aiiA基因原核表达载体的构建与表达

【目的】构建aiiA基因的原核表达载体,并进行诱导表达,检测aiiA蛋白的抗病性,为进一步通过转基因技术培育转aiiA基因植株奠定基础。【方法】从pMDTM19-T Vector+aiiA质粒中酶切获得aiiA基因,将其与pGEX-4T-1表达载体连接构建重组原核表达载体pGEX-4T-1+aiiA,经双酶切及测序鉴定后,进行诱导表达,并对表达产物的功能进行鉴定。【结果】双酶切与PCR检测结果表明,重组原核表达载体pGEX-4T-1+aiiA构建成功。表达条件优化结果表明,在25℃下用0.2mmol/L IPTG诱导9h,aiiA蛋白的表达量最高。aiiA重组蛋白抑菌试验结果表明,其能够降解细菌的AHLs信号分子,猝灭细菌的群体感应,明显减弱病菌的致病力。转aiiA基因尾巨桉抗性检测结果表明,转基因植株抗性明显增强,表现为发病时间延迟,病情指数降低,评价为中等抗病水平。【结论】成功构建了aiiA基因原核表达载体,其诱导表达产物能猝灭细菌的群体感应,明显减弱病菌的致病力。     

淡色库蚊XND-P450基因cDNA全长克隆及表达

【目的】克隆淡色库蚊氯菊酯抗性相关XND-P450基因,并对其进行生物信息学分析,研究其在敏感品系和抗性品系淡色库蚊中表达量的差异,为阐明XND-P450的功能和抗性机制奠定基础。【方法】依据淡色库蚊抗性品系与敏感品系差异表达的EST片段设计PCR引物,采用RACE技术克隆淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因XND-P450全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析;采用半定量PCR技术,对XND-P450基因在敏感品系和抗性品系淡色库蚊中的表达量差异进行检测。【结果】经过克隆获得长度为1 679bp的淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因XND-P450全长cDNA,编码523个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因与致倦库蚊、埃及伊蚊CYP450基因的同源性在70%以上,其编码蛋白相对分子质量为33 244.9u,理论等电点为8.10,属于不稳定的亲水蛋白,氨基酸序列与致倦库蚊及冈比亚按蚊CYP450蛋白的同源性在40%以上。半定量PCR电泳分析显示,抗性品系淡色库蚊中的XND-P450基因表达量较敏感品系高。【结论】克隆了淡色库蚊氯菊酯抗性相关XND-P450基因,该基因在抗性品系淡色库蚊中的表达量高于敏感品系,推测其与氯菊酯抗性相关。     

基因枪法介导的转KN2基因小麦的获得及鉴定

【目的】获得转KN2基因的小麦植株,为研究KN2基因对提高转基因小麦抗寒性的作用,以及为利用基因工程提高小麦抗逆性奠定基础。【方法】以弱冬性小麦品种小偃22为供试材料,通过基因枪法,用含有KN2基因的植物表达载体和筛选标记基因bar共转化小麦幼胚愈伤组织,经过除草剂(Phosphinothricin,草丁膦)筛选和愈伤组织分化获得再生植株,并对得到的再生小麦植株进行PCR检测。【结果】采用基因枪法共轰击小偃22的幼胚愈伤组织1 680个,共获得再生植株17株,移栽到花盆中成活15株;根据目标基因序列设计特异引物,对成活的小麦植株进行PCR检测,结果表明获得含有bar基因和KN2基因的转基因阳性植株分别为6株和4株,转化率分别为0.36%和0.24%,bar和KN2的共转化率为0.24%。【结论】KN2基因成功地转入到小麦品种小偃22中。     

甘蓝型油菜生物节律钟输出基因BnGI的克隆和表达分析

利用同源克隆的方法,以拟南芥GIGANTEA基因为种子序列,在甘蓝型油菜中克隆得到GI基因,命名为BnGI。序列分析结果表明:该基因编码区全长为3 516bp,编码1 171个氨基酸,与白菜GI基因序列同源性达99%,与拟南芥GI基因同源性达87%。成熟蛋白的等电点为6.59,分子量为127.15kDa,亚细胞定位预测在细胞核定位。荧光半定量检测结果表明:BnGI基因在根、茎、顶端分生组织、叶、花等中均有表达,但表达水平具有组织特异性。     

巢湖麻鸭MSTN基因单核苷酸多态性与体重和屠体性状的关联分析

应用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)的方法,检测巢湖麻鸭公母群体共144只个体MSTN基因外显子3和内含子2的SNPs位点,分析SNPs与8周龄体重、12周龄体重和屠宰性能(胸肌率、腿肌率)的关联性。结果表明,在外显子3（6375 bp）检测到G/A突变,形成3种基因型,分别为AA、AB和BB型,公鸭群体中AA型胸肌率显著高于BB型 (P<0.05);母鸭中AB型胸肌率显著高于AA型和BB型 (P<0.05), AA型腿肌率显著高于BB型(P<0.05);各基因型间体重差异不显著(P>0.05)。内含子2（5264 bp）检测到T/C突变,产生的3种基因型分别为DD、DE和EE型,各基因型间体重和屠宰性能差异均不显著(P>0.05); 合并基因型结果显示,ABDD型母鸭胸肌率显著高于AADD型(P<0.05)并且极显著高于AAEE型和BBDD型(P<0.01),ABDD型母鸭腿肌率显著高于BBDD型母鸭(P<0.05);公鸭在各周龄体重上均显著或极显著高于母鸭,但在屠宰性能上普遍显著低于母鸭。综合以上研究结果,巢湖麻鸭公鸭早期生长速度快于母鸭,母鸭ABDD基因型表现出较高的屠宰性能。     

猪THRSP基因5'调控区多位点SNP联合效率的研究

旨在分析猪THRSP基因5’调控区多位点SNP联合调控THRSP基因表达的效率。实验从猪基因组获取包含多位点SNP的目的片段,利用荧光素酶报告基因pGL3-Basic构建表达载体,检测多位点SNP 的联合启动效率,并通过实时荧光定量PCR进行THRSP基因表达验证分析。结果表明,在5个SNP位点中,TCAGA 的启动效率最高,比CTGGA的启动效率高129％,而CCAGA、CTAGA和CTGAT的启动效率较CTGGA分别低99.0%、73.2％和42.6％。TCAGA的启动效率较CCAGA高75.6％,而CCAGA比CTAGA的启动效率高96.6％;报告基因所揭示的SNP启动效率与THRSP基因实时荧光定量PCR结果一致。     

地方土猪源副猪嗜血杆菌Omp P2基因的分子鉴定 及遗传演化分析

为研究地方土猪源副猪嗜血杆菌(Hps)的分子遗传演化特性,应用PCR方法扩增淮南猪源河南分离株XY0501的Omp P2基因,并进行序列比较和遗传演化分析。结果显示,XY0501的Omp P2基因序列全长为1080bp,编码359 aa;与参考菌株的核苷酸序列同源性为96.7%~99.4%,与4型、5型和12型参考菌株的核苷酸序列同源性分别为96.9%~97.4%、96.7%~99.4%和97.1%~99.1%;基因进化树显示与血清5型参考菌株FJ685760亲缘关系最近,同源性高达99.4%。研究结果证明,该分离菌株属于血清5型;Hps可感染地方猪种并导致发病,但其来源则有待进一步研究;Omp P2基因在Hps国内优势流行血清型中高度保守,而且这种高保守性并无明显品种差异;不同地域的Hps分离菌株存在一定的遗传差异。     

重金属对秋茄生物效应的研究进展

秋茄是红树林生态系统中的重要品种,红树林湿地的重金属污染已成为影响秋茄正常生长的重要因素。许多学者在重金属对秋茄的萌发、幼苗生长、光合作用、抗氧化系统、渗透调节物质含量和基因表达等方面的影响进行了研究。本文以国内外相关文献为基础,就重金属对秋茄生物效应的研究进展进行了综述,为红树林生态系统的保护提供理论依据。     

罗氏沼虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28基因的克隆及分析

根据已公布的罗氏沼虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因序列设计一对特异性引物,从疑似患白斑病毒病的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)中提取总DNA,并以此为模板,经PCR扩增、克隆并测序后将该片段通过GenBank比对,证实为WSSV的VP28基因;与20个已公布的WSSV VP28进行同源性比较,结果显示:从中国对虾、斑节对虾、南美白对虾、日本对虾、波纹龙虾提取的病毒株聚为一类,印度对虾WSSV VP28为另一类,罗氏沼虾WSSV VP28又单独为一类。根据测序结果推测VP28蛋白的二级结构在氨基酸的7～29区间可能为跨膜螺旋区,且该区域高度保守。     

Insights into an undescribed high-elevation lake (6,170 m a.s.l.) on Volcán Llullaillaco: A physical and microbiological view

1. High elevation lakes are extreme ecosystems and serve as sentinels of various global changes.
2. An expedition to Volcán Llullaillaco in 1996 discovered an unstudied high-elevation lake (6,170 m a.s.l.) that probably was formed as a result of the past eruptive events or climatic processes such as glacial retreat in the lake basin.
3. This article describes an initial physical characterization of the lake and its microbial communities derived from two sampling expeditions in 2013 and 2016.
4. The microbial community in the lake, with an area between 1.2 and 1.4 ha and a depth of 6.8 m, was dominated by Proteobacteria, Actinobacteria and Haloarchaea. In addition, 26 bacterial isolates were identified within the genera Subtercola, Xylophilus, Rhodanobacter, Mesorhizobium and Pseudomonas.
5. Lago Llullaillaco is one of the highest recorded lakes in the world, and this study highlights the unique microbial diversity of this aquatic ecosystem and the importance of its preservation to understand the complex biological processes under polyextreme conditions.