甲疫情的致病原因,应用病毒PCR检测和细菌分离的方法对2只前后病死穿山甲进行病原学检测。病毒PCR检测结果显示,未能从肺组织中检测到流感病毒、副黏病毒和腺病毒核酸。细菌分离结果表明,从2只病死穿山甲肺中各分离到1株优势菌株。细菌的生化试验、16S rRNA基因的序列分析表明,2株分离菌株均为摩氏摩根菌。小鼠的致病试验和分离菌的药敏试验结果表明,2株分离菌对小鼠有很强的致病作用,对新霉素、壮观霉素、阿米卡星高度敏感。