新台糖16号宿根试3验小结

新台糖16号宿根试验是在新植品比的基础上进行．新植蔗品比于1997年3月1日收获。人工用小锄低砍，甘蔗收获后2～3天，把田间蔗叶隔行堆放，然后人工用锄开垅松蔸，施放基肥，每666．7m^2放国产复混肥100公斤，并适当盖土。天气转暖后，宿根蔗陆续发株出土。于5月21日进行一次发株调查，以后松土除草，5、6、7月追肥。由于主持试验的人员工作较忙，施肥没有详细记录，田间调查也停止进行．宿根试验当作一般生产，田间工作按一般生产管理水平进行。     

circADAMTS16的表达谱分析及其对牛脂肪细胞分化的影响

旨在探究 circADAMTS16在牛不同组织和前体脂肪细胞中的表达水平及其对牛脂肪细胞分化的影响，为进一步研究circRNA在细胞分化和脂肪组织发育过程中的调控作用提供依据。采用组织块法分离培养牛原代前体脂肪细胞并诱导分化，模拟牛脂肪组织生长发育过程；通过qRT-PCR检测 circADAMTS16在牛不同组织（心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脂肪）和脂肪细胞分化不同阶段（0 d、2 d、4 d、8 d、10 d）的表达水平；构建 circADAMTS16的过表达载体（pCD2.1- circADAMTS16），设计合成 circADAMTS16的小干扰RNA （si- circADAMTS16），采用（Lipofectamine3000）转染试剂将pCD2.1- circADAMTS16和si- circADAMTS16转染牛前体脂肪细胞，利用qRT-PCR法检测转染效果，同时检测脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα和 C/EBPβ的表达量变化，并进行油红O染色，综合分析干扰和过表达 circADAMTS16对牛脂肪细胞分化的影响。结果如下：①qRT-PCR检测结果表明 circADAMTS16在心脏中表达量最高，肝脏次之，脾最低；②在牛原代前体脂肪细胞分化过程中， circADAMTS16在第2天显著高表达，随后逐渐降低，在第8天时达到最低。③在牛前体脂肪细胞中过表达circADAMTST16后，脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ的表达量显著下降；油红O染色结果显示，过表达后脂滴形成数量明显少于对照组；而干扰 circADAMTS16表达后，脂肪分化标志基因PPARγ和C/EBPα表达量显著上升。综上所述， circADAMTS16对牛原代前体脂肪细胞的分化过程具有显著的调控作用，过表达 circADAMTST16可抑制牛原代前体脂肪细胞分化进程，而干扰 circADAMTS16表达可以促进牛原代前体脂肪细胞分化进程，探明 circADAMTS16对牛原代前体脂肪细胞分化的具体调控作用。     

生草对关中地区有机猕猴桃园土壤养分及细菌群落的影响

为探究不同生草模式对关中地区有机猕猴桃园土壤养分及细菌群落的影响,试验设置多年生黑麦草+毛苕子（Mode 1）、多年生黑麦草+草木樨（Mode 2）、多年生黑麦草+白三叶（Mode 3）及鼠茅草（Mode 4）,以自然生草处理为对照（CK）,观察草种生长特性、研究生草对果园耕层（0~20 cm）土壤养分影响,采用高通量测序法分析细菌群落结构。结果表明：鼠茅草越冬率最高,样地杂草株数最少。人工生草较自然生草有机质提高了6.46%~38.63%,以多年生黑麦草+毛苕子效果更为明显,且该处理提高土壤脲酶、蔗糖酶和碱性磷酸酶活性最为显著,分别为3.37、44.17和3.46 mg·d^-1·g^-1。同时,与自然生草相比,多年生黑麦草+毛苕子、多年生黑麦草+草木樨和多年生黑麦草+白三叶提高了土壤细菌群落的丰富度和多样性,多年生黑麦草+毛苕子存在最多差异显著的细菌分支。综上,关中地区有机猕猴桃园种植多年生黑麦草+毛苕子在一定程度上有助于提高土壤有机质及养分含量,改善土壤微生态环境。     

基于16S rDNA测序分析腹腔注射苦参碱的昆明小鼠肠道菌群结构

旨在通过16S rDNA测序技术分析腹腔注射苦参碱的昆明小鼠肠道菌群的结构。本研究将20只昆明小鼠随机分为2组,分别是苦参碱组(MT组)和阴性对照组(NC组),连续腹腔给药5 d,每天给药2次,收集各组粪便和各肠段组织,进行β多样性、Lefse及Metastats分析,qPCR检测差异菌种在各肠段的mRNA表达量,通过KEGG分析肠道菌群变化导致的代谢途径差异。稀释曲线结果显示,所测样本数据足以反映样品中物种多样性;β多样性分析结果显示,苦参碱可以调节肠道菌群的结构,Lefse及Metastats分析结果均显示,苦参碱显著增加了拟杆菌门(Bacteroidetes)、拟杆菌目(Bacteroidales)、Muribaculaceae、益生菌嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的丰度,而显著减少了厚壁菌门(Firmicutes)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)和脱硫弧菌属(Desulfovibrio)的丰度。与Lefse及Metastats分析结果一致,qPCR结果显示苦参碱组小鼠粪便中嗜酸乳杆菌含量增加。同时,苦参碱可以增强嗜酸乳杆菌在各肠段的定植。通过KEGG分析发现,NC与MT组之间在聚糖的生物合成与代谢、运输与分解代谢等代谢途径存在显著差异。本研究结果表明,腹腔注射苦参碱可以显著改变昆明小鼠肠道菌群的结构,增加有益菌嗜酸乳杆菌在肠道中的定植,并造成了聚糖生物合成与代谢、运输与分解代谢等代谢途径的差异,为进一步揭示苦参碱发挥药效作用的机理奠定了基础。     

Isolation,Identification, 16S rRNA Gene Sequencing and Genetic Evolution Analysis of Aeromonas aeruginosa from Duck

【Objective】 The experiment was aimed to study the pathogenic bacteria of acute death of ducklings in a duck farm in Henan province and its phylogenetic status.【Method】 The liver and spleen of dead ducks in the diseased duck farm were collected.The bacterial morphology, Gram-staining, biochemical characteristics, sequence analysis of 16S rRNA gene, drug sensitivity test and pathogenicity test were carried out.【Results】 The isolated bacteria grew on blood agar medium with smooth, convex, milky white and α-hemolytic Gram-positive cocci.Biochemical test results showed that the isolated bacteria were positive for maltose, sucrose, raffinose, nitrate reduction reaction, MP-VP test, urea, lysine decarboxylase, ornithine decarboxylase and aescin, and negative for xylose, lactose, glucose, sorbitol, hydrogen sulfide, citrate, peptone, mannitol, phenylalanine and methyl red.The results of 16S rRNA gene sequencing and BLAST comparison results showed that the 16S rRNA gene sequence of the isolated strain was 94.8%-99.9% similar to that of Aerococcus viridans published on NCBI, and the similarity with strains Mnlv1, Mnlv2 and W66 was the highest, up to 99.9%.The similarity with strain GXBl-1 was the lowest, which was 94.8%.Phylogenetic tree analysis showed that the isolated bacteria belonged to the same genus and group on the same branch as strains of Aerococcus viridans FL09, 15MS and Mnlv2 etc., and had the closest genetic relationship with FL09.The results of drug sensitivity showed that the isolated strain was sensitive to fosfomycin, ampicillin and amoxicillin, moderately sensitive to penicillin, neomycin and amikacin, it was resistant to rifampicin, neomycin, bacitracin, erythromycin and enrofloxacin.The results of pathogenicity test showed that the strain was lethal and increased with the increase of inoculation concentration.【Conclusion】 This study determined that the pathogen causing the acute death of ducklings in a duck farm in Henan province was Aerococcus viridans, which provided a reference basis for clinical diagnosis and treatment of the diseases caused by this bacteria.     

竹鼠肠道中厌氧纤维素降解菌的分离与鉴定

本试验旨在从竹鼠肠道中分离厌氧纤维素降解菌并鉴定。取中华竹鼠盲肠内容物稀释,采用含2种不同纤维素[微晶纤维素(MCC)和羧甲基纤维素钠(CMC-Na)]的培养基在厌氧条件下对纤维素降解菌进行初筛,后又经以纤维二糖为唯一碳源的培养基的多次复筛,选出的菌株进行经形态学和分子生物学的鉴定。结果表明:经过初筛和复筛,筛选出了2株厌氧纤维素降解菌。初筛培养基采用MCC和CMC-Na最终筛选出的2株纤维素降解菌的纤维素酶活力分别为6.599和5.268U/m L。菌株经PCR鉴定、测序,用所得序列构建系统发育树,得出这2株菌与酪酸梭状芽孢杆菌(Clostridium butyricum)具有很高的同源性,达99%,二者均属于梭菌属(Clostridium)。本试验从竹鼠盲肠中成功筛选出2株纤维素降解菌,经鉴定确定属于梭菌属。     

仔猪雷极氏普罗菲登斯菌的分离鉴定及系统进化分析

为了解猪雷极氏普罗菲登斯菌(P.rettgeri)的生物学特性、致病性及16SrRNA基因系统进化关系,从发生严重腹泻、血便的哺乳仔猪群的内脏器官中分离到1株病原菌,根据形态特征、培养特性、生化特性、16SrRNA基因序列分析鉴定为P.rettgeri。小鼠攻毒试验证实,该分离菌株对试验小鼠有较强致病力,哺乳仔猪回归试验可复制出与临床上相似的典型症状,并从发病死亡小鼠及哺乳仔猪中分离到攻毒菌株。系统进化分析表明,分离菌株与雷极氏普罗菲登斯菌系统进化关系最为密切,其16SrRNA基因序列与雷极氏普罗菲登斯菌代表菌株的同源性在97.3%~99.6%之间。药敏试验结果表明,分离菌株对头孢哌酮钠、头孢噻肟钠、头孢曲松钠、头孢唑啉、头孢呋肟、头孢吡肟、阿莫西林、链霉素、氨曲南、诺氟沙星、左氟沙星、恩诺沙星、卡那霉素、氨苄青霉素、米诺环素、链霉素、阿米卡星等多数药物敏感。首次报道了雷极氏普罗菲登斯菌可以引起哺乳仔猪严重腹泻,提示在仔猪腹泻中应注意该菌感染的诊断、监测和防控。     

肺炎克雷伯氏菌强毒株的分离鉴定及16-23SrRNAITS序列分析

为确诊疑似仔猪肺炎克雷伯氏菌(K.pneumonia)感染,并研究其病原的致病性、耐药性、16-23SrRNA ITS系统进化特征,本研究从云南因肺炎、腹泻而大量死亡的仔猪中分离到1株革兰氏阴性短粗杆菌,命名为KP14013,对其进行生化鉴定、16SrRNA鉴定,研究其对小白鼠和仔猪的致病性,并对其16-23SrRNA ITS基因进行测序和遗传进化分析。结果显示,KP14013分离株生化特征与肺炎克雷伯氏菌相符,其16SrRNA与GenBank中23株肺炎克雷伯氏菌代表株之间的同源性均为99%,将KP14013鉴定为肺炎克雷伯氏菌。KP14013对小白鼠半数致死量(LD50)为3×101.8 CFU,腹腔注射3×108 CFU可使仔猪100%致死。16-23SrRNA ITS系统进化关系结果表明,KP14013与GenBank中收录的15株肺炎克雷伯氏菌形成进化树的一个分支,属于同一个亚群,它们之间的核苷酸同源性为98.4%~99.2%。本研究证实了肺炎克雷伯氏菌是该起仔猪腹泻大量死亡的病原;KP14013分离株为毒力极强菌株,具有多重耐药性,其16-23SrRNA ITS与GenBank中收录的肺炎克雷伯氏菌代表株之间核苷酸存在差异,可用于肺炎克雷伯氏菌菌株间的鉴别。     

Study on Biological Characteristics and Drug Sensitivity of Haemophilus parasuis Isolated in Sichuan Province

The study was aimed to investigate the biological characsteristics and drug sensitive tests of Haemophilus parasuis isolated in Sichuan province.This paper reported the biological characteristics,16S rRNA gene PCR and drug sensitive test of the isolates by technique of microbiological and molecular biology.The results showed that the isolates had micro anaerobic and could produce satellite phenomenon,the isolates were just same in biochemical characteristics with field isolates in other area.All the isolates amplified 821 bp 16S rRNA gene.And drug sensitive tests showed that the isolates were highly sensitive to cefradine,ampicillin,cefradine,amoxicillin,cefaclor,ofloxacin,cefotaxime and furadantin,the sensitive rate was 75.61% to 87.80%,but the isolates were high resistance to lincomycin,carbenicillin,enrofloxacin,amikacin and sulfamethoxazole,and multiple-drug resistance was found among the isolates,the number of bacterial strains resistant to antibiotics were more between five and eight,the resisitance strains were 21.95% to 30.49%,7 isolates were even resistant to 13 antibiotics.The results showed the phenomenon of drug resistance of the isolates was very serious.     

新疆野苹果小吉丁虫防治试验

采用林间试验,在苹果小吉丁虫幼虫期对受害野苹果树进行不同施药方式和施药浓度的组合处理,探究16%虫线清乳油对野苹果小吉丁虫化学防治效果。试验结果表明,采用打孔注药和输液法施药方式在30 d后校正防效均达到90%以上;采用输液法及施药浓度为1倍稀释时,在整个防治期内校正防效均高于其它处理。对返青率进行比较分析时发现,对于野苹果树生长,最适合的施药浓度为2倍稀释。因此,在虫害防治前期采用1倍稀释浓度、防治后期采用2倍稀释浓度进行施药防治的效果较好。