菜籽粕蛋白肽制备工艺条件优化

试验改进了菜籽粕蛋白的酶解工艺,并对改进后的工艺条件进行了优化。采用2709碱性蛋白酶水解菜籽粕蛋白,分别考察了pH值、酶用量、酶解时间、温度、底物浓度对蛋白回收率的影响规律,在此基础上,利用响应面分析法对菜籽粕蛋白的酶解条件进行了优化。结果表明,2709碱性蛋白酶水解菜籽粕蛋白的较优条件为pH11.5、温度50℃、底物浓度4%、水解时间173min、酶用量5778U·g-1,此时蛋白回收率可达87.18%。     

一株产碱性蛋白酶的酵母菌发酵条件优化

对一株产碱性蛋白酶假丝酵母菌(Candidasp.N9211)的发酵条件进行了优化,研究各种碳源、氮源及无机盐对产酶的影响,应用正交试验优化发酵培养基组成。结果表明:最佳培养基组成为酵母膏20g/L,蛋白胨15g/L,干酪素20g/L,硫酸亚铁0.01g/L。优化后蛋白酶活性提高了27倍(由1.55U/mL提高到41.85U/mL)。摇瓶培养的最佳条件为:初始pH值10.0,接种量1%,发酵温度35℃,最佳培养时间为15h。     

深海芽孢杆菌B1394的鉴定及其产蛋白酶酶学性质

从深3 200-3 600 m的南海海底沉积物中分离到185株深海细菌,从中筛选到1株产蛋白酶活力较强的菌株B1394,酶活高达873 U/mL.采用16S rDNA分子生物学鉴定,结合细菌常规鉴定方法鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).对其粗酶性质进行研究发现:最适酶活温度60℃,最适pH 8.0,在低温30℃和40℃下也具有较高的酶活性,40-60℃热稳定性较好,显示出部分嗜热酶特性;Mn2+、Mg2+、ca2+对该蛋白酶有激活作用,Hg2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+、Fe2+对该蛋白酶有抑制作用;PMSF几乎完全抑制蛋白酶活性,推断为丝氨酸蛋白酶.     

超声波对尼罗罗非鱼幼鱼生长的影响

选择尼罗罗非鱼Tilapia nilotica幼鱼(平均体重为1.95 g±0.60 g)为试验对象,用3种不同强度的超声波对其进行辐射刺激,共设3个试验组和1个对照组。经过60 d的超声波辐射养殖,结果表明:各组间体重存在极显著性差异(P<0.01),其中每天受频率为23 kHz、声源声强为200 mW/cm2的连续超声波辐射刺激5 min的试验组鱼,其体重最高,比对照组鱼体重增长约7.58%;但每天受频率为23 kHz、声源声强为600 mW/cm2的连续超声波辐射刺激5 min的鱼体,其体重反而比对照组体重减少约5.80%。各试验组尼罗罗非鱼体重与胃蛋白酶活性之间没有明显关系。当环境声强为1.58~1.60 mW/cm2时,对尼罗罗非鱼幼鱼生长比较有利。     

杀线虫细菌W3胞外体壁降解蛋白酶的纯化及部分特性

[目的]为筛选和开发高效新型生物杀线虫剂提供依据。[方法]以土壤中筛选的1株具有明显杀线虫活性的细菌菌株W3为供试菌种,对其进行发酵培养,采用硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子柱层析等方法从发酵液中分离W3菌株的杀线虫活性成分,并对各活性成分的杀线虫活性进行测定。[结果]W3菌株粗蛋白处理线虫4h后,虫体活动异常,部分虫体静止不动,处理36h后大部分虫体不活动,部分虫体体壁断裂现象,最终所有线虫被完全消解;从发酵液中纯化出1种能降解线虫体壁的胞外蛋白酶,该酶的分子量约为45KDa,其作用的最佳pH值为7～8,最佳温度为45℃。[结论]W3菌株胞外蛋白酶具有明显的杀线虫活性和线虫体壁降解活性。     

重组Lv-PEN-3蛋白先天免疫相关功能的研究

以凡纳对虾PEN-3对虾素分子作为研究对象,分别进行了细菌结合功能、蛋白酶活性抑制功能与抑菌作用等研究。结果显示：重组Lv-PEN-3分子可以较强地结合细菌,可以有效抑制分泌型蛋白酶的活性,但是其抑制细菌生长的作用较弱,三者之间的关联需要进一步探索。     

杜仲对凡纳滨对虾生长、血清非特异性免疫和肌肉成分的影响

在基础饲料中分别添加0.0%(对照组)、0.5%、1.0%、2.0%和3.0%的杜仲(Eucommia ulmoides), 饲喂体质量为(7.5±0.2) g的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei), 实验共分5个处理组, 每处理组4个重复, 每重复40尾虾。经过42 d养殖, 各处理组均有较高的存活率, 且无显著差异(P>0.05); 2.0%杜仲组的虾体增重率最高(136.1%), 饲料系数最低(1.33), 较对照组提高增重率9.8%(P<0.05), 降低饲料系数0.13(P<0.05); 饲料中添加0.5%、1.0%杜仲, 显著提高了对虾血清LSZ、PO活性, 添加1.0%杜仲, 显著降低了血清MDA含量, 提高了肝胰腺蛋白酶活性(P<0.05); 攻毒实验结果表明, 以溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)肌肉注射虾体后96 h, 0.5%、1.0%、2.0%杜仲组的虾体死亡率均较对照组显著降低(P<0.05); 在肌肉成分方面, 添加2.0%、3.0%杜仲显著提高了肌肉胶原蛋白含量, 各处理在肌肉水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪含量方面没有显著差异。上述研究表明, 在凡纳滨对虾饲料中添加杜仲2.0%, 可显著改善生产性能, 提高肌肉胶原蛋白含量; 在饲料中添加杜仲0.5%～1.0%, 可提高凡纳滨对虾非特异性免疫能力。本研究旨在考察杜仲对凡纳滨对虾生长、血清非特异性免疫和肌肉成分的影响, 为杜仲在对虾饲料中的合理应用提供科学依据。

     

Optimization of Enzymatic Treatments for Deskinning of Catfish Nuggets

One collagenase (CLS1^®) and two proteases (Proleather FG-F^® and Protease N^®) were used to deskin the peritoneal membrane of catfish nuggets. The factors were used in a full factorial experiment design: enzyme solution concentration (0.2, 0.3, and 0.4% by weight), temperature of enzyme solution (30, 37, and 44°C), and immersion time (10, 15, and 20 min). Contour plots showed that the enzyme Proleather FG-F^® maximized whiteness of catfish nuggets at 40–44°C for 15–19 min. Treatment of the enzyme Proleather FG-F^® at 0.2% for 15 min had the highest yield (103.4%) at 44°C. Enzymatic skinning has potential in removing the peritoneal membrane from catfish nuggets, improving color (whiteness), and yield.     

松毛虫肠道产蛋白酶菌株的筛选鉴定及培养条件研究

为了获得产蛋白酶能力高的细菌资源。采用酪蛋白平板法从松毛虫肠道中分离筛选得到16株产蛋白酶的菌株。通过比较透明圈大小和测定发酵后酶活力,筛选出一株产酶能力较高的菌株2N01。根据序列比对结果,构建关于2N01的系统发育树,将其鉴定为Enterobacter hormaechei。研究培养条件对该菌株生长的影响,确定2N01产酶培养的最适温度是40℃,最适pH 8.0,培养72 h左右出现产酶峰值,酶活力达50.07 U/mL。通过研究表明,菌株2N01是产蛋白酶的较好材料,具有一定的应用前景。     

中性蛋白酶制备酪蛋白抗菌肽的研究

为了替代抗生素的广泛使用,防止病原菌耐药性大大提高,开发酪蛋白抗菌肽新型抗菌剂。本研究利用中性蛋白酶水解酪蛋白,以中性蛋白酶浓度、酶解时间、酶解温度、pH值为影响因子,在单因素试验结果的基础上,应用Centure-composite Design中心组合方法进行四因素三水平的实验设计,以酪蛋白水解液抑菌圈直径为响应值,运用响应面法对水解条件进行进一步的优化。结果表明：酶解温度、酶浓度、酶解时间、pH对酪蛋白水解液抑菌圈直径影响显著;酪蛋白抗菌肽制备的最佳工艺为：水解温度为50℃,酶浓度为3.73%,pH 7.9,酶解时间为130 min。回归方程预测酪蛋白水解液抑菌圈直径理论值可达到21.93 mm,3次验证实验的平均抑菌圈直径为21.91 mm,与理论最大值接近,可见该模型能较好地预测酪蛋白抗菌肽制备的最佳条件。