基于RT-RAA的禽流感H5亚型核酸CRISPR-Cas13a检测方法的建立

采用逆转录-重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)和成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)检测系统，建立一种快速、高灵敏度和高特异性的禽流感病毒(AIV)H5亚型核酸检测新方法。通过分析342条禽流感病毒H5亚型的HA基因序列，选取保守性区域设计具有强特异性的CRISPR RNA(crRNA)序列以及RT-RAA引物，并对检测体系中的主要成分LwaCas13a蛋白、crRNA、TaqMan探针、T7 RNA Polymerase、NTP Buffer Mix含量进行优化，建立了基于RT-RAA的AIV H5亚型核酸CRISPR-Cas13a检测方法。取10⁵～1 copies·μL^-1含有目的基因的质粒标准品和其他亚型禽流感病毒以及其他禽病病毒分别验证和评价该方法的灵敏性和特异性。结果表明，本文设计的RT-RAA引物与crRNA特异且灵敏，其最佳反应体系中主要成分用量分别为LwaCas13a蛋白(60μg·mL^-1)2.0μL、crRNA(100μmol·L^-1)3.2μL、TaqMan...     

现代生物技术在水产养殖中的应用

核酸探针技术通过分析病原生物的遗传结构。根据这段基因结构的序列，就可以设计可与其互补的DNA探针，与病原生物的DNA进行杂交，以此来确定病原携带者和传播者的分子生物学技术。该技术具有灵敏度高、特异性强等优点，近年来在对虾病毒病的检测中倍受青睐。     

核酸适体检测赭曲霉毒素A荧光方法的建立

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)普遍存在于谷物等粮食和动物饲料中,是一种可以引起癌症的霉菌毒素。为了快速检测OTA,利用荧光染料PicoGreen识别双链DNA原理,建立了一种基于核酸适体与PicoGreen检测毒素OTA的方法。在10 mmol/L Tris,120 mmol/L Na Cl,5 mmol/L KCl,20 mmol/L CaCl2(pH8.5)缓冲液中,PicoGreen与双链DNA结合后,释放的荧光在3 min内达到峰值(激发波长为480 nm,发射波长为520 nm)。从加样到荧光检测,整个流程可在40 min内完成。检测OTA的灵敏度为1μg/L;检测范围为1μg/L~200μg/L。特异性实验表明:OTA核酸适体-Pico Green方法与黄曲霉毒素B1、伏马毒素B1、桔毒素和玉米赤霉烯酮等霉菌毒素无交叉反应。本方法在检测敏感性和特异性方面与传统抗体ELISA方法相当(Kappa值为:0.857)。由于核酸适体成本比抗体低,因此本方法比抗体ELISA方法更具实用价值。     

应用LAMP检测方法检测乳制品中的单核细胞增生李斯特氏菌（英文）

[目的]考察LAMP方法检测乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌的可靠性。[方法]使用恒温环介导技术,以单核细胞增生李斯特氏菌编码的李氏溶血素O的hly A基因为研究对象设计引物,建立单核细胞增生李斯特氏菌的LAMP快速检测方法。[结果]LAMP法特异性强,灵敏度与荧光定量PCR相当。使用LAMP方法检测各种乳制品中的单核细胞增生李斯特氏菌结果与细菌分离方法检测结果完全一致。[结论]LAMP检测结果可以通过肉眼直接加以鉴别,适合乳制品突发事件情况中的检测。     

酵母核酸替代血浆蛋白粉在断奶仔猪中的应用效果

试验选取健康、体重相近(7.52±0.17kg)、28日龄断奶仔猪60头,随机分为2组(各3个重复,每个重复10头猪),试验设计为2个处理组(3%血浆蛋白粉基础饲粮和3%酵母核酸基础饲粮),每组随机接受1个处理,试验共28d,试验第14d称重。结果显示:0d～28d添加酵母核酸与血浆蛋白相比,日增重和日采食量分别提高了11.40%和2.69%(P>0.05),料肉比降低了8.84%(P>0.05),明显提高生产性能。在经济效益中,试验结束后饲料成本差异不显著,但添加酵母核酸比添加血浆蛋白有提高日增重、提高日采食量、降低料肉比,经济效益显著。综合比较,高性价比的酵母核酸是血浆蛋白的理想替代物。     

鸡网状内皮细胞增生病的诊断试验

本试验将PCR扩增与核酸探针斑点分子杂交特异性诊断检测技术相结合,对部分疑似REV感染患病鸡群进行了外源性核酸特异性交叉检测诊断试验,提高了REV感染诊断的准确性。应用鸡REV地高辛核酸探针斑点分子杂交特异性诊断检测方法,对860余份血液DNA样本进行了REV感染特异性检测试验。结果表明,贵州地区鸡REV阳性感染率为:高产蛋鸡40.05%(164/390)、杂交肉鸡42.91%(106/247)、绿壳蛋鸡34.97%(57/163)、地方土鸡11.7%(7/60)。     

Development of Nucleic Acid Lateral Flow Immunoassay Detection Method for Foot-and-mouth Disease Virus

In this article, through the combination of nucleic acid probes and immune chromatography, a simple, sensitive and specific detection system——nucleic acid lateral flow immunoassay (NALFIA) for amplifing foot-and-mouth disease virus (FMDV) 3D RT-PCR products was established.An ultrasensitive nucleic acid biosensor (NAB) based on streptavidin-labeled gold nanoparticles dual labels and lateral flow strip biosensor (LFSB) were used in this system.The biotinylated goat anti-rabbit IgG was marked to the NC membrane as the alleged strip and the anti-digoxin antibody was labeled to the NC membrane to capture the digoxin probe.After assemblying gold-labeled strip and detecting RT-PCR products, the detection limit of NALFIA was 0.3×10^-3 to 3×10^-3 μg/μL.The NALFIA was compared with agar gel electrophoresis analysis, the results showed that the sensitivity of NALFIA was higher than agar gel electrophoresis.There was an excellent agreement between the two methods.NALFIA was a method with high sensitive, low cost and short time.In conclusion, this method provided a good alternative to detect FMDV.     

镉对水生动物生物大分子的影响及机理

镉广泛分布于饲料、食物、山、地和水中,是重金属的典型代表,可致毒、致畸、致癌等。水中镉不易被降解,却极易被水生动物富集,并通过食物链危害其他动物及人,因而引起了特别关注。本文主要综述镉对水生动物核酸、蛋白质、脂质和糖原等生物大分子的影响及机理。为学习、理解和进一步深入研究镉对水生动物生物大分子的影响及其机制,服务于更好地控制镉污染,保护水生动物和生态环境,发展可持续的健康生态水产养殖业。     

钒钼酸铵显色定磷法检测核酸含量

核酸是生物遗传信息的贮存库，它是一类重要的生物大分子，具有调节生物体内能量代谢、促进蛋白质（酶）的合成，参与遗传信息编码、传递细胞信号等重要的生理和生化功能，从整体上讲可提高生理代谢水平，具有明显的保健功能（刘洁生等，2002）。目前一些公司生产的系列核酸产品作为一种半必需营养物质，已应用到食品、医药和饲料等多个领域，为确保产品质量符合标准要求，准确测出产品中核酸含量至关重要。