动物乳腺特异表达载体的构建及其表达特性研究

为了研制动物乳腺生物反应器,用中国奶山羊β-乳球蛋白基因的5′、3′-侧翼区和β-酪蛋白基因的第1内含子构建动物乳腺特异表达载体p205C3.细胞表达试验结果显示,p205C3载体能够指导lacZ基因在SV40 T基因转化的山羊乳腺上皮细胞中表达,不能指导该基因在COS-1细胞和山羊成纤维细胞中表达.将人激肽释放酶(hKLK1) cDNA克隆入p205C3载体,用获得的重组载体p205C3KLK1注射哺乳期小鼠,然后取其心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、胰腺和乳汁,酶活性测定结果显示,乳汁中的酶活性高达255.65 U·mL-1,其他组织中的酶活性与正常小鼠无差异.结果表明p205C3载体不仅能有效地指导外源基因在山羊乳腺细胞和小鼠乳腺中表达,而且表达具有较好的组织特异性,可以用于动物乳腺生物反应器的研制.     

核酸疫苗SjCA/pc和SjMf1/pc在小鼠体内的表达

为了观察核酸疫苗SjCA／pc和SjMfl／pc在小鼠体内的表达，取昆明鼠，于其后腿外侧肌注免疫SjCA／pc和SjMfl／pc，2d后剖杀动物．取注射部位肌肉作石蜡切片，免疫组化分析，荧光显微镜下镜检。结果表明，SjCA／pc和SjMfl／pc在小鼠注射部位肌肉可见黄绿色荧光，而对照组无此现象。可见，SjCA／pc和SjMfl／pc可在小鼠体内表达。     

过氧化氢对小鼠骨髓微核率和孕鼠胚胎着床及生长的影响

通过体内试验研究了过氧化氢对小鼠骨髓微核率和胚胎着床及孕鼠生长发育的影响。将妊娠的昆明种(KM)小鼠分成5个处理组,分别为环磷酰胺(40.00 mg/kg)、蒸馏水和过氧化氢(500.00,125.00,31.25 mg/kg)组。于妊娠后6~15 d,每天采用灌胃给药,环磷酰胺组于妊娠后11~13 d腹腔一次性注射。每3 d称重1次,于妊娠第18 d称重后剖腹检查。另取雌雄各半KM小鼠分成5个处理组,分别为环磷酰胺、蒸馏水和过氧化氢(500.00,100.00,10.00 mg/kg)组,均采用灌胃染毒,每天1次,连续4 d,第5 d处死小鼠,取股骨髓液常规制片,计算红细胞微核率。结果表明,吸收胎和死胎数蒸馏水组为5.56%,中剂量过氧化氢组增加到19.53%(P<0.01),低剂量组增加到13.14%(P<0.05)。蒸馏水组小鼠嗜多染红细胞微核率为0%~0.002%,过氧化氢组增加到0.017%~0.032%(P<0.01)。在本试验剂量范围内过氧化氢有明显的胚胎毒性和遗传毒性。     

荧光原位杂交(FISH)技术在转基因小鼠检测中的应用

制备转基因小鼠特有的DIG标记探针，应用染色体荧光原位杂交（FISH）技术，对转基因小鼠外周血细胞的遗传性状进行分析，检测其合子类型，以挑选纯合子小鼠用于保种。结果杂合型小鼠61％的细胞有一个荧光信号，而纯合型小鼠约24％的细胞有两个荧光信号，48％的细胞有一个荧光信号，野生型小鼠无荧光信号。因此染色体荧光原位杂交技术可作为检测转基因小鼠遗传特性的一种方法。     

猪流产嗜性衣原体omp-1基因的重组质粒与重组蛋白免疫组合效果

为增强猪流产嗜性衣原体omp-1基因的免疫措施进而筛选出高效新型分子疫苗,本实验将猪流产嗜性衣原体omp-1基因克隆入pcDNA3.1( )载体构建DNA疫苗,初次和二次免疫分别以核酸/重组蛋白(DNA/r-MOMP)、重组蛋白/核酸(r-MOMP/DNA)、重组蛋白 核酸/重组蛋白 核酸(r-MOMP DNA/r-MOMP DNA)、核酸 核酸(DNA/DNA)和重组蛋白 重组蛋白(r-MOMP/r-MOMP)5种组合接种BALB/c小鼠,同时以载体和弱毒为对照。二次免疫后14 d以ELISA和T淋巴细胞增殖实验检测特异性体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示核酸与重组蛋白同时免疫可以诱导产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,而DNA/r-MOMP组合的细胞免疫和体液免疫水平高于r-MOMP/DNA组合,单独免疫DNA组或r-MOMP都不能获得好的细胞和体液免疫。     

Further Report on Carcinogenesis or Tumorigenicity of MDCK Canine Kidney Cell(CKC) Lines and Analysis of Their Chromosome Karyotypes

Using Hela cell cultures as positive control and primary canine kidney cell (CKC) or feline kidney cell (FKC) cultures purified in vitro on passage 3 as negative control, the tumorigenicity of Madin-Darby canine kidney (MDCK) cells was tested in ＞273 nude mice, and colony formation in soft agarose and haemagglutination under different concentration of plant lectins of these cells were carried out at the same time. Subsequently, very low tumorigenicity strains of MDCK line were successfully selected; these were evaluated for the production of canine or feline combination viral vaccines, free of infectious agents, and of known cytogenetic and tumorigenic. It is thus evident that MDCK cell of M, JB, JC, WB or H strain can be approved as substrate for the preparation of attenuated viral vaccines, but MDCK cell of YA, YB and KA strains can not be approved as substrate for the preparation of attenuated viral vaccines. The heritable character of these cell sub-lines is comparatively stable, and shows little significant difference between passages.     

裸小鼠繁殖群自发性肿瘤发病情况的研究

对本室六年中饲养于SPF条件下的466只NC系裸鼠繁殖群动物的自发性肿瘤发病情况进行了观察研究,其中纯合子鼠(雄nu/nu)164只,杂合子鼠(雌,un/+)302只。每只动物平均观察时间均达7个月以上,淘汰时均经详细解剖学检查,检出病变者进行病理组织学及透射电镜观察确诊。多数肿瘤病例结合裸鼠间可移植性鉴定.共检出自发性肿瘤7例,发生于纯合子裸鼠5例,杂合子鼠2例。结果表明,在相同饲养环境下,裸鼠(雄,nu/nu)的自发性肿瘤发病率(3.04％)比其同系有胸腺杂合子鼠(雌,nu/+)(0.66％)明显增高(P<0.05),且前者的平均发瘤鼠龄比后者为短,其自发瘤以恶性上皮性肿瘤为主。结果支持了免疫功能缺陷的裸鼠比其同系免疫功能正常鼠有更高的自发性肿瘤的观点。作者还提出了评价裸鼠群体自发性肿瘤发病率的方法.     

胚胎冷冻技术及其在转基因小鼠中的应用

随着生物工程技术的发展,出现了许多生物工程小鼠品系,促使胚胎冷冻技术得到了广泛应用。胚胎冷冻技术不仅为转基因动物提供可用胚胎,还使胚胎移植不受时间、地域限制,简化引种过程,防止疾病传播,为建立优良动物的胚胎库提供了条件。综述了几种常用的胚胎冷冻方法及其在转基因小鼠中的应用研究,指出了胚胎冷冻方法存在的主要问题,并展望了其发展前景。     

H5N1亚型禽流感病毒低剂量感染小鼠发病模型的建立

为模拟哺乳动物感染H5亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)的发病进程,本研究采用对哺乳动物高度致病的H5N1亚型HPAIV株A/bar-headed goose/Qinghai/3/05 (BHG/3/05),以低剂量鼻腔接种小鼠,观察发病、存活、病毒复制及组织病理损伤情况.结果显示,100.4 EID50即能够100％感染小鼠,但发病表现缓慢,死亡延迟至8d以后,存活达60％;体内病毒复制可持续10 d以上,感染后前3d病毒的增殖限于呼吸道,随后扩散至脑、脾、肾等其他器官;组织病理学观察肺脏早期表现出渗出性炎症,第10d发展为典型的间质性肺炎.本研究结果为探讨人禽流感的病理发生机制提供了具有价值的模型.