H-Y单抗检测方法初探

优化间接ELISA条件 ,提高灵敏度 ,建立检测H Y抗体的检测方法。利用BALB/c公鼠免疫同系母鼠 ,制备H Y单抗。PCR验证间接免疫荧光法鉴定胚胎性别准确率。结果表明 :鉴定雄性胚胎的准确率为 83% ( 1 5 / 1 8)。鉴定雌性胚胎的准确率为 94 % ( 1 5 / 1 6)。     

Multiple-substrate enzyme assays: a useful approach for profiling enzyme activity in soils?

This study focuses on the applicability of multiple-substrate enzyme assays to simultaneously determine various soil enzyme activities within one assay. Mineral soils from agricultural field sites differing in soil properties and management were used to optimise substrate composition and concentration of 4-methylumbelliferone and 7-amino-4-methylcoumarin derivatives as model substrates. In contrast to conventional assays, enzyme activity was measured at soil pH since optimum pH is not more applicable using a multiple-substrate approach. Furthermore, enzyme activity was not calculated from the product formed but from substrate decrease. After incubation the added substrates were re-extracted, separated by high-performance liquid chromatography and quantified by UV-absorption at 320 nm. This approach allows simultaneous measurement of the activity of β-d-glucosidase, N-acetyl-β-d-glucosaminidase, β-d-glucuronidase, β-d-xylosidase, phosphomonoesterase, sulfoesterase and leucine-aminopeptidase within one assay and with sufficient accuracy. However, incomplete re-extraction due to adsorption of substrates to the soil matrix was observed. In addition, certain competitive inhibition effects due to chemically similar substrates were found. Compared to conventional methods, no distinct differences in enzyme activity profile were detected, with both assays—conventional and multiple-substrate approach—leading to similar differentiation among the investigated soils. In conclusion, the multiple-substrate approach may serve as time-saving alternative to standard enzyme assays in mineral soils. Certainly, since the multiple-enzyme assay is conducted at soil pH, the procedure leads to reduced comparability of soils with contrasting pH values.     

间接ELISA检测新型鸭瘟病毒抗体

以50%饱和度的硫酸铵粗提病毒,再经Sephadex G-200过柱层析纯化了新型鸭瘟病毒,以此作为包被抗原,并用自制油苗免疫雏鸭,获得了高效价的血清抗体,又经过各种条件优化,建立了检测血清抗体的间接ELISA方法.经对不同发病日龄和免疫油苗后雏鸭的血清检测,证明该检测方法有很高的敏感性、特异性和重复性,可作为快速诊断该病的一种可靠方法.     

Einfluß der Milchleistung auf Fruchtbarkeitskriterien der Milchkuh post partum: Auswertung von Progesteronprofilen

Inhalt Der Einfluß der Milchleistung auf Fruchtbarkeitskriterien von Milchkühen (n = 80) post partum (p.p.) wurde unter den standardisierten Bedingungen einer Versuchsherde anhand von Progesteronprofilen analysiert. Progesteron wurde dabei im Milchfett gemessen. Wie in früheren Studien war das herausragende Fruchtbarkeitsproblem die reduzierte Ausprägung von Brunstsymptomen und daraus resultierend Probleme bei der Brunsterkennung und bei der Wahl des optimalen Besamungstermins. Insgesamt verliefen 41,2% aller durch Progesteronmessung ermittelten Ovulationen ohne erkennbare Symptome. 94,8% aller Kühe waren mindestens einmal von stiller Brunst betroffen. Resonders häufig verliefen die ersten Ovulationen nach dem Einsetzen der zyktischen Ovaraktivität unerkannt. Bei stiller Brunst waren dabei die pheripheren Progesteronkonzentratwnen im Periöstrus signifikant höher als bei beobachteter Brunst. Dieses Phänomen war jedoch auf die ersten 5 Ovulationen p.p. begrenzt und weist auf hormonale, d.h. tierspezifische Ursachen der stillen Brunst in dieser Phase hin. Im weiteren Verlauf waren dagegen keine signifikanten Unterschiede in den Progesteronkonzentrationen zwischen stiller und beobachteter Brunst feststellbar. Damit müssen für die spätere p.p.-Phase eher managementbedingte Ursachen für die “stille” Brunst unterstellt werden. Während mit steigender Laktationsleistung die Häufigkeit anderer Fruchtbarkeitsprobleme lediglich tendenziell und nicht signifikant mit der Leistung korreliert anstieg, nahm bei höherer Milchleistung die Intensität von Brunstsymptomen deutlich ab. Damit traten stille Brunsten und Besamungen zumfalschen Zeitpunkt signifikant häufiser auf. Entsprechend läßt sich die Verlängerung der Zwischenkalbezeit bei steigender Laktationsleistung nahezu vollständig auf eine Zunahme stiller Brunsten und eine Häufung von Fehlbesamungen zurückführen. Neben der Milchleistung waren eine Reihe weiterer signifikanter Einflüsse auf die Fruchtbarkeit der Herde (z. B. Saison, Kalbenummer etc.) nachzuweisen. Der signifikant negative Einfluß steigender Milchleistung auf Fruchtbarkeitsparameter, insbesondere auf die Brunstsymptomatik, bestätigt sich jedoch auch nach Berücksichtigung dieser Einflußfaktoren im statistischen Modell. Contents: Influence of milk yield on the fertility of dairy cows post partum: evaluation of progesterone profiles Progesterone profiles were evaluated to monitor the influence of milk yield on fertility traits of dairy cows. The cows (n = 80) were kept under standardizised experimental farm conditions and progesterone was measured in milk fat during the post partum (p.p.) period. Overall, the most frequent fertility problem was a reduced intensity of oestrus symptoms and resulting drfficulties in heat detection and timing of artificial insemination (A. I.). 41.2% of all ovulations were not accompanied by observed heat symptoms (silent heat). 94.8% of the cows investigated were affected at least once during the p.p.-period by this problem. Silent heat was most frequent afer resumption of cyclic ovarian activity pp., In case of silent heat progesterone concentrations during perioestrus were significantly elevated compared to observed oestrus. This phenomenon was obvious up to the 5th ovulation p.p. indicating endocrine determinants of silent heat during this part of the pp. period. Thereafter progesterone concentrations during perioestrus were similar in case of both, silent and observed heat, indicating that during the late p.p. period silent heat is mainly due to management failure. The frequency of fertility problems in general tended to increase slightly but not significant with increasing milk yield. A significant adverse influence of increasing milk yield however was obvious for the intensity of oestrous symptoms. Consequently the frequency of silent heat and number of unsuccessful inseminations increased with advanced yield representing the main reason for increasing interval between calvings. Additionally other injluences on herd fertility were obvious (e.g. season, number of calving). The significant negative influence of increasing milk yield, particularly concerning oestrus intensity, could be confirmed even if these influences were eliminated by the statistical model.     

应用间接血球凝集(IHA)试验诊断猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)病

本文用猪囊尾蚴的全囊虫、囊液、头节的粗提抗原(CW_1,CF_1,CS_1),和其超速离心上清液抗原(CW_2,CF_2,CS_2)以及其经葡聚糖凝胶柱(Sephadex G—150)层析提纯的抗原(CW_3,CF_3,CS_3)分别对人工感染的猪囊尾蚴、细颈囊尾蚴猪和不感染的对照组猪,以间接血球凝集试验(IHA)进行定期的检测。结果表明,CW_2,CW_3,CF_2和 CS_2抗原的敏感性较高。进而用此4种抗原对自然感染的猪囊尾蚴猪进行了扩大诊断试验。试验结果:CF_2的敏感性高于其它抗原,但特异性较差,其检出率为76.87%,假阳性率为16.07%;而 CW_3抗原的敏感性虽较 CF_2抗原差,但特并性较强,检出率为64.88%,假阳性率为2.5%。两种抗原的重复性均良好。     

测鸭出血症病毒间接免疫荧光试验的建立

为寻求一种检测鸭出血症病毒 (duck hemorrhagic disease virus,DHDV)快速、敏感、实用的方法 ,建立了间接免疫荧光试验 ,并测定了一抗 (兔抗鸭出血症病毒阳性血清 )、二抗 (FITC标记的羊抗兔 Ig G)的最佳使用浓度及最佳感作时间分别为 1∶ 2 0、6 0 m in和 1∶ 10 0、6 0 min。以建立的间接免疫荧光试验检测了 DHDV于番鸭胚成纤维细胞中的复制动态 ,结果表明 ,接毒后 36～ 6 0 h为 DHDV大量复制期 ;6 0～ 12 0 h为 DHDV从核膜以出芽方式进入胞浆中成熟的阶段 ;12 0～ 14 4 h为大量 DHDV自胞浆中释放至胞外阶段。该方法快速、特异 ,可用于该病的实验室诊断。     

用正向间接血凝试验检测猪瘟免疫抗体

对采自西宁地区两个绪场的76份血清用正向间接血凝试验进行了猪瘟免疫抗体的检测。结果检出阳性59份，抗体保护率为77．63％(59／76)。     

承德春小麦黄矮病毒（WYDV）株系鉴定

承德春麦在历史上曾为河北省小麦黄矮病的主要流行区，近年再度严重流行。严重威胁着小麦生产。经多点取样，采用３种无毒蚜虫即麦长管蚜［Ｍａｃｒｏｓｉｐｈｕｍ（ｓｉｔｏｂｉｏｎ）ａｖｅｎａｅ（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）］（Ｍａ）。麦二叉蚜［Ｓｃｈｉｚａｐｈｉｓ（Ｔｏｘｏｐｔｅｒａ）ｇｒａｍｉｎｕｍ（Ｒｏｎｄ）］（ｓｇ）和禾缢管蚜［Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍｐａｄｉ（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）］（Ｒｐ）传毒进行生物测定和血清学酶标（ＤＡＳ—ＥＬＩＳＡ）试验，明确了河北省承德春麦黄矮病流行有２种株系类型；麦二又蚜、麦长管蚜株系（ＧＡＶ）和禾缢管蚜、麦长管蚜、麦二叉蚜株系）ＰＡＧＶ）混合发生，且ＧＡＶ株系为主流株系。蚜虫调查结果明确了造成该病害在生产上流行、传毒的主要蚜虫介体是麦长管蚜。试验结果为生产上抗病育种和治蚜防病提供了依据。     

牛DGAT1基因的K232A取代等位基因分布频率及对部分胴体性状的影响

为研究肉牛与体脂相关的胴体性状的数量性状座位,利用单链构象多态性方法检测了牛DGAT1基因K232A取代的2个等位基因K和A在实验群体中的分布频率,并分析了基因型对4个肉牛群体部分胴体性状的影响。结果表明,编码赖氨酸的等位基因K在地方黄牛品种鲁西牛、晋南牛、秦川牛和杂交牛利木赞牛×鲁西牛群体中的分布频率分别为0.75、0.39、0.40和0.35,在南阳牛中的分布频率最高,为0.83。在本研究中,牛DGAT1基因的K232A取代对背膘厚度(P=0.88)、大理石花纹等级(P=0.13)和肌内脂肪(P=0.19)没有显著影响,但与腔油重/胴体重、嫩度显著相关,KK型和KA个体外脊肌肉剪切力低于AA型个体(P=0.037),而腔油重/胴体重明显高于AA型(P=0.045),而且KK型个体有更高的净肉率(P=0.018)。研究显示,编码赖氨酸的等位基因K在鲁西牛和南阳牛中分布频率高于秦川牛和晋南牛及已经报道的国外牛种,牛DGAT1基因的K232A只与腔油重/胴体重、嫩度和净肉率相关。该实验相关性分析结果还有待在更大的群体中验证。     

间接竞争酶联免疫吸附分析法测定土壤和面粉中的异丙隆

采用自制的抗异丙隆多克隆抗体建立了测定异丙隆残留的间接竞争酶联免疫分析方法，优化的包被抗原和抗体的浓度分别为0.1和0.016mg·L^-1。结果表明，6种常用的与异丙隆结构相似的脲类除草剂的交叉反应都小于0.6%，标准曲线的线性范围为3.42～121.33ng·mL^-1，线性相关系数r^2=0.9410，方法的检测限为3.42ng·mL^-1。利用建立的间接竞争ELISA方法检测土壤和面粉样品中的异丙隆，测得土壤中异丙隆的加标回收率为100%～108%，变异系数为3%～6%;面粉中异丙隆的加标回收率为81%～84%，变异系数为5%～7%。