利用随机肽库鉴定猪瘟病毒E2蛋白抗原表位

利用噬菌体随机12肽库对抗猪瘟病毒（classical swine fever virus CSFV）糖蛋白E2特异的单抗A11进行表位鉴定，经过4轮筛选后，随机挑取10个噬菌体克隆作竞争ELISA检测。结果表明，10个克隆中除4号克隆外，其余9个均能抑制原核表达的E2蛋白和A1l单抗之间的抗原抗体反应，抑制率在35％～64％；DNA测序表明，所有产生竞争抑制作用的8个噬菌体克隆的12肽序列均舍有XXWRXXXL核心序列，而没有抑制作用的克隆则不含该核心序列；Western-blot试验证明，所挑阳性克隆均能被单抗A11识别。多序列比较发现，该核心序列与猪瘟病毒E蛋白的28～35位氨基酸TTWKEYSH有一定的同源性，人工合成的含有部分核心序列氨基酸的多肽可以与单抗A11反应，表明单抗A11所针对的抗原表位位于CSFVE2蛋白的28～35位氨基酸。     

多重RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒

为了检测、区分猪传染性胃肠炎(TGE)和猪流行性腹泻(PED)，建立了同时检测这2种疾病痛原体的多重PCR方法。参考GenBank登录的TGEV和PEDV纤突蛋白S基因序列，经DNAsis 2．0比较分析。分别筛选出TGEV、PEDVS基因相对保守区。以TGEV TH-98株(GenBank登陆号为AF494337)和PEDV CV777株(GenBank登陆号为NC003436)为参考模板，利用软件Primer3设计合成了2对寡核苷酸引物，以ST细胞培养的TGEV和PEDV毒株核酸为模板。利用所设计的2对引物进行多重RT-PCR扩增，结果同时得到与试验设计相符的499bp(TGEV)和199bp(PEDV)的扩增条带。而对其他3种猪病原的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明。建立的多重RT-PCR方法可检测出10pgTGEV RNA和100pg PEDV RNA。     

微孔草种群空间格局及特征的研究

微孔草是由种子到种子的有性繁殖植物,在繁殖生长过程中常因生境差异、气候变化、繁殖和社群反应呈现出成群星散或成簇生长的空间格局,种群的个体呈随机分布,并因生境的改变或物种竞争而改变分布区或在分布区中随着时间的变化而使种群扩大或缩小.微孔草生长地的单位空间容纳量中包括了各种植物与环境间的相互作用,从而使微孔草受到种内和种间密度制约而使种群的数量发生变化.     

SSR标记技术在甜瓜杂交种纯度检验中的应用

 以两个甜瓜杂交品种(系) ‘东方蜜1号’和‘01231’及其亲本为材料, 用SSR分子标记技术研究杂种与其双亲之间扩增谱带的多态性, 以甄别真假杂种。所试验的23对SSR引物中有8对引物分别在两个甜瓜杂交种和其双亲之间存在扩增多态性, 表现为: 多数SSR引物对自交系的扩增只出现1条带,但部分引物在某些自交系中扩增出2条带, 杂交种条带均为父母本的互补型, 很适合做杂交种纯度鉴定。用引物M6 对‘东方蜜1号’和引物M17对‘01231’各100粒单种子进行SSR鉴定, 所测纯度分别为100%和96% , 与田间纯度99.6%和96.2%非常接近, 显示出SSR标记技术在甜瓜杂交种子纯度的室内快速检测中有广泛应用前景。     

利用RAPD方法确认‘重阳红’桃及其芽变

‘重阳红’桃为昌黎县两山乡大久保桃园中的一个自然变异株,普遍认为是由‘大久保’桃(Prunus persica)变异而成,但缺乏直接证据。重阳红芽变是1998年在昌黎两山乡重阳红桃树上发现的一个自然变异大枝。该变异基本保留了重阳红桃的优良特性,并克服了原品种易落果和裂果的重大缺     

无辣品种(系)中的辣椒素合成酶的基因缺失有利于用SCAR标记早期检测辣度

用辣椒品种ECW123R(C.annuum)与CM334(C.annuum)杂交,对其121个F2代单株进行的检测表明,辣椒素合成酶基因(CS)与C位点的共分离控制了辣味的表达.故我们认为CS与C紧密连锁.对四个辣味型品种和四个无辣味型品种的测序分析表明,无辣味型品种在CS的5'上游区有一长度为2529bp的缺失(基因序列)存在.我们已研究出该C位点的分子标记,可在植株苗期检测其辣度.根据该缺失序列,我们开发了5个SCAR标志,其中有两个为共显性.这些SCAR标记对早期检测无辣味型个体既方便又准确.     

玉米穗腐病和茎基腐病镰孢菌间相关性的RAPD分析

 利用随机扩增多态性DNA (RAPD)技术对玉米穗腐病和茎基腐病镰孢菌之间的相互关系进行了研究,证实了引起2种病害的串珠镰孢菌同源性很高,在遗传上具有较高的相似性,病菌不易受地域或环境和寄生部位选择作用的影响,同一类型的串珠镰孢菌可以是穗腐病和茎腐病的共同病原菌。禾谷镰孢菌间的遗传变异性很强,易受地域、环境和寄生部位选择作用的影响,出现明显的分化现象,穗腐病和茎基腐病可以由同一禾谷镰孢菌分化类型侵染所致,也可由不同分化类型侵染所致。     

镰形扇头蜱组胺结合蛋白全长基因的克隆与分析

从本实验室构建的镰形扇头蜱（Rhipicephalus haemaphysaloides）抑制消减杂交cDNA文库中选择了1条可能编码组胺结合蛋白（HBP）的EST序列（RhHBP）,以5′末端快速扩增的方法（5′RACE）扩增获得5′末端序列,拼接获得全长基因。DNAMAN（v4.0）、DNAstar（v4.0）和Genetyx（v4.0）软件分析阅读框、编码产物、序列同源性和系统进化,同时也分析了该基因在吸血前后雌雄蜱体内的表达情况。5′RACE法获得1条约400 bp的DNA片段,克隆测序,拼接获得1条长803 bp的全长基因,编码219个氨基酸残基。该基因在吸血雌蜱唾液腺内特异表达,初步分析该基因是组胺结合蛋白基因。     

猪链球菌河南分离株的生化分群与随机扩增DNA(RAPD)分型

从河南省11个猪场的送检病料中分离纯化到11株链球菌,将其进行了系统的生化分群,并应用16条随机引物做随机扩增多态性DNA(RAPD)分型。结果表明,11株猪链球菌分别属于C群(3/11)、D群(2/11)、E群(4/11)和L群(1/11),其中1株未定。在RAPD研究中,有3条引物呈现良好的多态性和稳定性,可产生稳定、复杂的指纹图谱;采用SPSSl0.0软件分析了不同菌株间的遗传距离,绘制出菌株间的亲缘关系树状图。依据遗传距离,分离的11株猪链球菌可被分为4个聚类群。     

不同浓度的壳聚糖对草鱼生长的影响

试验旨在探讨壳聚糖对草鱼生长的影响.采用单因子试验设计,设基础饲料组、0.25%壳聚糖组、0.50%壳聚糖组和1.00%壳聚糖组.选择360尾体质量约50 g的健康草鱼,随机分为4个处理,每处理3个重复,每重复30尾鱼,进行为期40 d的饲养试验.结果表明,壳聚糖显著促进草鱼生长,与基础饲料组相比,0.25%、0.50%和1.00%壳聚糖组草鱼的增重率分别增加56.6%、72.8%和65.5%.草鱼饲料中添加不同浓度的壳聚糖显著影响草鱼的投饵系数,与基础饲料组相比.0.25%和0.50%壳聚糖组其投饵系数均下降8.4%,1.00%壳聚糖组其投饵系数显著高于其他各组.综合考虑各项指标,在草鱼饲料中以添加0.50%壳聚糖较为适宜.