西藏地区藏鸡大肠杆菌超广谱β 内酰胺酶检测及药物敏感性分析

分析藏鸡大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶与耐药性的关系。采用CLSI推荐的方法检测了临床分离的4株藏鸡大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的情况,用微量稀释法测定了8种抗菌药对其的最小抑菌浓度(MIC)值。临床分离的4株鸡大肠杆菌中,有1株产超广谱β-内酰胺酶,检出率为25%。产超广谱β-内酰胺酶的菌株对多种药物耐药,4株临床分离鸡大肠杆菌对氨苄西林和阿莫西林耐药率均达100%。产超广谱β-内酰胺酶是鸡大肠杆菌对抗菌药物产生耐药性的主要机制之一,这对指导西藏地区鸡大肠杆菌病防治具有参考价值。     

三株临床分离菌对抗菌药的药敏试验及其超广谱β-内酰胺酶的检测

用试管二倍稀释法测定了β-内酰胺环类抗生素及其与抑制剂联用时对临床分离鸡致病菌的抗菌活性，并进行了超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检测。结果表明：这三株分离菌对β-内酰胺类、氟喹诺酮类常用抗菌药物敏感性低，甚至耐药。但头孢氨苄／舒巴坦（2：1）、阿莫西林／棒酸（2：1）、头孢曲松／TB（4：1）、头孢哌酮／TB（4：1）配比联用时，可以恢复三株分离菌对β-内酰胺环类抗生素的敏感性。检测结果表明，有一株菌产ESBLs。     

鸡大肠杆菌ESBLs基因的克隆及序列分析

分离纯化来自河南不同地区的鸡大肠杆菌菌株,按照NCCLS标准和双纸片协同试验法进行ESBLs基因表型鉴定。然后根据GenBank已发表的序列设计两对引物,选择阳性表型菌株并提取总DNA,进行PCR、克隆、阳性质粒测序,将测定的序列拼接后和参考菌株ESBLs基因序列比较分析。结果显示,15株大肠杆菌菌株有3株菌株含有β-内酰胺酶,为阳性菌株,这3株与2个参考株核苷酸序列同源性为98.9%~99.7%,氨基酸序列同源性为98.1%~99.2%。3株大肠杆菌阳性菌株序列ESBLs基因型均为TEM型,核苷酸有15个位点发生突变,其中6个位点突变引起氨基酸变异。     

舒巴坦和硫酸黄连素对禽大肠埃希氏杆菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的抑制作用

对临床分离产ESBLs的禽源大肠埃希氏杆菌进行了体外抑菌试验,并利用分光光度法进行了酶动力学及酶抑制剂抑酶效应的研究.结果表明,头孢噻呋(CTF)对ESBLs的M IC值>128 mg.L-1,与舒巴坦(SBT)联用(m∶m=2∶1)后平均值降为12.7 mg.L-1,与硫酸黄连素(BBR)联用(m∶m=1∶1 000)后降为16 mg.L-1.SBT和BBR都可以降低ESBLs对CTF的水解;CTF与SBT不同配比(m∶m=2∶1,4∶1)对CTF的抑酶保护率平均值分别为94.4,93.0%,CTF与BBR配比(m∶m=1∶10)抑酶保护率平均值为90.8%;酶动力学方面,SBT,BBR与CTF配比的Km值有明显的升高,即酶与CTF的亲和力变小,Vm ax并没有明显的降低,Vm ax/Km(有效水解率)有明显的降低(P<0.05),CTF与SBT不同配比(m∶m=2∶1,4∶1)的Vm ax/Km(平均值)降为5.6,5.0 s-1,CTF与BBR配比(m∶m=1∶10)降为8.4 s-1,说明CTF与SBT不同配比(m∶m=2∶1,4∶1)间的抑酶效果没有明显差异(P>0.05),但BBR的抑酶效果低于SBT.     

青岛地区产ESBLs鸡源大肠杆菌耐药性调查与优势基因型分析

【目的】通过抗菌药物敏感性测定试验以及超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）表型和基因型检测试验,了解青岛地区肉鸡养殖场产ESBLs大肠杆菌菌株的分布情况及耐药特征,分析ESBLs流行基因型和基因亚型,为指导临床合理使用抗菌药物、有效控制产ESBLs菌株的感染和流行提供依据。【方法】采用微量肉汤稀释法对249株大肠杆菌菌株进行抗菌药物敏感性测定试验,采用CLSI推荐方法进行ESBLs表型检测和确证实验,采用PCR方法、序列测定以及生物学分析软件进行ESBLs耐药质粒的DNA扩展和基因型分析,利用SPSS19.0软件对产ESBLs菌株与非产ESBLs菌株的耐药情况进行差异显著性分析。【结果】83.13%（207/249）的鸡源大肠杆菌菌株产ESBLs;产ESBLs菌株对7种抗菌药的耐药率高于非产ESBLs菌株,其中对庆大霉素、大观霉素、氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻呋等5种药物差异显著（P＜0.05）,而产ESBLs菌株对四环素和氟苯尼考2种抗菌药的耐药率显著低于非产ESBLs菌株;产ESBLs菌株多重耐药程度显著高于非产ESBLs菌株,其多重耐药率分别为99.03%和92.86%（P=0.035）;CTX-M型、TEM型和OXA型ESBLs菌株的检出率分别为100.00%、99.52%和47.83%,未检测出SHV型ESBLs菌株;产酶菌株分属于10个基因亚型,TEM-1型、CTX-M-65型和CTX-M-55型、OXA-1型是优势基因亚型,并首次从健康家禽中检测到基因重组嵌合体CTX-M-123和CTX-M-64。【结论】产ESBLs鸡源大肠杆菌菌株在青岛地区广泛流行和传播;产ESBLs菌株耐药相对非产ESBLs菌株严重;相比国内其它地区,CTX-M型和TEM型同样成为青岛地区产ESBLs鸡源大肠杆菌菌株的流行基因型,但基因亚型存在差异,TEM-1型、CTX-M-65型和CTX-M-55型、OXA-1型分别是各基因型的优势基因亚型。     

透骨草水提物与抗菌药对产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的体外联合抑菌作用研究

为了探究透骨草水提物与抗菌药联合对产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的体外抑菌作用。采用二倍微量肉汤稀释法与微量方阵棋盘法来测定各抗菌药与透骨草的最低抑菌浓度(MIC)及二者联合作用后的分级抑菌浓度指数(FICI)。结果显示,透骨草水提物与头孢曲松钠、头孢他啶、头孢噻肟钠、头孢噻呋钠、阿莫西林、阿米卡星、阿奇霉素、磷霉素、黏杆菌素、磺胺间甲氧嘧啶、利福平、环丙沙星、诺氟沙星、左旋氧氟沙星、痢菌净、林可霉素联合作用后的FICI分别为0.75、0.75、1.00、0.75、0.53、0.51、0.75、4.5、4.5、4.5、4.5、2.5。结果表明,透骨草水提物与头孢曲松钠、头孢他啶、头孢噻肟钠、头孢噻呋钠、阿莫西林、阿米卡星、阿奇霉素、磷霉素、黏杆菌素、磺胺间甲氧嘧啶、利福平联合作用时有相加作用;与环丙沙星、诺氟沙星、左旋氧氟沙星、痢菌净、林可霉素联合作用时有颉颃作用。     

青海地区畜禽源志贺菌产超广谱β-内酰胺酶和头孢菌素酶表型检测及基因型分析

为了解青海省不同动物源志贺菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC)的基因型分布情况,对75株志贺菌进行表型筛选,PCR法确定其ESBLs和AmpC酶基因型.结果:酶表型筛选呈阳性菌株共50株,其中:1株为单产ESBLs阳性菌,42株为单产AmpC酶阳性菌,7株同时产ESBLs和AmpC酶.40株携带...     

泵抑制剂对诱导产ESBLs鸡大肠杆菌抗菌药物敏感性的影响

目的:探讨头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻呋诱导鸡源大肠杆菌耐药产ESBLs与主动外排机制的关系。方法:用头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻呋诱导3株临床分离菌和标准菌O78至产ESBLs;采用琼脂二倍稀释法观察外排泵抑制剂利血平和CCCP对诱导菌抗菌药物敏感性的影响。结果:加入利血平后,头孢曲松诱导后的菌株,阿米卡星、氟苯尼考、磷霉素组的MIC值变化有统计学差异,耐药率下降范围为25%～75%;头孢噻肟诱导后的菌株,头孢曲松、头孢噻呋、多西环素、氟苯尼考、磷霉素组MIC值变化有统计学差异,耐药率下降为25%～100%;头孢噻呋诱导后的菌株,其中头孢曲松、头孢噻呋、阿米卡星、氟苯尼考、磷霉素有统计学差异,耐药率下降为25%～100%。加入CCCP以后,仅头孢噻肟诱导后的菌株,头孢曲松MIC值变化差异显著;头孢噻呋诱导的菌株,头孢曲松、氟苯尼考差异显著;且耐药率下降范围均为25%～75%;利血平与抗菌药物合用后对诱导菌抗菌药物敏感性的影响高于CCCP。结论:3种头孢类药物诱导后的菌株对10种抗菌药物的外排表型存在差异;鸡大肠杆菌特异性耐药机制ESBLs可激活非特异性耐药机制外排表型的过度表达。     

氟苯尼考联合用药对产ESBLs鸡大肠杆菌抗菌活性的影响

为测定氟苯尼考联合用药对临床分离产ESBLs鸡大肠杆菌的抗菌活性的影响,采用纸片扩散法检测ESBLs菌,并用微量液体2倍稀释法测定单独使用氟苯尼考、黏菌素、头孢噻呋、阿米卡星、多西环素、痢菌净、磷霉素,以及氟苯尼考与上述6种药物不同比例联合使用时对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC).结果发现,临床分离的7株大肠杆菌均产ESBLs,对氟苯尼考、头孢噻呋、痢菌净耐药率高达100%,对阿米卡星、多西环素、磷霉素的耐药率分别为71%、57%、57%.氟苯尼考与黏菌素、阿米卡星、多西环素、痢菌净联合使用时,抗菌活性有所提高,氟苯尼考与多西环素以1:2比例复配时,MIC值下降幅度最大.     

兽医临床致病性大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测

[目的]指导临床合理用药,控制兽医临床的感染性疾病。[方法]用分子生物学方法对用双纸片协同法检测产生ESBLs的5株猪鸡致病性大肠杆菌进行了ESBLs的检测。[结果]产生ESBLs的猪鸡致病性大肠杆菌中都扩增出了TEM型引物。[结论]双纸片协同法检测ESBLs具有较高的可靠性,兽医临床大肠杆菌已经产生ESBLs。