绵羊卵丘-卵母细胞复合体石蜡切片技术的改良

【目的】在绵羊有腔卵泡发育过程中,多层卵丘细胞紧密包绕着卵母细胞形成卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex,COCs)特殊结构,存在于卵泡腔内。卵泡成熟后,绵羊COC从卵泡内排出,进入输卵管,等待受精。现有的卵丘-卵母细胞复合体蛋白鉴定技术,或者将包含各级卵泡的卵巢组织直接进行切片处理,或者将COCs从卵泡内分离,在完整卵丘-卵母细胞复合体水平上进行免疫染色。但这两种方法在检测绵羊有腔卵泡COCs中目的蛋白表达时,存在显著缺陷。研究旨在对常规石蜡组织切片技术进行改进,以期满足绵羊COCs蛋白鉴定需求。【方法】首先采用抽吸法从绵羊有腔卵泡内获得COCs,以石蜡包埋方式人为构建了一种可以进行切片处理的"包含多枚绵羊卵丘-卵母细胞复合体的仿组织结构"。然后以该特殊结构与健康绵羊卵巢组织为研究对象,分别采用改良与传统的石蜡组织免疫化学技术流程,检测了目的蛋白,尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)与其受体(urokinase-type plasminogen activator recepter,uPAR),在绵羊COCs中的表达情况,比较了两种技术的免疫染色效果与染色流程差异。【结果】将所构建的绵羊COCs仿组织结构与正常绵羊卵泡组织,进行石蜡组织切片处理,经切片、贴片与脱蜡等步骤,分别形成了散在分布于载玻片上的COCs薄片与包含卵泡的卵巢组织薄层(厚度5μm)。经间接免疫染色处理后,结果显示:①目的蛋白在两种结构COCs中的表达是一致的,即uPAR在绵羊卵丘与卵母细胞上都有表达,而uPA只存在于绵羊卵丘细胞中;②在绵羊COCs薄片结构中,COCs整体形态完好,卵母细胞与外围卵丘细胞层次清晰,蛋白定位清楚,染色效果良好;在卵巢薄层结构中,绵羊卵泡内壁颗粒细胞与COCs等形态结构相对完整,卵母细胞蛋白定位清楚,但是卵丘细胞层次与蛋白表达较不清晰;③与绵羊卵巢组织石蜡切片技术相比较,绵羊COCs仿组织结构石蜡切片技术,在固定、脱水、透明、浸蜡以及脱蜡等步骤的处理时间都大大缩短,例如固定处理由24h缩短为2h;由逐级脱水的10h缩短为两级脱水的1h;透明由30min缩短为10min;软蜡与硬腊浸入由原来的6h缩短为1h;由逐级脱蜡的25min缩短为两级脱蜡的10min等。【结论】改进后的COCs仿组织石蜡切片染色技术,显示更优质的免疫定位与染色效果,不仅具有COCs获得率高、卵母与卵丘细胞形态层次清晰等优点,而且显著缩短了操作时间,简化了操作流程。该技术在保留COCs结构完整的基础上,有效检测了目的蛋白在绵羊卵丘-卵母细胞复合体中的表达模式,对于探明绵羊卵泡发育与卵母细胞成熟机制,具有重要意义。     

西双版纳黄瓜多心室性状的QTL定位

【目的】西双版纳黄瓜是中国特有的黄瓜种质资源,有多心室特性。在探明西双版纳黄瓜多心室性状表现及遗传规律的基础上进行多心室QTL定位,为进一步了解其分子机理和标记辅助育种奠定基础,也为黄瓜果实性状改良提供有益参考和帮助。【方法】对‘北京截头’黄瓜（CC3,3心室）和西双版纳黄瓜（SWCC8,5心室）不同时期的子房进行石蜡切片观察;基于以‘北京截头’黄瓜和西双版纳黄瓜为亲本构建的含124个株系的F₉代RIL群体,利用已完成的遗传图谱,结合两个季节的RIL群体心室数目统计结果进行多心室QTL定位分析。【结果】石蜡切片观察发现,西双版纳黄瓜子房由5个心皮内卷构成多心室的结构,与3心室黄瓜相比,其子房横径大且胎座数量多;QTL定位分析发现5个控制多心室性状的QTL（LOD＞2.5）,分别分布在1、2、6号染色体上,其中位于1号染色体上的QTL ln1.1和ln1.3在2013年秋季、2014年春季这两季统计结果中都稳定存在,ln1.1在两季的LOD值分别为10.96和9.24,贡献率分别为39.24%和20.49%,位于标记SSR16472-SSR12070。ln1.3在两季的LOD值分别为27.31和21.45,贡献率分别为75.90%和47.11%,位于标记UW083751-SSR04278,认为这两个位点是控制多心室的主效QTL,其余位点为微效位点。ln1.1区段的遗传距离为6.3 cM,物理距离为0.97 Mb,包含159个基因。ln1.3区段的遗传距离为4.9 cM,物理距离为2.07 Mb,包含227个基因。在ln1.1和ln1.3区段内分别预测了2个调控多心室性状的基因,包括2个WD40重复蛋白基因（Csa1M071910.1和Csa1M072490.1）和2个Aux/IAA生长素应答基因(Csa1M231530.1和Csa1M207820.1)。【结论】位于1号染色体上的ln1.1和ln1.3是控制多心室性状的主效QTL。预测2个参与植物激素信号转导的基因Csa1M207820.1和Csa1M231530.1,以及2个与WD40重复蛋白相关的基因Csa1M071910.1和Csa1M072490.1为候选基因。     

鲜活黄鳝剖切装置设计与试验

针对目前鳝鳅类淡水鱼类人工剖切劳动强度大、工作效率低、安全性差等问题,该研究以黄鳝（Monopterus albus）为试验对象,基于黄鳝生活习性及鱼体特征,在黄鳝鱼体夹持受力特性分析的基础上,开展了黄鳝鱼体头尾及腹背定向和鱼体夹送剖切方法研究,设计并研制了鲜活黄鳝剖切装置。剖切装置由倾斜料斗、进鱼通道、夹持对辊、剖切刀盘等组成,其中进鱼通道长180 mm,入口处直径28 mm;夹持辊边缘为上宽下窄的锯齿状结构;剖切刀盘直径114 mm。以夹持辊直径、夹持辊初始间隙、夹持辊转速、刀盘露出高度为影响因素,以剖切可接受性评分为评价指标开展相关试验,通过单因素试验探究了各因素对黄鳝剖切效果的影响。试验结果显示,当夹持辊直径为180 mm时夹送效果较好;夹持辊初始间隙为8 mm时鱼体腹部剖面感官评分最高;夹持辊直径一定时,高转速下的夹送效果明显优于低转速;随着刀盘露出支撑面高度的增加,黄鳝腹部剖切效果的感官评分逐渐增加。正交试验结果表明：夹持辊转速为180 r/min、刀盘露出支撑面高度为22 mm、夹持辊初始间隙为8 mm时,黄鳝腹部剖切效果的感官评分最高;通用性试验结果表明：该装置能够较好...     

SO4防结蜡防腐涂料的研制与应用

介绍了以可形成高光滑度表面覆盖层的聚氨酯树脂为基料，添加有憎蜡作用的助剂等颜填料研制出的ＳＯ４防结蜡防腐涂料。从这种防腐涂料的基料选择，颜填料及溶剂分析，性能试验及现场应用等几个方面进行了研究。研究和应用试验结果表明：ＳＯ４涂料不仅具有优良的物理机械性能和耐化学介质稳定性等防腐性能，而且防结蜡效果较为明显，能阻止蜡晶在油管及抽油杆表面的吸附。     

一种高效快速的超薄切片染色方法

本文介绍了橡胶铜网夹持器的制作方法以及用该装置进行染色的具体步骤。实验证明,利用该装置一次可以染色较多的样品,而且能使样品的染色均匀、快速。     

武安国家森林公园几种树生叶状地衣显微结构观察

对采自武安国家森林公园的6种树生叶状地衣的标本,从外部形态和内部结构状况方面,进行综合研究。利用石蜡切片法对武安山区6种地衣的解剖结构进行了观察比较分析,最后运用统计学软件对相似性状进行分析得出聚类分析树状图。结果表明:6种地衣的基本结构具有相似性,均由上皮层、藻胞层、髓层、下皮层、假根组成;聚类分析表明,地衣各种之间的亲缘关系与地衣传统的分类系统相一致,能够为地衣的系统进化、分类鉴定提供理论依据。     

石蜡相变储能材料在建筑节能中的应用

简述了石蜡相变建筑材料的制备，同时从相变储能石膏板，相变储能混凝土，建筑保温隔热材料，相变蓄热地板、天花板和相变储能砂浆几个方向对石蜡相变材料在建筑节能领域上的应用进行了综述，并对该领域发展方向进行了展望．     

加工番茄离区发育过程及有无离区相关生理特性分析

以有离层和无离层品种的加工番茄为试材,采用石蜡切片技术和番红-固绿染色法对花梗进行解剖学研究,并对完全形成离层的时期(花完全开放时期)进行生理生化方面的研究.结果表明,离层是在花芽分化过程中逐步产生的,并伴随着花梗的生长而生长.在花完全开放时期,离层品种中细胞壁降解酶的活性显著高于无离层品种,而可溶性蛋白含量与酶活性呈负相关性.研究为进一步探讨离区发育机制奠定理论基础,也对生产中防止落花落果具有重要指导意义.     

管道输送系统液体弹性波防蜡防垢特性研究

考察了同田管输送系统任一截面上的速度分布，流量与压力梯度的关系，研究了高，低切变率流动中颗粒的运动规律及径向迁移理论，指出无论颗粒最初位置在何处，在高切变率流动场中颗粒都向离管轴约０．６Ｒ（半径）处的平衡位置移动，并且迁移速度随雷诺数增大而增大，根据以上理论结合管输系统流体的振动规律，研究了防垢防蜡机理。     

90.4%石蜡油EC防治棉花红蜘蛛和棉铃虫药效试验

在武穴市进行了90-4%石蜡油EC防治棉花红蜘蛛和棉铃虫药效试验.结果表明.药后1 d、3 d和7 d,用90.4%石蜡油2 034、4 068、8 136 mL·hm-2处理,对棉红蜘蛛校正防效分别为69.97%-86.10%、63.86%~84.85%和55.63%～82.09%,其中8 136mL·hm-2处理的防效优于34%哒螨灵EC:对棉铃虫校正防效分别为51.93%-75.56%、56.62%-91.10%和77.26%-100.00%.其中8136 mL·hm-2处理ld的防效低于40%毒死蜱EC.药后3d和7d高于40%毒死蜱EC.