aiiA基因原核表达载体的构建与表达

【目的】构建aiiA基因的原核表达载体,并进行诱导表达,检测aiiA蛋白的抗病性,为进一步通过转基因技术培育转aiiA基因植株奠定基础。【方法】从pMDTM19-T Vector+aiiA质粒中酶切获得aiiA基因,将其与pGEX-4T-1表达载体连接构建重组原核表达载体pGEX-4T-1+aiiA,经双酶切及测序鉴定后,进行诱导表达,并对表达产物的功能进行鉴定。【结果】双酶切与PCR检测结果表明,重组原核表达载体pGEX-4T-1+aiiA构建成功。表达条件优化结果表明,在25℃下用0.2mmol/L IPTG诱导9h,aiiA蛋白的表达量最高。aiiA重组蛋白抑菌试验结果表明,其能够降解细菌的AHLs信号分子,猝灭细菌的群体感应,明显减弱病菌的致病力。转aiiA基因尾巨桉抗性检测结果表明,转基因植株抗性明显增强,表现为发病时间延迟,病情指数降低,评价为中等抗病水平。【结论】成功构建了aiiA基因原核表达载体,其诱导表达产物能猝灭细菌的群体感应,明显减弱病菌的致病力。     

基本培养基对尾巨桉愈伤组织诱导及再生的影响

为建立尾巨桉高效再生体系,研究基本培养基对尾巨桉再生的影响,以尾巨桉优良无性系无菌苗茎段为外植体,探讨MS、SDM和SPM 3种基本培养对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化以及增殖的影响。结果表明,在添加了2 mg/L PBU和0.05 mg/LIAA的MS培养基上,茎段外植体5 d后愈伤组织诱导率达96.3%以上;将愈伤组织接种在添加1 mg/L 6-BA和0.05 mg/L NAA的MS培养基上,诱芽率达91.8%,不同基本培养基对不定芽的增殖及伸长的影响差异达到极显著水平。